一种辅助鉴定辐照含脂食品的方法技术

本发明专利技术公开了一种辅助鉴定辐照含脂食品的方法。它包括如下步骤：（1）在F0F1-ATP合酶的ε亚基上依次连接生物素化的ε亚基多克隆抗体、链亲和素和生物素化的2-十二烷基环丁酮多克隆抗体，得到分子马达生物传感器；（2）用溶剂提取未经辐照的含脂食品得到溶剂提取液a；将其与分子马达生物传感器在启动缓冲液存在的条件下进行反应；向反应体系中加入PBS缓冲液终止反应；然后将所述反应体系的反应液与荧光素/荧光素酶溶液混匀，用超微弱发光仪进行检测，得到未经辐照的含脂食品的荧光强度；（3）用溶剂萃取待鉴定的含脂食品得到溶剂提取液b，将溶剂提取液b进行步骤（2）同样的操作，得到待鉴定含脂食品的荧光强度，即实现对含脂食品的鉴定。本发明专利技术提供的鉴定辐照含脂食品的方法可将检测时间缩短至10分钟左右，且2-DCB检测灵敏度能达到10-4μg/mL，满足现有的辐照含脂食品检测范围。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
辐照技术已经广泛应用于提高食品卫生安全、延长货架期。自1990年辐照食品商业化以来，福照食品产业已发展成为重要的国际贸易(Stewart, E.Μ.1n FoodIrradiation Principals and Applications.MolinsjR.A.，Ed.，New York:WileyInterscience, 2001:347-386)。为了落实辐照食品标签法规，提高消费者的信心，需要一种可靠、快速的辐照食品检测方法。2-烷基环丁酮(2-ACBs)是含脂食品的特异性辐解产物，可作为标志物检测含脂福照食品(Obana H, FurutaM, Tanaka Y.Evaluation of2-dodecy I eye lobutanone asan irradiation dose indicator in fresh irradiated ground beef.J Agric FoodChem.，2005，53(17):6603-6608 ;0bana Hj Furuta M，Tanaka Y.Detection of irradiatedmeat, fish and their products by measuring2-alkyIeyelobutanones levels afterfrozen storage.J Food HygSoci Japan, 2007，48 (6): 203-206)。2_ 十二焼基环丁丽(2-DCB)由食品中的棕榈酸和棕榈酸甘油酯辐解产生，是2-ACBs中的一种。由于在大部分食品中，棕榈酸是含量较高的饱和脂肪酸，并且其烃基链较短且饱和，相对其它2-ACBs较为稳定。因此选用2-DCB作为检测含脂辐照食品的标志性化合物具有实用性。目前2-DCB的检测方法主要为气相色谱-质谱(GC-MS)联用法(European Committee for Standardization (2003)Foodstuffs-Detection ofIrradiated Food Containing Fat-Gas Chromatographic/Mass SpectrometricAnalysis of2-AIkylcyclobutanones EN1785:2003;European Committee forStandardization:Brussels),该方法对样品的提取和纯化时间长,需要大量有机溶剂并且GC/MS设备昂贵。因此迫切需要开发一种快速、简便、不需贵重仪器的含脂辐照食品检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，以克服现有方法提取和纯化时间长、需要大量有机溶剂并且仪器昂贵等缺点。本专利技术所提供的，包括如下步骤:(1)在FtlF1-ATP合酶的ε亚基上依次连接生物素化的ε亚基多克隆抗体、链亲和素和生物素化的2-十二烷基环丁酮多克隆抗体，得到分子马达生物传感器；(2)用溶剂萃取未经辐照的含脂食品得到溶剂提取液，记为溶剂提取液a ;将所述溶剂提取液a与所述分子马达生物传感器在启动缓冲液存在的条件下进行反应；向所述反应体系中加入PBS缓冲液终止反应；然后将所述反应体系的反应液与荧光素/荧光素酶溶液混匀，用超微弱发光仪进行检测，至少检测3次，得到所述未经辐照的含脂食品的荧光强度；(3)用所述溶剂萃取待鉴定的含脂食品得到溶剂提取液，记为溶剂提取液b ;所述溶剂提取液b与所述分子马达生物传感器在所述启动缓冲液存在的条件下进行反应；向所述反应体系中加入所述PBS缓冲液终止反应；然后将所述反应体系的反应液与所述荧光素/荧光素酶溶液混匀，用超微弱发光仪进行检测，至少检测3次，得到所述待鉴定的含脂食品的荧光强度；如果待鉴定的含脂食品的荧光强度与所述未经辐照的含脂食品的荧光强度在0.05水平上存在显著差异，则所述待鉴定的含脂食品候选为经过辐照的含脂食品。上述的方法中，步骤(I)中，连接所述生物素化的ε亚基多克隆抗体、所述链亲和素和所述生物素化的2-十二烷基环丁酮多克隆抗体的步骤均可在所述PBS缓冲液中进行。上述的方法中，所述PBS缓冲液的组成如下:(λ 2g KH2PO4,3.58g Na2HPO4.12H20、0.2g KCl、8g NaCl、1000mL 双蒸水；所述PBS缓冲液的pH为7.4。上述的方法中，所述溶剂可为乙腈，常温下2-DCB在乙腈中的溶解度大于5mg/L，远大于食品中可能存在的2-DCB含量。 上述的方法中，所述方法还包括对所述溶剂提取液a和所述溶剂提取液b用硅胶固相萃取小柱(lg，6mL)进行净化的步骤。上述的方法中，所述启动缓冲液的组成如下:20mM Tricine - NaOH,2mM MgCl2,2mMNa2HPO4 和 0.5mM 二磷酸腺苷(ADP)；所述启动缓冲液的pH值为8.0。上述的方法中，步骤(2)中，所述溶剂提取液a、所述分子马达生物传感器、所述PBS缓冲液、所述荧光素/荧光素酶溶液混合物的体积比可为1:1:45:3。上述的方法中，步骤(3)中，所述溶剂提取液b、所述分子马达生物传感器、所述PBS缓冲液和所述荧光素/荧光素酶溶液混合物的体积可为1:1:45:3。上述的方法中，所述含脂食品具体可为牛肉。本专利技术提供的鉴定辐照含脂食品的方法可将检测时间缩短至10分钟左右，且2-DCB检测灵敏度能达到10_4μ g/mL，满足现有的辐照含脂食品检测范围。附图说明图1为0.5!^/12-008标准样品(&)，未辐照样品(13)，辐照样品((3，0.5kGy)，辐照样品(d,5kGy)和加标样品(e, 0.5mg/kg牛肉)的选择离子m/z=98、12色谱图。图2为本专利技术构建的分子马达生物传感器的模式图，图中a、b、c、α、β、δ、Y和ε均为ATP合成酶亚基，I表示ε亚基多克隆抗体，2表示链亲和素，3表示生物素，4表示2-DCB多克隆抗体。具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中使用的仪器和主要试剂:RE-2000型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；娃胶固相萃取小柱(lg, 6mL, Varian Inc.公司)；RT-A3型食品绞肉机(北京瑞天盛达电器有限公司)；重铬酸银(Ag2Cr2O7)剂量计；Mettler AE240型电子天平(梅特勒托利多仪器有限公司)；超微弱发光仪(Centro XS3LB960，德国)；突光光度计(芬兰Thermolabsystems公司)；新鲜冷却牛腩肉(含脂30%)(北京美廉美超市)；乙腈、正己烷、乙醚，分析纯无水硫酸钠(国药集团化学试剂有限公司)；色谱纯正己烷，2-DCB (美国sigma公司)； 链亲和素、生物素，ADP、牛血清白蛋白(BSA)(美国Sigma公司)；2-氧-环丁烷十一烷酸(圣克鲁斯生物技术(上海)有限公司)；突光素/突光素酶(FF2021,美国Promega公司)；FITC 购自 Molecular Probes (Eugene, Oregon, USA)；PBS 缓冲液的配制方法为:0.2g KH2PO4,3.58g Na2HPO本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种辅助鉴定辐照含脂食品的方法，包括如下步骤：（1）在F0F1?ATP合酶的ε亚基上依次连接生物素化的ε亚基多克隆抗体、链亲和素和生物素化的2?十二烷基环丁酮多克隆抗体，得到分子马达生物传感器；（2）用溶剂萃取未经辐照的含脂食品得到溶剂提取液，记为溶剂提取液a；将所述溶剂提取液a与所述分子马达生物传感器在启动缓冲液存在的条件下进行反应；向所述反应体系中加入PBS缓冲液终止反应；然后将所述反应体系的反应液与荧光素/荧光素酶溶液混匀，用超微弱发光仪进行检测，至少检测3次，得到所述未经辐照的含脂食品的荧光强度；（3）用所述溶剂萃取待鉴定的含脂食品得到溶剂提取液，记为溶剂提取液b；所述溶剂提取液b与所述分子马达生物传感器在所述启动缓冲液存在的条件下进行反应；向所述反应体系中加入所述PBS缓冲液终止反应；然后将所述反应体系的反应液与所述荧光素/荧光素酶溶液混匀，用超微弱发光仪进行检测，至少检测3次，得到所述待鉴定的含脂食品的荧光强度；如果待鉴定的含脂食品的荧光强度与所述未经辐照的含脂食品的荧光强度在0.05水平上存在显著差异，则所述待鉴定的含脂食品候选为经过辐照的含脂食品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：哈益明，赵月亮，李安，李伟明，王锋，李庆鹏，靳婧，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：