本发明专利技术涉及一种冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液在制备具有免疫调节功能的产品方面的应用。本发明专利技术用一种由野生冬虫夏草（Cordyceps?sinensis(Berk.)Sacc.）子实体通过菌种收集、保藏与复壮，母种、一级液体种和二级生产种的制作，固体发酵物的制备、水提取等步骤，得到的冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液，对小鼠进行免疫调节功效实验，实验结果表明该冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液显著增强免疫功能低下小鼠巨噬细胞吞噬功能，且能将免疫功能低下小鼠的吞噬率调节到接近正常水平，具有免疫调节作用，可用于制备具有免疫调节功能的产品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种虫草菌丝体发酵提取物的应用，具体来说是涉及一种冬虫夏草(Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)菌丝体固体发酵水提液在调节免疫功能方面的应用。
技术介绍
近年来，研究开发具有免疫调节作用的天然药物已成为国内外的关注热点。虫草作为一种滋补中药，具有保肺益肾、止咳化痰、治阳痿遗精及腰膝酸痛等功效。冬虫夏草作为虫草中最重要的一类真菌，具有补肾益肺、调节神经内分泌、加强代谢、调节人体免疫力等作用和极高的商业价值而成为最名贵的生物药物种类之一。在对冬虫夏草免疫调节作用的研究中，已报道虫草一方面可以促进免疫细胞的功能，经喂食冬虫夏草菌丝体提取物后，与对照组相比，喂食小鼠的白细胞介素-12 (IL-12)、干扰素(IFN-R)表达和巨噬细胞的巨噬活性均提高，小鼠的存活率达到100% (见文献1:Kuo C F，Chen C C，Luo Y H，et al.Cordyceps sinensis mycelium protects mice from group A streptococcalinfection.Journal of Medical Microbiology, 2005, 54:795-802.),同时能消除嗜热链球菌外毒素B (SPE B)的这种降低人单核细胞U937的噬菌作用，提高U937细胞的噬菌活性(见文献 2:Kuo C F, Chen C C, Lin C F, et al.Abrogation of streptococcal pyrogenicexotoxin B—mediated suppression of phagocytosis in U937cells by Cordycepssinensis mycelium via production of cytokines.Food and Chemical Toxicology,2007,45:278-285.);另一方面冬虫夏草可抑制某些免疫细胞的增殖，如可以抑制系统性红斑狼疮大鼠淋巴结增生( 见文献3:傅庭焕，林敬明.冬虫夏草对系统性红斑狼疮模型大鼠的治疗作用.中药材，2001,24(9):658-659.)。另外，虫草对免疫因子的合成和分泌也有影响，例如，给接种了 H22肿瘤细胞的小鼠腹腔注射冬虫夏草无性型菌株的发酵物，结果显示能显著增强巨噬细胞的肿瘤坏死因子(TNF-A)表达和脾淋巴细胞的TNF-A和IFN-R mRNA表达，从而提高免疫细胞活性，抑制肿瘤生长(见文献4:Zhang W Y，Li J，QiuS Q, et al.Effects of the exopolysaccharide fraction EPSF from a cultivatedCordyceps sinensis on immunocytes of H22tumor bearing mice.Fitoterapia,2008,79:168-173.)。冬虫夏草还能激活小鼠的巨噬细胞，加强造血因子(CSF)的分泌，从而调节免疫系统的功能(见文献5:Koh J H, Yu K ff, Slh H J, et al.Activation ofmacrophages and the intestinal immun-system by an orally administered decortionfrom cultured mycelia of Cordyceps sinensis.Bioscience Biotechnology andBiochemistry, 2002,66 (2):407-411.)。y射线辐射损伤小鼠在服用一定剂量的戴氏虫草和粉被虫草的发酵液后，其血清中溶血素水平恢复(见文献6:刘杰麟，童宜英.戴氏虫草和粉被虫草菌丝体发酵液对放射损伤小鼠体液免疫的影响.贵州医学院院报，1999，24(4):323-325.)。目前，市场上有多种具有免疫调节功能的虫草保健品，如虫草肾宝、天狮虫草菌丝体胶囊等，但大多都是以深层发酵的方法来获得菌丝体的，但利用其固体发酵水提液来开发免疫调节作用的产品尚未见到。
技术实现思路
本专利技术的目的在于开发出一种冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液在制备具有免疫调节功能的产品方面的应用。本专利技术用一种由野生冬虫夏草(Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)子实体通过菌种收集、保藏与复壮，母种、一级液体种和二级生产种的制作，固体发酵物的制备、水提取等步骤，得到的冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液，对小鼠进行免疫调节功效实验，实验结果表明该冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液显著增强免疫功能低下小鼠巨噬细胞吞噬功能，具有免疫调节作用，可用于制备具有免疫调节功能的产品，从而实现了本专利技术的目的。本专利技术所用的冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液，由包括以下步骤的方法制备得到:(I)将野生冬虫夏草(Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)子实体进行组织分离，于冬虫夏草斜面培养基上培养，获得纯菌株，并进行复壮，所述的冬虫夏草斜面培养基按其总质量分数100%计，由葡萄糖1% 2%，蛋白胨0.5% 1%，麦芽浸出粉0.3% 0.5%，酵母浸膏0.3% 0.5%，琼脂2%和余量的水组成；(2)将步骤(I)的纯菌株接入无菌的冬虫夏草斜面培养基中，10 15°C下，暗培养30 35天后，光照4 6天，选取转色较快且菌丝生长整齐的菌种，作为母种，所述的冬虫夏草斜面培养基组成与步骤(I)相同；(3)将母种经复壮挑选后接至无菌冬虫夏草液体培养基中，振荡培养10 20天，选取菌丝球大小均匀一致、直径为2 3mm的菌种作为一级液体菌种，所述的冬虫夏草液体培养基PH6.0 6.5，按其总质量分数100%计，由葡萄糖1% 2%，蛋白胨0.5% 1%，麦芽浸出粉0.3% 0.5%，酵母浸膏0.3% 0.5%和余量的水组成；(4)将步骤(3)得到的一级液体菌种接入冬虫夏草液体培养基中进行培养，一级液体菌种体积是冬虫夏草液体培养基体积的3% 10%，选取菌丝球大小均匀一致、直径为2 3mm的菌种作为二级生产种，所述的冬虫夏草液体培养基及培养方法与步骤(3)相同；(5)在无菌的环境下，将二级生产种用无菌水按体积比1:1 1.3稀释后接入无菌的固体发酵培养基中，进行避光培养9 14天至菌丝长满培养基后，进行光照培养，光强400 ΙΟΟΟΙχ，空气相对湿度80% 90%，18 25°C，经7 12天后得到冬虫夏草菌丝体固体发酵物，所述的固体发酵培养基是按Ikg大米和I 1.5L营养液的比例配制而成，所述的营养液PH6.0 6.5，按总质量分数100%，由葡萄糖1% 2%，蛋白胨0.5% 1%，麦芽浸出粉0.3% 0.5%，酵母浸膏0.3% 0.5%和余量的水组成；(6)将步骤(5)得到的冬虫夏草菌丝体固体发酵物在40 60°C的温度下烘干，粉碎，再加入10 50倍体积的蒸馏水，通过80 90°C的热水回流提取I 3次，趁热抽滤，合并滤液，浓缩至滤液体积的30% 50%，得到冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液。上述所用的麦芽提取粉和酵母浸膏都是市售品。步骤(I)所述的组织分离可采用常规的方法进行，步本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液在制备具有免疫调节功能的产品方面的应用，所述的冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液，由包括以下步骤的方法制备得到：（1）将野生冬虫夏草（Cordyceps?sinensis(Berk.)Sacc.）子实体进行组织分离，于冬虫夏草斜面培养基上培养，获得纯菌株，并进行复壮，所述的冬虫夏草斜面培养基按其总质量分数100%计，由葡萄糖1%～2%，蛋白胨0.5%～1%，麦芽浸出粉0.3%～0.5%，酵母浸膏0.3%～0.5%，琼脂2%和余量的水组成；（2）将步骤（1）的纯菌株接入无菌的冬虫夏草斜面培养基中，10～15℃下，暗培养30～35天后，光照4～6天，选取转色较快且菌丝生长整齐的菌种，作为母种，所述的冬虫夏草斜面培养基组成与步骤（1）相同；（3）将母种经复壮挑选后接至无菌冬虫夏草液体培养基中，振荡培养10～20天，选取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌种作为一级液体菌种，所述的冬虫夏草液体培养基pH6.0～6.5，按其总质量分数100%计，由葡萄糖1%～2%，蛋白胨0.5%～1%，麦芽浸出粉0.3%～0.5%，酵母浸膏0.3%～0.5%和余量的水组成；（4）将步骤(3)得到的一级液体菌种接入冬虫夏草液体培养基中进行培养，一级液体菌种体积是冬虫夏草液体培养基体积的3%～10%，选取菌丝球大小均匀一致、直径为2～3mm的菌种作为二级生产种，所述的冬虫夏草液体培养基及培养方法与步骤(3)相同；（5）在无菌的环境下，将二级生产种用无菌水按体积比1:1～1.3稀释后接入无菌的固体发酵培养基中，进行避光培养9～14天至菌丝长满培养基后，进行光照培养，光强400～1000lx，空气相对湿度80%～90%，18～25℃，经7～12天后得到冬虫夏草菌丝体固体发酵物，所述的固体发酵培养基是按1kg大米和1～1.5L营养液的比例配制而成，所述的营养液pH6.0～6.5，按总质量分数100%，由葡萄糖1%～2%，蛋白胨0.5%～1%，麦芽浸出粉0.3%～0.5%，酵母浸膏0.3%～0.5%和余量的水组成；（6）将步骤(5)得到的冬虫夏草菌丝体固体发酵物在40～60℃的温度下烘干，粉碎，再加入10～50倍体积的蒸馏水，通过80～90℃的热水回流提取1～3次，趁热抽滤，合并滤液，浓缩至滤液体积的30%～50%，得到冬虫夏草菌丝体固体发酵水提液。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：闫文娟，李泰辉，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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