一种分布酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，将复原羊乳冷却离心去脂，得到脱脂乳，脱脂乳用等电点沉淀法制备酪蛋白，酪蛋白先用Alcalase进行水解，通过水解条件的优化得到含ACE抑制肽的水解液，并以此为底物，通过中性蛋白酶和胰蛋白酶水解条件的优化，获得具有高ACE抑制活性的小分子肽；本方法制备的ACE抑制肽产品的抑制比例能够达到90%以上，具有ACE抑制肽种类多、片段小，有利于小分子肽的分离纯化，且抑制比例高的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种分步酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法。
技术介绍
高血压是最常见的心血管疾病之一，常引起心、脑、肾并发症，是脑卒中冠心病的主要危险因素。高血压是指在未使用降压药物的情况下，收缩压> HOmmHg和(或)舒张压彡90mmHg的情形。据国家高血压研究中心最新统计，我国高血压患者已达1.2亿人，发病率为10.8%，其危害程度仅次于肿瘤，已成为危害人类健康的第二号杀手。根据世界卫生组织预测，至2020年，非传染性疾病将占我国死亡原因的79%，其中心血管病将占首位。每降低5mmHg收缩压，患心血管疾病的风险就降低16%。目前，常用于抗高血压药物治疗的主要有6种降压药物，分别是利尿剂、α-受体拮抗剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂和α -肾上腺素受体阻滞剂。这些降血压药物虽然有显著的降压效果，但却存在一定的毒副作用，如咳嗽、过敏性血管水肿及肾功能不全加重等。血管紧张素转换酶(angiotensin - eonverting enzyme, ACE)在血压调节中起重要作用，经碳端两个氨基酸(His-Leu)的切除，能够把原本无活性的血管紧张素I转变为具有活性的血管紧张素II，引起血管收缩，使血压上升；ACE还会使具有血管舒张功能的舒缓激肤失活，同样又引起血压上升的情形，ACE抑制肤能够阻断ACE引起的两种生化反应过程，起降血压作用。ACE的制备方法主要有5种:化学降解法、酶解法、微生物发酵法、化学合成法和基因工程法，现在研究最多的是酶解法和微生物发酵法。相对于微生物发酵法，酶法反应快速，制备ACE抑制肽抑制活性高，且原料广泛，主要有乳类蛋白、植物类蛋白及动物类蛋白，但目前乳源ACE抑制肽主要是以牛乳为原料，对羊乳尚未涉及到。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种分步酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，酪蛋白经过超声波处理，结构发生变化，再通过复合酶解的方法使水解反应更彻底，更迅速。为了达到上述目的，本专利技术采取的技术方案为:一种分布酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤:步骤1:将复原羊乳冷却到4°C,使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪，得到脱脂乳； 步骤2:将所得脱脂乳在35_75°C范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0-1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的pH值为4.2-5.0,再使用高速离心机在6400rpm下离心15min将酪蛋白进行沉淀,弃去上清液,将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为_40°C下预冻12h，再转移到冷冻干燥机在-55°C下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白得率；步骤3:将所得酪蛋白冻干粉与纯净水混合，制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液，用180w的超声波预处理60min ；步骤4:从所得酪蛋白溶液中取出100ml，在45_65°C的恒温水浴箱中进行保温，滴入lmol/1的NaOH溶液，使酪蛋白溶液的pH值为6.5-8.5 ;按照酶与底物质量比为2_10:100的比例，加入碱性酶Alcalase,水解l_3h时；水解过程中，每间隔0.5h取5ml水解液,在900C的恒温水浴箱中保持lOmin，使碱性酶Alcalase失活，然后使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性；步骤5:将所得上清液吸取50ml，在35_55°C的恒温水浴箱中进行保温，滴入Imol/I的NaOH溶液，使该溶液的pH值为7.0-9.0，再分别加入质量比为1: 1、1: 2、2: 1、4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶与底物质量比为2-10:100，水解5h ;水解过程中，每间隔Ih取5ml水解液，在90°C的恒温水浴箱中保持lOmin，使碱性酶Alcalase失活，使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min,除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性，并对上清液·进行冷冻干燥，得到ACE抑制肽。所述复原羊乳为羊奶粉与纯净水按照质量比例1:9进行混合溶解所得到的溶液。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为:本专利技术采用分布酶解的方法对酪蛋白进行水解，首先Alcalase酶作用于超声波处理过的酪蛋白，得到含高活性ACE抑制肽的水解液，用中性蛋白酶和胰蛋白酶对水解液再次水解，使未水解完全的酪蛋白彻底水解。不同酶在不同时间段对酪蛋白作用于不同的部位，生成的ACE抑制肽种类更多，片段更小，有利于小分子肽的分离纯化。本专利技术制备的ACE抑制肽产品其抑制比例能够达到90%以上。将其作为功能因子添加到各类食品中，对高血压患者具有降压作用，而且性质温和并对正常血压的人无作用，它还具有免疫活性、促进消化吸收并具有减肥等多种功效。具体实施例方式下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明。一种分布酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤:步骤1:将复原羊乳冷却到4°C,使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪，得到脱脂乳；步骤2:将所得脱脂乳在35_75°C范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0-1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的pH值为4.2-5.0,使用高速离心机在6400rpm下离心15min将酪蛋白进行沉淀,弃去上清液,将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为_40°C预冻12h，再转移到冷冻干燥机在-55°C下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白得率；所述脱脂乳在温度为45°C，pH值为4.5，搅拌强度为800rpm的条件下，酪蛋白得率最大，达到11.88%。步骤3:将所得酪蛋白冻干粉与纯净水混合，制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液，用180w的超声波预处理60min ；步骤4:从所得酪蛋白溶液中取出100ml，在45_65°C的恒温水浴箱中进行保温，滴入lmol/1的NaOH溶液，使酪蛋白溶液的pH值为6.5-8.5 ;按照酶与底物质量比为2_10:100的比例(酶用量[E] / [S] =2%-10%)，加入碱性酶Alcalase，水解l_3h时；水解过程中，每间隔0.5h取5ml水解液，在90°C的恒温水浴箱中保持lOmin，使碱性酶Alcalase失活，然后使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min,除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性；在八1(^1&%酶用量为[E]/[S]=6%，温度为50°C、pH值为8.0、水解时间2.5h的条件下，ACE抑制率达到最大，为88.32%。步骤5:将所得上清液吸取50ml，在35_55°C的恒温水浴箱中进行保温，滴入Imol/I的NaOH溶液，使该溶液的pH值为7.0-9.0，分别加入质量比为1: 1、1: 2、2: 1、4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶与底物质量比为2-10:100 (酶总用量[E]/[S]=2%-10%)，水解5h ;水解过程中，每间隔Ih取5ml水解液，在90°C的恒温水浴箱中保持lOmin，使碱性酶Alcalase失活,使用本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分布酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：将复原羊乳冷却到4℃，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪，得到脱脂乳；步骤2：将所得脱脂乳在35?75℃范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0?1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的pH值为4.2?5.0，使用高速离心机在6400rpm下离心15min将酪蛋白进行沉淀，弃去上清液，将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为?40℃预冻12h，再转移到冷冻干燥机在?55℃下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白得率；步骤3：将所得酪蛋白冻干粉与纯净水混合，制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液，用180w的超声波预处理60min。步骤4：从所得酪蛋白溶液中取出100ml，在45?65℃的恒温水浴箱中进行保温，滴入1mol/l的NaOH溶液，使酪蛋白溶液的pH值为6.5?8.5；按照酶与底物质量比为2?10:100的比例，加入碱性酶Alcalase，水解1?3h时；水解过程中，每间隔0.5h取5ml水解液，在90℃的恒温水浴箱中保持10min，使碱性酶Alcalase失活，然后使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性；步骤5：将所得上清液吸取50ml，在35?55℃的恒温水浴箱中进 行保温，滴入1mol/l的NaOH溶液，使该溶液的pH值为7.0?9.0，分别加入质量比为1:1、1:2、2:1、4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶与底物质量比为2?10：100，水解5h；水解过程中，每间隔1h取5ml水解液，在90℃的恒温水浴箱中保持10min，使碱性酶Alcalase失活，使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性，并对上清液进行冷冻干燥，得到ACE抑制肽。...
【技术特征摘要】
1.一种分布酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤1:将复原羊乳冷却到4°C,使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪，得到脱脂乳； 步骤2:将所得脱脂乳在35-75°C范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0-1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的pH值为4.2-5.0,使用高速离心机在6400rpm下离心15min将酪蛋白进行沉淀,弃去上清液,将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为_40°C预冻12h，再转移到冷冻干燥机在-55°C下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白得率； 步骤3:将所得酪蛋白冻干粉与纯净水混合，制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液，用180w的超声波预处理60min。步骤4:从所得酪蛋白溶液中取出100ml，在45-65°C的恒温水浴箱中进行保温，滴入lmol/1的NaOH溶液，使酪蛋白溶液的pH值为6.5-8.5 ;按照酶与底物质量比为2_10:100的比例，加入碱性酶Alcalase，水解l_3...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈合，王娟，舒国伟，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：
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