神经毡蛋白片段与神经毡蛋白抗体复合物的晶体结构制造技术

本发明专利技术涉及神经毡蛋白片段与神经毡蛋白抗体复合物的晶体结构。本发明专利技术提供了单独的或与抗神经毡蛋白抗体复合的神经毡蛋白1(Nrp1)和神经毡蛋白2(Nrp2)片段的晶体结构，及其使用方法。本发明专利技术进一步提供了抗Nrp抗体及其治疗应用的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供了单独的或与抗神经毡蛋白抗体复合的神经毡蛋白I(Nrpl)和神经毡蛋白2(Nrp2)片段的晶体结构及其用途。本专利技术进一步提供了结合Nrpl和/或Nrp2的抗体及其使用方法。专利技术背景 血管系统的发育是许多生理性和病理性过程的基本要求。活跃生长中的组织诸如胚胎和肿瘤要求充足的血液供应。它们通过生成促血管发生因子来满足这一需要，所述促血管发生因子经由一般称为血管发生(angiogenesis)的过程促进新血管形成和维持。血管形成是复杂但有序的生物学事件，涉及所有或许多以下步骤:a)自已有的内皮细胞(EC)增殖出EC或自祖细胞分化出EC ;b)EC迁移并接合以形成索样结构；c)血管索然后发生管发生(tubulogenesis)以形成具有中央内腔的血管；d)已有的索或血管伸出芽以形成次生血管；e)初级血管丛发生进一步重塑(remodeling)和整形(reshaping);及f)内皮周细胞(per1-endothelial cell)被募集来包围内皮管，为血管提供维持和调节功能，此类细胞包括用于小毛细血管的周细胞、用于大血管的平滑肌细胞、和心脏中的心肌细胞。Hanahan, D.Science277:48-50 (1997) ；Hogan, B.L.和 Kolodzie j, P.A.Nature ReviewsGenetics.3:513-23 (2002) ；Lubarsky, B.和 Krasnow, M.A.Cell.112:19-28(2003)。现在完全确立了血管发生涉及多种病症的发病机理。这些包括实体瘤和转移、动脉粥样硬化、晶状体后纤维组织增生、血管瘤、慢性炎症、眼内新血管疾病诸如增殖性视网膜病变例如糖尿病性视网膜病、年龄相关黄斑变性(AMD)、新生血管性青光眼、移植角膜组织和其它组织的免疫排斥、类风湿性关节炎、和银屑病。Folkman等，J.Biol.Chem., 267:10931-10934(1992) ；Klagsbrun 等，Annu.Rev.Physiol.53:217-239(1991)；GarnerA.，〃Vasculardiseases〃，在 Garner A 和 Klintworth GK 编的《Pathobiology ofOcular Disease.ADynamic Approach》第 2 版(Marcel Dekker, NY, 1994)中，ppl625_1710。在肿瘤生长的情况中，血管发生对于自增生至瘤形成的转换，及为肿瘤的生长和转移提供营养似乎是至关重要的。Folkman等，Nature339:58(1989)。新血管形成(neovascularization)让肿瘤细胞获得了与正常细胞相比的生长优势和增殖自治。肿瘤通常开始于单个异常细胞，由于与可利用毛细管床的距离，该细胞只能增殖至几立方毫米的尺寸，而且它能在较长的一段时间里保持“休眠”状态而不进一步生长和传播。有些肿瘤细胞然后转向血管发生表型以激活内皮细胞，所述内皮细胞增殖并成熟成新的毛细血管。这些新形成的血管不仅让原发性肿瘤继续生长，而且让转移性肿瘤细胞传播并再建群(recolonization)。因而，在肿瘤切片中的微血管密度与乳腺癌及数种其它肿瘤的患者存活之间观察到T相关性。Weidner等,N.Engl.J.Med324:1-6 (1991) ；Horak等，Lancet340:1120-1124(1992) ；Macchiarini 等，Lancet340:145-146 (1992)。尚未完全了解控制血管发生转换的精确机制，但是认为肿瘤块的新血管形成源自众多血管发生刺激物与抑制物的净平衡(Folkman, Nat Medl (I):27-31 (1995))。血管发育的过程受到紧密调节。迄今为止，多种分子，多为由周围细胞生成的分泌性因子，已显示出调节EC分化、增殖、迁移和接合成索样结构。例如，血管内皮生长因子(VEGF)已鉴定为涉及刺激血管发生和诱导血管通透性的关键因子。Ferrara等，Endocr.Rev.18:4-25(1997)。甚至单个VEGF等位基因的遗失导致胚胎致死的发现指向此因子在血管系统的发育和分化中所发挥的不可代替的作用。此外，VEGF已显示为与肿瘤和眼内病症有关的新血管形成的关键介导物。Ferrara等，Endocr.Rev.见上文。VEGF mRNA在多数所检查的人肿瘤 中过表达。Berkman 等，J.Clin.1nvest.91:153-159 (1993) ； Brown等，HumanPathol.26:86-91(1995) ;Brown 等，Cancer Res.53:4727-4735(1993) ；Mattern等，Brit.J.Cancer73:931-934(1996) ；Dvorak 等，Am.J.Pathol.146:1029-1039(1995)。同样，眼部液体中VEGF的浓度水平与糖尿病性和其它缺血相关视网膜病患者中的活泼血管增殖的存在高度相关。Aiello等，N.Engl.J.Med.331:1480-1487 (1994)。此夕卜，研究证明了 VEGF在AMD患者脉络膜新血管膜中的定位。Lopez等，Invest.0phthalmol.Vis.Sc1.37:855-868(1996)。抗VEGF中和性抗体在裸鼠中遏制多种人肿瘤细胞系的生长(Kim等,Nature362:841-844(1993) ；ffarren 等,J.Clin.1nvest.95:1789-1797 (1995)；BorgStrdm 等,Cancer Res.56: 4032-4039 ( 1996) ； Me I ny k 等,CancerRes.56:921-924(1996))，而且在缺血性视网膜病症模型中还抑制眼内血管发生。Adamis等，Arch.0phthalmol.114:66-71 (1996)。因此，抗VEGF单克隆抗体或其它VEGF作用抑制剂是有希望用于治疗肿瘤和多种眼内新血管病症的候选物。此类抗体记载于例如1998年I月14日公开的EP817, 648和1998年10月15日公开的W098/45331和W098/45332。抗VEGF抗体之一，贝伐单抗(bevacizumab)已获FDA批准与化疗方案联合用于治疗转移性结肠直肠癌(CRC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。而且，贝伐单抗正在许多进行中的治疗各种癌症适应证的临床试验中进行研究。在神经系统的发育过程中，神经元伸出缆样轴突，所述轴突迁移长距离以到达它们的祀点。见综述 Carmeliet and Tessier-Lavigne (2005)Nature436:193-200。生长中的轴突的领先尖端是高度能动的感觉结构，称为生长锥。通过丝足伸展(filopodialextension)的伸展和收缩的动态循环，生长锥不断感觉和评估其空间环境中的众多提示，并精确选择正确航迹来向其最终靶点延伸。在过去的十年里，在了解轴突导向机制方面取得了可观的进展。见综述Dickson (2002) Science298:1959-64。导向提示来自四种:引诱物和驱除物；可以作用于近程(本文档来自技高网...

【技术保护点】
Nrp2ala2b1b2片段与抑制脑信号蛋白结合Nrp2的抗泛NrpA抗体的Fab片段之间形成的复合物的晶体，其中所述晶体衍射x射线辐射以生成代表所述复合物三维结构的衍射图样，该衍射图样大致具有晶胞常数及空间群C2。FDA00003029768300011.jpg,FDA00003029768300014.jpg,FDA00003029768300013.jpg

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：布伦特A阿普尔顿，克里斯琴威斯曼，吴雁，
申请(专利权)人：健泰科生物技术公司，
类型：发明
国别省市：