本发明专利技术提供了疫苗组合物，其在人中刺激对人存活蛋白的免疫应答，因此攻击过量表达存活蛋白的肿瘤患病细胞。具体地，本发明专利技术提供了疫苗组合物，其包含来自非哺乳动物存活蛋白以及来自修饰的哺乳动物的特别是人的存活蛋白的肽。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于肿瘤治疗的疫苗接种方案。具体地，本专利技术涉及疫苗组合物，其在人中刺激对人存活蛋白的免疫应答，因此攻击过量表达存活蛋白的肿瘤患病细胞。具体地，本专利技术涉及疫苗组合物，其包含来自非哺乳动物存活蛋白以及来自修饰的哺乳动物的特别是人的存活蛋白的肽。
技术介绍
免疫系统通过监控细胞的蛋白质组成来部分地实现了其监视功能。在称作T细胞抗原呈递的过程中，细胞内的蛋白质被加工为肽。加工的肽的亚组(抗原)被运出至细胞表面，与一类受体的成员特异性结合，所述一类受体被称作主要组织相容性复合体(MHC)受体。这些MHC肽复合体通过与已知为T细胞受体(TCR)的T细胞表面蛋白质相互作用，由特化的免疫细胞T细胞取样。每个给定的T细胞在其表面携带独特的TCR。当T细胞的TCR与MHC-肽复合体产生性相互作用时，免疫应答被活化，这导致呈递特定MHC-肽复合体的细胞的消除。通常，如果呈递的抗原来自宿主(所谓的“自身”抗原)，相互作用为非生产性的。一般地，免疫应答由与来自外源蛋白质的抗原的相互作用来活化，例如与来自感染病毒的组成性蛋白质的抗原相互作用来活化。通过活化免疫治疗肿瘤的目的是诱导免疫系统识别和消除肿瘤细胞。正如在任何其他细胞中，肿瘤细胞上的肽抗原来自表达的蛋白质的所有组成成分(repertoire)。正如病毒抗原在受感染的细胞中一样，来自肿瘤中差别表达的蛋白质的肿瘤富含的抗原原则上是免疫监视的靶标。因此，为了消除肿瘤的目的，所述抗原可以被用来控制免疫系统的分支，其已经被进化为对抗细胞内感染。一种此类肿瘤富含的蛋白质是存活蛋白。肿瘤细胞通常过量表达存活蛋白蛋白质，这被认为阻断了细胞凋亡并且因此干扰阻止肿瘤细胞异常生长的机制。另一方面，正常细胞表达非常少的存活蛋白。(见例如，Ambrosini等人，(1997)Nat.Med.,3:917-921)。因此，存活蛋白是理想的肿瘤特异性或肿瘤富含的抗原。可以有用地将存活蛋白蛋白质的抗原形式递送到抗原呈递细胞，从而可以刺激对存活蛋白的免疫应答。但是，与病毒感染的细胞相反，存活蛋白与许多其他在肿瘤中差别表达的蛋白质类似，是宿主蛋白质，并且不活化免疫系统。因此，在本领域中仍需要开发引发针对肿瘤细胞，特别是特征为过量表达存活蛋白的那些肿瘤细胞的有效免疫应答的有效组合物和方法。专利技术概述本专利技术提供了引发针对肿瘤细胞的有效免疫应答的有效组合物和方法。具体地，本专利技术提供了使用肿瘤富含的蛋白质的 抗原形式作为T细胞抗原的接种方案。特别地，本专利技术提供了肿瘤富含的蛋白质存活蛋白的抗原形式。因此，本专利技术一方面涉及包含核酸的疫苗，所述疫苗编码至少一种来自非哺乳动物存活蛋白的肽。备选地，本专利技术涉及包括至少一种来自非哺乳动物存活蛋白的肽的疫苗。如本文所用的，“非哺乳动物存活蛋白”包括至少任何具有BIR结构域(或IAP结构域)的存活蛋白蛋白质，所述结构域与人存活蛋白BIR结构域具有多于50%的氨基酸同一性但是少于90%的氨基酸同一性，例如与人存活蛋白BIR结构域具有至少55%、60%、65%、70%、75%、80%或85%的同一性。“非哺乳动物存活蛋白”还包括在本领域普通技术人员已知的非哺乳动物物种中鉴定的任何存活蛋白蛋白质。如本文所用的，“肽”包括具有任何数量氨基酸的肽，包括全长存活蛋白蛋白质。特别地，肽可以包含至少8、9、10、15、20、25、30或更多个氨基酸。在一个优选的实施方案中，本专利技术的疫苗包括编码来自非哺乳动物存活蛋白的肽的核酸。核酸可以包括哺乳动物启动子。在一个实施方案中，核酸是裸DNA。在另一个实施方案中，核酸是用增强哺乳动物细胞转染的试剂配制的。本专利技术的疫苗还可以包括佐剂。在一个实施方案中，核酸是病毒颗粒例如腺病毒颗粒的一部分。适合于本专利技术的腺病毒颗粒包括来自能够复制的腺病毒的那些，或来自条件复制腺病毒(“CRAD”)(仅在某些细胞或仅在某些条件中复制)的那些，或来自无能力复制的腺病毒的那些。其他适当的病毒颗粒包括但不限于来自慢病毒或其他RNA病毒、腺伴随病毒、轮状病毒或痘苗病毒等的病毒颗粒。 在一个实施方案中，疫苗包括含有核酸的细菌。优选地，细菌是肠细菌，如沙门氏菌属(Salmonella)、埃希氏菌属(Escherichia)或克雷伯氏菌属(Klebsiella)。其他细菌(例如利斯特菌属物种(Listeria species))也可以用来作为此类核酸的宿主。细菌可以是野生型细菌或可以包含突变，所述突变例如减轻了其致病性。通常，优选使用细菌的突变形式，例如营养缺陷型。在另一个优选的实施方案中，本专利技术的疫苗编码或包括来自非哺乳动物存活蛋白的肽。优选地，来自非哺乳动物存活蛋白的肽包括BIR结构域。通常，来自非哺乳动物存活蛋白的BIR结构域与人存活蛋白BIR结构域具有多于50%的氨基酸同一性，但是少于80%的氨基酸同一性。非哺乳动物存活蛋白来自鸟、鱼、爬行动物、两栖动物或其他脊椎动物。在优选的实施方案中，非哺乳动物存活蛋白来自鸡。在一些实施方案中，本专利技术的疫苗编码或包括来自非哺乳动物存活蛋白的肽，其具有促进T细胞抗原呈递的突变。例如，非哺乳动物存活蛋白突变肽可以在对应于人存活蛋白Asn97、Thr99、Vall00、或GlnlOl的位置处包含氨基酸取代。更具体地，来自鸡或其他物种的非哺乳动物存活蛋白可以包含下列氨基酸取代之一:N97E、T99M、V100L或Q101G。在另一实例中，来自蛙SIX存活蛋白的肽包含在等价位置ThrllO和/或Serl 12的取代。在具体的实例中，来自蛙SIX存活蛋白的肽包含取代ThrllOMet和/或Serll2Gly。在其他实施方案中，本专利技术的疫苗编码或包含来自非哺乳动物存活蛋白的肽，其具有可能消除BIR结构域生物学活性的突变。例如，来自非哺乳动物存活蛋白的肽可以包含在对应于人存活蛋白Argl8、Cys57、Cys60、His77或Cys84的位置处的至少一个氨基酸取代。另外，非哺乳动物存活蛋白可以任选地包含氨基酸缺失。在一个实例中，非哺乳动物存活蛋白部分包含C端缺失。在另一个实例中，非哺乳动物存活蛋白包含N端缺失。在其他实施方案中，本专利技术的疫苗能够活化T细胞，所述T细胞识别癌细胞上与MHC分子复合的人存活蛋白肽序列。具体地，此类人存活蛋白肽序列可以是例如LTLGEFLKL(SEQ ID NO:1)，CPTENEPDL(SEQ ID NO:2)或EPDLAQCFF(SEQ ID NO:3)。在一些实施方案中，来自非哺乳动物存活蛋白的肽与Fe部分融合或缀合。优选的Fe部分来自哺乳动物Fe区域，更优选来自人Fe区域。Fe部分可以包含突变，所述突变促进装配，例如用丝氨酸取代IgGl铰合部的序列EPKS⑶K (SEQ ID NO: 4)中的半胱氨酸。因此，Fe部分可以包含修饰的序列EPKSSDK(SEQ ID N0:5)。Fe部分也可以包含突变，所述突变减少不需要免疫应答的区域的免疫原性，例如，融合蛋白部分之间的接头。在选择的实施方案中，来自非哺乳动物存活蛋白的肽与效应分子协同作用，所述效应分子有助于免疫应答。例如，此类效应分子可以是细胞因子部分，其包括但不限于IL-2、IL-7、IL-12、IL-18、IL-21、IL_23、GM_CSF或任何本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于针对过表达人存活蛋白的肺癌细胞免疫患者的疫苗，其包含:（a）来自突变的鸡存活蛋白的肽或编码所述肽的核酸，其中所述突变的鸡存活蛋白的氨基酸序列为SEQ?ID?NO:12，和（b）任选地佐剂，所述疫苗在人中引起针对人存活蛋白的免疫应答。
【技术特征摘要】
2005.09.27 US 60/721,1991.用于针对过表达人存活蛋白的肺癌细胞免疫患者的疫苗，其包含: (a)来自突变的鸡存活蛋白的肽或编码所述肽的核酸，其中所述突变的鸡存活蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO: 12, (b)任选地佐剂， 所述疫苗在人中引起针对人存活蛋白的免疫应答。2.权利要求1的疫苗，其中所述疫苗能够活化T细胞，所述T细胞识别与MHC分子复合时的人存活蛋白肽序列，其中所述人存活蛋白肽序列选自下列肽:LTLGEFLKL、CPTENEH)L和 EPDLAQCFF。3.权利要求1或2的疫苗，其中所述肽与Fe部分融合。4.权利要求1一 3任一项的疫苗，其中所述疫苗另外编码或包括选自IL-2、IL-7、IL-12、IL-18、IL-21、IL-23 和...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·D·吉利斯，T·A·O·黑特曼，P·A·斯泰因，S·G·克林茨，
申请(专利权)人：默克专利有限公司，
类型：发明
国别省市：
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