白细胞的纯化制造技术

公开了一种用于纯化白细胞的方法。该方法还能包括回收被纯化的白细胞或溶解被纯化的白细胞。

Purification of white blood cells

A method for purifying white blood cells is disclosed. The method may also include the recovery of purified leukocytes or the dissolution of purified leukocytes.

【技术实现步骤摘要】

白细胞(也称为白血球)在很多应用(包括细胞疗法和诊断)中是有益的。白细胞能从例如(从供血者获得的)脐带血或血液获得。
技术介绍
通常，包括白细胞的脐带血浓缩液和干细胞浓缩液被存放在液氮环境下，其中，这些浓缩液包括冷冻保护剂二甲基亚砜(DMS0)，以在存放过程中保护白细胞免受损害。包括DMSO的浓缩液能对患者使用(administer),但是由于DMSO能被看作杂质,一些方案包括离心分离和洗涤浓缩液，以在给患者使用之前减少存在于浓缩液产品中的DMS0。这些方案是费力的而且费时。用于获得白细胞的一些方法包括:使血液或血液制品经过多孔的白细胞滤除介质(meidium);和洗脱来自介质的白细胞(这是通过使洗脱液从介质的下游表面经过上游表面而进行的)，或者溶解在介质上的白细胞(这是在迫使盐水从上游表面穿过下游表面而经过介质或迫使空气从上游表面穿过下游表面而经过介质之后进行的)。但是，这些方法导致所含杂质(例如存在红细胞(也称为红血球))的程度不理想，和/或导致白细胞的产生量低于希望。本专利技术提供了对现有技术中的至少一些缺陷的改进。根据下面描述的说明书，本专利技术的这些和其他优点将变得明显。
技术实现思路
本专利技术的实施 例提供了用于纯化白细胞的方法，该方法包括:(a)使包含白细胞的生物体液(biological fluid)经过具有上游表面和下游表面的多孔的白细胞滤除介质，该生物体液从上游表面穿过下游表面，其中白细胞被白细胞滤除介质保留；(b)使洗涤液从下游表面穿过上游表面而经过白细胞滤除介质；和((3)使洗涤液借助重力从上游表面穿过下游表面而经过白细胞滤除介质。另一实施例提供了用于纯化白细胞的方法，该方法包括:(a)使包含白细胞的冷冻保护液经过具有上游表面和下游表面的多孔的白细胞滤除介质，该冷冻保护液从上游表面穿过下游表面，其中白细胞被白细胞滤除介质保留；(b)使洗涤液从下游表面穿过上游表面而经过白细胞滤除介质；和((3)使洗涤液借助重力从上游表面穿过下游表面而经过白细胞滤除介质。在这些方法的一些实施例中，用另外的洗涤液重复(b)和(C)至少一次。在这些方法的一些实施例中还包括:通过使洗脱液从下游表面穿过上游表面而经过白细胞滤除介质来从白细胞滤除介质洗脱白细胞，和回收(recover)被洗脱的白细胞,或在白细胞被白细胞滤除介质保留的同时溶解白细胞。如果希望的话，能利用多井(multiwell)装置或单独的过滤装置来实现该方法的实施例。附图说明图1描述并示意性地示出了根据本专利技术的方法的实施例。图2示出了适于实现根据本专利技术的方法的实施例的示意性的系统。图3示出了适于实现根据本专利技术的方法的实施例的另一示意性的系统，其中该方法在保持封闭系统的同时被实现。具体实施例方式如图1示出的:1、空的注射器筒(其被连接至注射器式过滤器的入口，该注射器式过滤器包括白细胞滤除介质)被设置成使注射器式过滤器的出口与接收容器流体连通。含有白细胞的生物体液放置在筒中，且通过过滤器借助重力而排出，其中白细胞被白细胞滤除介质捕获。2、注射器筒与注射器式过滤器的入口脱离连接，注射器柱塞被插入筒中，注射器再次与入口连接。注射器式过滤器的出口布置成与含有洗涤液的洗涤容器流体连通。柱塞被抽回，从洗涤容器抽取洗涤液，并使其进入注射器筒。3、再次抽回注射器柱塞直到其被拉出注射器筒。洗涤液通过过滤器借助重力排入洗涤容器。白细胞被白细胞滤除介质再次捕获，不希望的材料(例如，红血球)进入废物容器。4、能用新鲜的洗涤液重复洗涤。根据本专利技术的实施例，提供了用于纯化白细胞的方法，该方法包括:(a)使包含白细胞的生物体液经过具有上游表 面和下游表面的多孔的白细胞滤除介质，该生物体液从上游表面穿过下游表面，其中白细胞被白细胞滤除介质保留；(b)使洗涤液从下游表面穿过上游表面而经过白细胞滤除介质；和((3)使洗涤液借助重力从上游表面穿过下游表面而经过白细胞滤除介质。另一实施例提供了用于纯化白细胞的方法，该方法包括:(a)使包含白细胞和冷冻保护剂(例如DMS0)的液体经过具有上游表面和下游表面的多孔的白细胞滤除介质，该液体从上游表面穿过下游表面，其中白细胞被白细胞滤除介质保留；(b)使洗涤液从下游表面穿过上游表面而经过白细胞滤除介质；和((3)使洗涤液借助重力从上游表面穿过下游表面而经过白细胞滤除介质。在这些方法的一些实施例中，用另外的洗涤液重复(b)和(C)至少一次。在一些实施例中，生物体液或冷冻保护剂借助重力或真空穿过多孔的白细胞滤除介质。使洗涤液从下游表面穿过上游表面而经过白细胞滤除介质包括在上游表面的上游形成负压(真空)，或包括在下游表面的下游形成正压。有利地，在减少红血球和/或血小板的存在的同时能获得白细胞。使红血球和血小板的存在最小化对于应用细胞疗法是特别有利的。可选地或额外地，使DMSO的存在最小化对于应用细胞疗法是特别有利的，特别是对包括新生儿、婴儿和儿童的患者来说。在这些方法的一些实施例中还包括:通过使洗脱液从下游表面穿过上游表面而经过白细胞滤除介质来从白细胞滤除介质洗脱白细胞，和回收被洗脱的白细胞，或在白细胞被白细胞滤除介质保留的同时溶解白细胞。在包括溶解白细胞的一个实施例中，该方法还包括分析被溶解的白细胞的成分，例如，包括分析来自被溶解的白细胞的核酸。在该方法的一个优选实施例中，向一对象(例如患者)使用被洗脱的白细胞。如果希望的话，能利用多井装置或单独的过滤装置来实现该方法的实施例。例如，使用具有多个井部件的多井装置，井部件在其中具有白细胞滤除媒介(media)，生物体液和洗涤液的各自部分穿过在各井部件中的白细胞滤除介质。能利用来自多种源，特别是哺乳动物的生物体液(在冷冻保护液中的细胞也能来自多种源)来实现本专利技术。优选地，哺乳动物来自:食肉目(order)，包括猫科(猫)和犬科(狗)；和偶蹄目，包括牛科(牛)和猪科(猪)；或奇蹄目，包括马科(马)。通常，哺乳动物是灵长类、四足猴类(Ceboids)或猴类(Simoids)(猴)，或是类人猿(人和猿)。特别优选的哺乳动物是人。根据本专利技术的实施例，任何合适量的生物体液或冷冻保护液都能被处理，且多种白细胞滤除介质和白细胞滤除过滤器结构都是合适的，例如直径范围为从例如约0.3英寸(约7mm)或更小到约5英寸(约12cm)或更大的介质或过滤器。在根据本专利技术的实施例白细胞被纯化(且优选地被洗脱)之前，根据本专利技术所使用的脐带血浓缩液和干细胞浓缩液能通过现有技术中已知的多种技术被生产(例如，获得与冷冻的和解冻的冷冻防护剂结合的、富含白细胞的片段(enriched white cellfraction))。现在将在下面更详细地描述本专利技术的每一构件，其中相同的构件具有相同的附图己 O 多种多孔的白细胞滤除媒介适于在本专利技术中使用。合适的白细胞滤除媒介包括在商业中能获得的媒介，例如，能从颇尔公司(PallCorporation)(华盛顿港,纽约)得到的媒介。多种洗涤液适于在本专利技术中使用。通常，洗涤液是与所希望的细胞在生理学上可相容的,且基本不影响细胞。示例性的液体包括,例如,盐水(如磷酸盐缓冲液(PBS))。洗涤能以任何合适的流体流速完成。通常，使洗涤液从下游表面穿过上游表面而经过白细胞滤除介质包括:例如通过抽回注射器筒内本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于纯化白细胞的方法，该方法包括：（a）使包含白细胞的生物体液或包含白细胞的冷冻保护液经过具有上游表面和下游表面的多孔的白细胞滤除介质，该生物体液或冷冻保护液从上游表面穿过下游表面，其中白细胞由白细胞滤除介质保留；（b）使洗涤液从下游表面穿过上游表面而经过白细胞滤除介质；和（c）使洗涤液借助重力从上游表面穿过下游表面而经过白细胞滤除介质。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M·福莫维斯基，T·J·博尔曼，
申请(专利权)人：帕尔公司，
类型：发明
国别省市：