光敏染料锇配合物及其制备方法、癌变早期 DNA 氧化损伤快速检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种光敏染料锇配合物及其制备方法、使用该光敏染料锇配合物进行癌变早期DNA氧化损伤快速检测的试剂盒及检测方法。光敏染料锇配合物具有结构通式：LL’L’’Os-Y4，其中Y为卤素离子、ClO4-、BF4-、PF6-或OTs-，L、L’各自独立地选自2,2’-联吡啶及其衍生物、邻菲罗啉及其衍生物或DPPZ，L’’为具有2,2’-联吡啶和4,4’-联吡啶结构的配体。试剂盒至少包括：主体化合物八元瓜环（成分A）、上述光敏染料锇配合物（成分B）及纯水或磷酸盐、硼酸盐缓冲溶液（成分D）。使用该试剂盒，仅需一滴血样，即使在不借助任何仪器设备的条件下，凭借肉眼，在可见光照射下即可专一、快速检测8-oxoG。

Photosensitive dye osmium complex, preparation method thereof, rapid detection kit for detecting DNA damage in early stage of carcinogenesis and detection method thereof

The invention provides a photosensitive dye osmium complex and a preparation method thereof, and a kit and a detection method for the early detection of DNA oxidative damage in the early stage of carcinogenesis. Photosensitive dye osmium complexes with the general formula: LL 'L' Os-Y4, wherein Y is halogen ions, ClO4-, BF4-, PF6- or OTs-, L, L 'independently selected from 2,2' - bipyridine derivatives, phenanthroline and its derivatives or DPPZ, L '2,2' - associated with pyridine and 4,4 '- bipyridine ligand structure. The kit includes at least eight D (A), a photosensitive dye osmium complex (B) and a pure water or phosphate, borate buffer solution (component). Using the kit, only a drop of blood sample, even without the aid of any instrument and equipment, with the naked eye, under visible light irradiation can be specific, rapid detection of 8-oxoG.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术具体涉及一种光敏染料锇配合物及其制备方法、使用该光敏染料锇配合物进行癌变早期DNA氧化损伤快速检测的试剂盒及检测方法。
技术介绍
癌症，一旦发现大多已处于晚期，令医者回天乏术，只有早期诊断才能防患于未然。化学反应、辐射以及单线态氧、超氧自由基和羟基自由基等需氧代谢的副产物都可导致DNA的氧化损伤，产生基因突变，诱发肿瘤、机体细胞的老化和某些退行性疾病。而DNA的四个碱基中鸟嘌呤G最容易被氧化，其主要氧化产物是8-氧-7，8- 二氢脱氧鸟嘌呤(8-羟基鸟嘌呤，8-oxoG)，它在体内形成后较为稳定，是DNA氧化损伤的重要生物标识物，对它的监测可以反映DNA受损程度，从而对癌变进行早期预警、预防。因此，快速、专一、可靠地检测DNA中的8-oxoG方法的研究，具有十分重要的理论和现实意义。目前DNA中8-oxoG的常规检测方法主要有:酶联免疫分析、高效液相色谱与电化学/质谱联用、毛细管气象色谱-质谱联用、凝胶电泳等。但这些方法都不具备专一性，并且需要先对DNA进行水解、酶解、衍生化、杂交等预处理，再借助专门的技术和仪器进行检测，分析时间较长，限制了它们在常规体检及门诊化验上的推广应用。三联卩比卩定锇(Os(bpy) 33+, 0.63V vs Ag/AgCl)是文献报道(R.C.Holmberg, Μ.T.Tierney, P.A.Ropp, E.E.Berg, M.ff.Grinstaff, Η.H.Thorp, Inorg.Chem.2003, 42, 6379 ；V.A.Szalai, M.J.Singer, H.H.Thorp, J.Am.Chem.Soc.2002, 124, 1625 ；P.A.Ropp, H.H.Thorp, Chem.Biol.1999, 6，599 ； A.Mugweru, B.Wang, J.Rus I ing, Anal.Chem.2004, 76, 5557 ；L.Dennany, R.J.Forster, B.White, M.Smyth, J.F.Rusling, J.Am.Chem.Soc.2002，124，1625)中唯一可以专一氧化 8-oxoG (0.5±0.IV vs Ag/AgCl)的化学试剂，目前它已在8-oxoG的电化学检测中得到了很好的应用，其原理如下所示。权利要求1.一种光敏染料锇配合物，其特征在于，该光敏染料锇配合物具有下列结构通式1: LL，L，，Os-Y4( 1 ) 通式I中，Y为卤素离子、C104_、BF4_、PF6_*0Ts_，L、L’各自独立地选自以下配体:2.一种用于制备权利要求1所述的光敏染料锇配合物的方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)制备以L、L’为配体的锇配合物中间体 将各自独立地选自下述化合物的配体L、L’与以Y’为负离子的金属锇盐同时或依次进行配位反应，得到通式LL’ Os-Y’的锇配合物中间体，反应温度为20-200°C，反应时间为l-24h，反应溶剂选自甲醇、乙醇、乙二醇、乙腈、水、DMF、DMS0以及其中任意两种或两种以上按照任意比例组成的混合溶剂，3.一种癌变早期DNA氧化损伤快速检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括A、B、D三种成分: (1)成分A:主体化合物八元瓜环； (2)成分B:作为客体化合物I的权利要求1所述的光敏染料锇配合物； (3)成分D:纯水或磷酸盐、硼酸盐缓冲溶液。4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,该试剂盒还进一步包括: (4)成分C:作为客体化合物II的荧光小分子，该荧光小分子具有下列结构通式II:5.一种癌变早期DNA氧化损伤快速检测方法，其特征在于，该方法使用权利要求3所述的试剂盒进行检测，具体包括如下步骤: (1)首先将成分A、B按照摩尔比1-5:1的比例溶解到成分D中，以成分B的浓度计，配成浓度为10 μ M-1mM的溶液，然后取适量的该溶液加入到透明容器中，惰性气体除氧，密封待用； (2)将待测样品加入到上述透明容器中，光照15-30分钟后，肉眼观察颜色变化或用光学仪器检测吸收光谱变化。6.一种癌变早期DNA氧化损伤快速检测方法，其特征在于，该方法使用权利要求4所述的试剂盒进行检测，具体包括如下步骤: (1)首先将成分Α、B、C按照摩尔比1-5:1:1的比例溶解到成分D中，以成分B或C的浓度计，配成浓度为IOyM-1mM的溶液，然后取适量的该溶液加入到透明容器中，惰性气体除氧，密封待用； (2)将待测样品加入到上述透明容器中，光照15-30分钟后，肉眼观察颜色变化或用光学仪器检测紫外可见吸收和/或荧光发射光谱变化。7.如权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，所述光照采用的光源为太阳光或能够激发所述光敏 染料锇配合物的照明灯光。全文摘要本专利技术提供了一种光敏染料锇配合物及其制备方法、使用该光敏染料锇配合物进行癌变早期DNA氧化损伤快速检测的试剂盒及检测方法。光敏染料锇配合物具有结构通式LL’L’’Os-Y4，其中Y为卤素离子、ClO4-、BF4-、PF6-或OTs-，L、L’各自独立地选自2,2’-联吡啶及其衍生物、邻菲罗啉及其衍生物或DPPZ，L’’为具有2,2’-联吡啶和4,4’-联吡啶结构的配体。试剂盒至少包括主体化合物八元瓜环(成分A)、上述光敏染料锇配合物(成分B)及纯水或磷酸盐、硼酸盐缓冲溶液(成分D)。使用该试剂盒，仅需一滴血样，即使在不借助任何仪器设备的条件下，凭借肉眼，在可见光照射下即可专一、快速检测8-oxoG。文档编号G01N21/31GK103205135SQ201310148539公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月25日 优先权日2013年4月25日专利技术者孙世国, 慕道洲, 彭孝军, 蔡明珠, 王继涛 申请人:大连理工大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种光敏染料锇配合物，其特征在于，该光敏染料锇配合物具有下列结构通式Ⅰ：LL’L’’Os?Y4?????????????????????（Ⅰ）通式Ⅰ中，Y为卤素离子、ClO4?、BF4?、PF6?或OTs?，L、L’各自独立地选自以下配体：其中，R1和R2各自独立地选自H、C1?10烷基、CHO、COOH、NH2、NO2、CN、OH、SH、C1?6烷氧基、C1?6烷基氨基、C1?6酰胺基、C1?6卤代烷基、具有C1?10烷基的吩噻嗪基或卤素，L’’为以下配体：其中，n为1?10的整数，R3为H、C1?10烷基、CHO、COOH、NH2、NO2、CN、OH、SH、C1?6烷氧基、C1?6烷基氨基、C1?6酰胺基、C1?6卤代烷基、具有C1?10烷基的吩噻嗪基或卤素，R4为C1?10烷基。FDA00003104690300011.jpg,FDA00003104690300012.jpg

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙世国，慕道洲，彭孝军，蔡明珠，王继涛，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：