一种复合酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，它以复原羊乳为原料，将其离心脱脂，并用等电点沉淀法制备酪蛋白，在特定的温度和PH条件下，将酪蛋白通过中性蛋白酶和胰蛋白酶进行复合水解，并对水解条件进行优化，用超声波对水解过程进行处理，得到的小分子ACE抑制肽并测定其活性，本发明专利技术制备的ACE抑制肽产品抑制比例达到80%以上，其分子质量小，在小肠内可以以完整肽段的形式被人体吸收，不会引起人体的免疫排斥反应，能够对高血压患者产生显著的降压作用，且对血压正常的人无作用，具有用量小、无毒副作用、性质温和、生理功能强的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及酶法制备ACE抑制肽
，特别涉及一种复合酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法。
技术介绍
目前我国人群中高血压患病率呈增长态势，每10个成人中就有2人患高血压，估计目前全国高血压患者至少2亿，但高血压知晓率、治疗率和控制率较低。高血压是脑卒中和冠状动脉性心脏病(冠心病)发病及死亡的主要危险因素，控制高血压可预防心脑血管疾病的发病及死亡。目前，常用于高血压治疗的主要有6种的降压药物，分别是利尿剂、α-受体拮抗齐 、钙通道阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂α -肾上腺素受体阻滞剂。这些降血压药物虽然有显著的降压效果，但却存在一定的毒副作用，如引起咳嗽、过敏性血管水肿及肾功能不全加重等。有研究报道将食物蛋白质进行水解后形成的小分子多肽，即血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽，具有显著的降血压作用，将它与普通降压药物进行比较，发现无毒副作用，并且对正常的血压无影响。血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme, ACE)是一种膜结合的二肽羧基酶 ，是一种糖蛋白，含有维持其活性所必需的Zn2+和Cl_，广泛存在于人体组织及血浆中，在肺毛细管内皮细胞的含量最为丰富，它对血压的调节作用主要依靠肾素-血管紧张素系统(RAS)和激肽释放酶-激肽系统(KKS)。在血压调节方面，RAS和KKS是一对相互拮抗的体系，维持其平衡有重要作用，平衡一旦失调就会引起高血压的发病，而在RAS和KKS系统中ACE对血压调节起至关重要的作用，因此抑制ACE的活性对降低血压具有很重要的作用。ACE的制备方法主要有5种:化学降解法、酶解法、微生物发酵法、化学合成法和基因工程法，现在研究最多的是酶解法和微生物发酵法。相对于微生物发酵法，酶法反应快速，制备ACE抑制肽抑制活性高，且原料广泛，主要有乳类蛋白、植物类蛋白及动物类蛋白，但目前乳源ACE抑制肽主要是以牛乳为原料，对羊乳尚未涉及到。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种复合酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，制备的ACE抑制肽抑制活性高，能够对高血压患者产生显著的降压作用，且对血压正常的人无作用，具有用量小、无毒副作用、性质温和、生理功能强的特点。为了达到上述目的，本专利技术采取的技术方案为:一种复合酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，步骤如下:步骤1:将羊奶粉与水按照质量比例1:9进行混合溶解，将得到的复原羊乳冷却到4°C,使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪,得到脱脂乳；步骤2:将所得脱脂乳在35_75°C范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0-1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的PH达到4.2-5.0，酪蛋白进行沉淀，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，弃去上清液，将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为_40°C预冻12-24h，再转移到冷冻干燥机在-55°C下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白最大得率及条件；步骤3:将上述步骤所得酪蛋白冻干粉制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液100ml，放置恒温水浴箱内，调整温度在35-55°C范围内，滴加Imol/lNaOH溶液，调节酪蛋白溶液PH在7.0-9.0范围内；步骤4:向酪蛋白溶液中加入质量比为1:1或1:2或2:1或4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶总量与酪蛋白溶液的质量比为2-10:100，进行水解反应2-5h，每间隔Ih将5ml水解液在90°C水浴中保持IOmin使酶失活，使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性，并对上清液进行冷冻干燥；步骤5:在确定最佳水解条件的基础上，检测在不同超声功率(0、90、180、225w)条件下对水解反应的影响，测定ACE抑制活性。本专利技术采用的一种复合酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，将中性蛋白酶和胰蛋白酶两种酶同时作用于酪蛋白，使水解反应更彻底、更迅速，生成的ACE抑制肽抑制活性更高；将超声波作用于水解过程中，具有加强酪蛋白水解，利于ACE抑制肽生成。本专利技术通过复合酶解制备的ACE抑制肽产品为乳白色粉状物，其抑制比例达到80%以上，将其作为功能因子添加到各类食品中，对高血压患者具有显著的降压作用，而且性质温和并对血压正常的人无作用；其分子质量小，在小肠内可以以完整肽段的形式被人体吸收，不会引起人体的免疫排斥反应，具有用量小、无毒副作用、性质温和、生理功能强的特点。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例一:步骤1:将羊奶粉与水按照质量比例1:9进行混合溶解，将得到的复原羊乳冷却到4°C,使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪,得到脱脂乳；步骤2:将所得脱脂乳在35°C的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的PH达到4.6，酪蛋白进行沉淀，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后,弃去上清液,将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为_40°C预冻24h，再转移到冷冻干燥机在_55°C下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定得到当脱脂乳在35°C，PH为4.6，搅拌速度为SOOrpm条件下，酪蛋白得率最大，达到9.23%。实施例二:步骤1:将羊奶粉与水按照质量比例1:9进行混合溶解，将得到的复原羊乳冷却到4°C,使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪,得到脱脂乳；步骤2:将所得脱脂乳在45°C的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的PH达到4.5，酪蛋白进行沉淀，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后,弃去上清液,将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为_40°C预冻18h，再转移到冷冻干燥机在_55°C下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定得到当脱脂乳在45°〇，？!1为4.5，搅拌速度为SOOrpm条件下，酪蛋白得率最大，达到11.88%；步骤3:将上述步骤所得酪蛋白冻干粉制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液100ml，放置恒温水浴箱内，调整温度在35°C，滴加Imol/lNaOH溶液，调节酪蛋白溶液PH为7.0 ;步骤4:向酪蛋白溶液中加入质量比为1:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶总量与酪蛋白溶液的质量比为4:100，进行水解反应3h，每间隔Ih将5ml水解液在90°C水浴中保持IOmin使酶失活，使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性为89.28%，并对上清液进行冷冻干燥。 实施例三:步骤1:将羊奶粉与水按照质量比例1:9进行混合溶解，将得到的复原羊乳冷却到4°C,使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪,得到脱脂乳；步骤2:将所得脱脂乳在45°C的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的PH达到4.5，酪蛋白进行沉淀，使本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种复合酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：?步骤1：将羊奶粉与水按照质量比例1:9进行混合溶解，将得到的复原羊乳冷却到4℃，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪，得到脱脂乳；?步骤2：将所得脱脂乳在35?75℃范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0?1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的PH达到4.2?5.0，酪蛋白进行沉淀，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，弃去上清液，将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为?40℃预冻12?24h，再转移到冷冻干燥机在?55℃下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白最大得率及条件；?步骤3：将上述步骤所得酪蛋白冻干粉制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液100ml，放置恒温水浴箱内，调整温度在35?55℃范围内，滴加1mol/lNaOH溶液，调节酪蛋白溶液PH在7.0?9.0范围内；?步骤4：向酪蛋白溶液中加入质量比为1:1或1:2或2:1或4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶总量与酪蛋白溶液的质量比为2?10：100，进行水解反应2?5h，每间隔1h将5ml水解液在90℃水浴中保持10min使酶失活，使用高速离心机在9000rpm的条件下离心?20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性，并对上清液进行冷冻干燥；?步骤5：在确定最佳水解条件的基础上，检测在不同超声功率（0、90、180、225w）条件下对水解反应的影响，测定ACE抑制活性。...
【技术特征摘要】
1.一种复合酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括如下步骤: 步骤1:将羊奶粉与水按照质量比例1:9进行混合溶解，将得到的复原羊乳冷却到4°C，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪,得到脱脂乳； 步骤2:将所得脱脂乳在35-75°C范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0-1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的PH达到4.2-5.0,酪蛋白进行沉淀，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，弃去上清液，将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为_40°C预冻12-24h，再转移到冷冻干燥机在-55°C下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白最大得率及条件； 步骤3:将上述步骤所得酪蛋白冻干粉制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液100ml，放置恒温水浴箱内，调整温度在35-55°C范围内，滴加Imol/lNaOH溶液，调节酪蛋白溶液PH在7.0-9.0范围内； 步骤4:向酪蛋白溶液中加入质量比为1:1或1:2或2:1或4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶总量与酪蛋白溶液的质量比为2-10:100，进行水解反应2-5h，每间隔Ih将5ml水解液在90°C水浴中保持IOmin使酶失活，使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min,除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性，并对上清液进行冷冻干燥； 步骤5:在确定最佳水解条件的基础上，检测在不同超声功率(0、90、180、225w)条件下对水解反应的影响，测定ACE抑制活性。2.根据权利要求1所述的一种复合酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括如下步骤: 步骤1:将羊奶粉与水按照质量比例1:9进行混合溶解，将得到的复原羊乳冷却到4°C，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪,得到脱脂乳； 步骤2:将所得脱脂乳在35°C的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的PH达到4.6，酪蛋白进行沉淀，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后,弃去上清液,将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为_40°C预冻24h，再转移到冷冻干燥机在_55°C下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定得到当脱脂乳在35°C，PH为4.6，搅拌速度为SOOrpm条件下，酪蛋白得率最大，达到9.23%。3.根据权利要求1所述的一种复合酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括如下步骤: 步骤1:将羊奶粉与水按照质量比例1:9进行混合溶解，将得到的复原羊乳冷却到4°C，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪,得到脱脂乳； 步骤2:将所得脱脂乳在45°C的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的PH达到4.5，酪蛋白进行沉淀，使用高...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈合，王娟，舒国伟，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。