转谷氨酰胺酶介导的肽的接合制造技术

提供使肽接合的方法，包括i)在有能够将所述化合物掺入到肽中的转谷氨酰胺酶存在的条件下，使肽与含官能团的第一化合物反应，形成氨基转移肽，并ii)使所述氨基转移肽与，例如，能够与在酶反应中掺入到肽中的官能团反应的官能化聚合物反应。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于肽翻译后接合的新方法，其中转谷氨酰胺酶用于在肽中掺入可选择性连接另一基团的连接点。所述接合肽的特性发生了改变且因此用于治疗性应用或它们可使所述肽的分析或分离和纯化更为容易。
技术介绍
通过将改变肽的性质的基团与肽接合而修饰肽的性质和特性是熟知的。这种接合通常要求肽中的一些官能团与接合基团中的另一官能团反应。通常，氨基，如N-末端氨基或赖氨酸中的ε-氨基已经与适宜的酰化试剂联合使用。常常需要甚或要求能够控制接合反应，即控制在哪里连接接合化合物和控制连接多少接合基团。这通常被称作特异性。本专利技术的目的是提供一种可以高度特异性使肽接合的方法。一般而言，该方法利用能够将含适宜官能团的化合物掺入到肽中的酶，例如，转谷氨酰胺酶，其中所述官能团随后被用作接合点。长时间以来，已经大体知晓了肽的接合，且US4，179，337在20多年前已公开了与聚乙二醇或聚丙二醇接合的肽。已经公开了不同类型的化学过程，其对于在肽和与肽接合的部分之间形成键是有效的。ΕΡ605963公开了将与醛基团形成肟键的含水聚合物移植到蛋白上。天然氨基酸均不含醛，因此在接合过程的第一步中羟基须被氧化。W096/41813公开了被用于接合反应中的氨基-氧肟形成基团官能化的聚合物。W098/05363公开了含肽和水溶性聚合物的化合物，其中两者通过N-末端氨基酸残基的肟键共价键合。此外，已知酶的使用能够更特异性使肽接合。ΕΡ243929公开了使用蛋白酶，如羧肽酶将具有官能团的化合物掺入到肽的C-末端中，其中所述官能团可随后被用作与帮助肽分析的细胞毒素基团，其它肽或报道基团，如荧光基团连接的点。然而，该技术限制了与C-末端氨基酸残基连接的点，如果C-末端残基对于肽的活性而言很重要，则有时构成严重的限制。转谷氨酰胺酶先前已经用于改变肽的性质。在食品工业且特别是牛奶工业中，许多技术都是可利用的，例如，使用转谷氨酰胺酶使肽交叉结合。其它文献公开了使用转谷氨酰胺酶改变生理学活性肽的性质。ΕΡ950665、ΕΡ785276和Sato, Adv.DrugDelivery Rev.，54，487-504，2002公开了在有转谷氨酰胺酶存在的条件下，含有至少一个Gln的肽与胺-官能化的PEG或相似配体之间的直接反应，且Wada在Biotech.Lett.,23, 1367-1372, 2001中公开了利用转谷氨酰胺酶使β _乳球蛋白与脂肪酸直接接合 ο专利技术概述本专利技术人吃惊地发现酶，如转谷氨酰胺酶可用于在肽中掺入一个或多个肽中不易接近的官能团，从而形成官能化肽，且发现该官能化肽可随后与另一化合物反应，所述另一化合物含有接合部分和一个或多个能够与掺入到肽中的一个或多个官能团反应，但不与存在于肽中的其它官能团反应的官能团。这类方法能够提供高度特异性，因为转谷氨酰胺酶可仅催化在作为转谷氨酰胺酶底物的氨基酸残基处掺入化合物，且对官能团进行了选择，使它们仅彼此反应，而不与肽中可接近的其它官能团反应。以这种方式，接合部分仅在可控的部位或地方连接，且通过选择官能团，可控制接合基团的数目。因此在其中一个实施方案中，本专利技术人提供一种使肽接合的方法，所述方法包括下列步骤i)在一个或多个步骤中，在能够催化第一化合物掺入到所述肽中的转谷氨酰胺酶存在的条件下，使肽与含一个或多个构成所述肽的任意氨基酸残基中不易接近的官能团或潜在官能团的所述第一化合物反应，从而形成官能化肽；和ii)任选活化所述潜在官能团；和iii)在一个或多个步骤中，使所述官能化肽与含一个或多个官能团的第二化合物反应，其中所述官能团不与构成所述肽的氨基酸残基中易接近的官能团反应，且其中所述第二化合物中的所述官能团能够与所述第一化合物中的所述官能团反应，从而在所述官能化肽与所述第二化合物之间形成共价键。本专利技术的目的是提供通过本专利技术方法接合的肽。本专利技术另一目的提供以某种方式被修饰，从而更适于本专利技术方法的肽。本专利技术另一目 的是提供适用于本专利技术方法中的试剂和酶。本专利技术另一目的提供含有通过本专利技术方法接合的肽的组合物，例如药物组合物。本专利技术另一目的提供用于治疗的根据本专利技术方法接合的肽。本专利技术另一目的提供用于疾病治疗的治疗方法，包括给予根据本专利技术方法制备的接合肽。本专利技术另一目的提供根据本专利技术方法制备的接合肽在制备药物中的用途。本专利技术另一目的提供一种通过根据本专利技术方法使所述肽接合而改进肽的药理学性质的方法。定义在本文中，“氨基转移”或类似说法表示谷氨酰胺侧链中的氮与来源于另一化合物的氮，特别是来源于另一含氮亲核试剂的氮交换的反应。在本文中，术语“不易接近”表示缺少或某种意义上讲事实上缺少某物，使得其不能接近。当官能团在待接合的肽中不易接近时，表示该肽缺少所述官能团或，如果存在，在某些情况下，被屏敝参与反应。作为举例，所述官能团可被隐藏在肽结构中，从而被阻碍参与反应，或它可位于肽链的被受限柔性阻碍官能团参与反应的肽区域中。应认识到官能团是否易接近取决于反应条件。可预期在有变性剂存在的条件下或在高温条件下，肽可伸展从而使不易接近的官能团暴露出来。应了解“不易接近”是指“在根据特定的目标反应选择的反应条件下不易接近”。在本文中，术语“肟键”表示式-C=N-O-的部分。在本文中，术语“腙键”表示式-C=N-N-的部分。在本文中，术语“苯腙键”表示式本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使肽接合的方法，所述方法包括下列步骤iv)在一个或多个步骤中，在能够催化第一化合物掺入到所述肽中的转谷氨酰胺酶存在的条件下，使肽与含一个或多个构成所述肽的任意氨基酸残基中不易接近的官能团或潜在官能团的所述第一化合物反应，从而形成官能化肽；和v)任选活化所述潜在官能团；和vi)在一个或多个步骤中，使所述官能化肽与含一个或多个官能团的第二化合物反应，其中所述官能团不与构成所述肽的氨基酸残基中的易接近官能团反应，且其中所述第二化合物中的所述官能团能够与所述第一化合物中的所述官能团反应，从而在所述官能化肽与所述第二化合物之间形成共价键。

【技术特征摘要】
2004.01.21 DK PA2004000761.一种使肽接合的方法，所述方法包括下列步骤 iv)在一个或多个步骤中，在能够催化第一化合物掺入到所述肽中的转谷氨酰胺酶存在的条件下，使肽与含一个或多个构成所述肽的任意氨基酸残基中不易接近的官能团或潜在官能团的所述第一化合物反应，从而形成官能化肽；和V)任选活化所述潜在官能团；和 vi)在一个或多个步骤中，使所述官能化肽与含一个或多个官能团的第二化合物反应，其中所述官能团不与构成所述肽的氨基酸残基中的易接近官能团反应，且其中所述第二化合物中的所述官能团能够与所述第一化合物中的所述官能团反应，从而在所述官能化肽与所述第二化合物之间形成共价键。2.根据权利要求1所述的方法，其中在一个或多个步骤中，在有转谷氨酰胺酶存在的条件下，使由下式代表的含Gln-残基的肽3.根据权利要求2所述的方法，其中A代表肟、腙、苯腙、缩氨基脲、三唑或异鳴唑烷部分。4.根据权利要求2-3任何一项所述的方法，其中包含在X中的官能团或潜在官能团选自或可被活化成酮 _、醛-、-NH-NH2、-O-C(O) -NH-NH2^-NH-C(O) -NH-NH2^-NH-C(S) -NH-NH2,-NHC (O) -NH-NH-C (O) -NH-NH2、-NH-NH-C (O) -NH-NH2、-NH-NH-C (S) -NH-NH2、-NH-C (O) -C6H4-NH-NH2、-C (O) -NH-NH2、- O-NH2、-C (O) -O-NH2、-NH-C (O) -O-NH2、-NH-C (S) -O-NH2、炔、叠氮化物或氧化腈。5.根据权利要求2-4任何一项所述的方法，其中存在于Y中的官能团选自酮_、醛-、_NH-NH2、-O-C (O) -NH-NH2、-NH-C (O) -NH-NH2、-NH-C (S) -NH-NH2、-NHC (O) -NH-NH-C (O) -NH-NH2、-NH-NH-C (O) -NH-NH2、-NH-NH-C (S) -NH-NH2、-NH-C (O) -C6H4-NH-NH2、-C (O) -NH-NH2、- O-NH2、-C (O) -O-NH2> -NH-C (O) -O-NH2> -NH-C (S) -O-NH2、块、叠氣化物和氧化臆。6.根据权利要求2-5任何一项所述的方法，其中X选自或可被活化成酮-或醛-衍生物，且 Y 选自-NH-NH2、-O-C (O)-NH-NH2、-NH-C (O)-NH-NH2、-NH-C(S) -NH-NH2, -NHC (O)-NH-NH-C (O) -NH-NH2、-NH-NH-C (O) -NH-NH2、-NH-NH-C (S) -NH-NH2、-NH-C (O) -C6H4-NH-NH2、-C (O) -NH-N...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·L·乔安森，M·桑德尔，F·Z·多沃尔德，
申请(专利权)人：诺和诺德医疗保健公司，
类型：发明
国别省市：