一种海洋细菌新型酯酶及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种海洋细菌新型酯酶以及利用该酯酶手性催化3-(4-氟苯基)戊二酸二甲酯生产药物中间体(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯的方法。将该酯酶基因克隆到表达质粒，转化大肠杆菌Rosetta。由于该酶能在表达菌株中高度可溶性表达，并且表现出良好的耐盐，耐碱，及手性选择性，因此可以作为工业化生产抗抑郁药物中间体(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯的潜在用酶。通过对其反应条件的优化，可以利用该酶催化3-(4-氟苯基)戊二酸二甲酯进而生产药物中间体(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯，使其转化率和手性选择性大大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种海洋细菌新型酯酶及其制备方法与应用。具体的说，涉及海洋细菌Pelagibacterium halotolerans B2T中酯酶基因pe8及利用该酯酶手型催化3_ (4_氟苯基)戊二酸二甲酯生产药物中间体(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯的方法。
技术介绍
光学纯的(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯是一系列重要医药中间体的前体。其中最具代表性的是左旋帕罗西汀盐酸盐。它可以使突触间隙中的5-羟色胺(5-HT)浓度增高，发挥抗抑郁作用，对其它递质作用较弱，对植物神经系统和心血管系统的影响较小，作为选择性中枢神经5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂(SSRI)。临床上被广泛应用于治疗抑郁症，强迫症，惊恐障碍或社交焦虑障碍等疾病。近年来，抗抑郁药物帕罗西汀在国内外的市场需求与日俱增，其合成方法也在全球备受关注。因此，探索其简便，高效经济的制备方法成为科学界十分活跃的课题。合成的方法有化学法和酶法，而酶法由于它的高效、绿色和环保等优点成为研究的首选。Yu 等(TetRahedRon Lett.41 (2000)，5647-5651.)用猪肝脏酯酶选择性水解3-(4-氟本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酯酶PE8蛋白，是具有如下（1）或（2）特征的蛋白质：?（1）、其氨基酸序列与Seq?ID?NO.2所示序列一致；?（2）、将Seq?ID?NO.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加且具有酯酶PE8酶活性的由（1）衍生的突变体。

【技术特征摘要】
1.一种酯酶PE8蛋白，是具有如下(I)或(2)特征的蛋白质: (1)、其氨基酸序列与SeqID N0.2所示序列一致； (2)、将SeqID N0.2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加且具有酯酶PE8酶活性的由(I)衍生的突变体。2.编码权利要求1所述的酯酶PE8蛋白的pe8基因，其核苷酸序列如SEQID N0.1所示；或为对SEQ ID N0.1所示的核苷酸序列进行替换、添加和/或缺失一个或几个核苷酸从而获得编码能基本保留酯酶PE8蛋白生物学活性的pe8突变基因。3.携带有权利要求2所述基因的载体。4.一种宿主，其由权利要求3所述的载体经转化或转染原核生物或真核生物宿主得到。5.一种利用权利要求1所述的酯酶PE8生产(R) - 3 - (4 -氟苯基)戊二酸单甲酯的方法，包括以下步骤: (1)、利用酯酶PE8选择性水解3-(4-氟苯基)戊二酸二甲酯制备(R)- 3 - (4 -氟苯基)戊二酸单甲酯，其反应方程式为:6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于:所述的酯酶PE8在反应体系中的浓度范围为 1- ...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴月红，江夏薇，许学伟，魏笑莲，王春生，吴敏，
申请(专利权)人：国家海洋局第二海洋研究所，
类型：发明
国别省市：