本发明专利技术提供了一种针对10种常见致病军团菌（Legionella）的基因分型芯片及检测用试剂盒，其主要针对嗜肺军团菌，安氏军团菌，博滋曼军团菌，杜莫夫军团菌，费菲军团菌，戈尔曼军团菌，乔丹河军团菌，长滩军团菌，米氏军团菌，迈氏军团菌等10种军团菌。该基因芯片包括固相载体和固定在该固相载体上的寡聚核苷酸探针，上述寡聚核苷酸探针包含从16s-23s间区序列（ITS）上选取的DNA片段或其互补的DNA片段。利用设计的引物将待检测样品基因组DNA扩增并标记后，用上述基因芯片进行杂交，根据杂交信号，可检测出不同种类的军团菌。利用本发明专利技术的基因芯片可达到检测常见致病军团菌的目的，操作简便，准确性高，重复性强，并且可更准确的指导医疗用药。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基因芯片及包含该芯片的检测用试剂盒，尤其是涉及嗜肺军团菌，安氏军团菌，博滋曼军团菌，杜莫夫军团菌，费菲军团菌，戈尔曼军团菌，乔丹河军团菌，长滩军团菌，米氏军团菌，迈氏军团菌等10种军团菌的的基因芯片及检测用试剂盒。
技术介绍
水是生命得以存在的必要条件，它使我们人类得以繁衍生息，人类的生活、生产、娱乐都离不开水。它同时也是许多病原微生物滋生、传播的场所和载体，这些病原微生物一旦进入人体则将可能使人患病、甚至导致死亡，严重威胁着人类健康。随着社会的发展和生活水平的提高，人们越来越关心自身的健康问题，而各种水体(包括生活饮用水，江河湖泊，游泳场馆等)的安全问题也日益成为人们关注的热点。因此，为了保护人们的身体健康，对各种水体尤其是饮用水中病原微生物的检测是十分必要和亟需的。军团菌(76^io/ e77a)是一种革兰氏阴性杆菌,广泛存在于自然和人工环境的水体、土壤中，可以通过含菌气溶胶的方式在空气中播散而被人体吸入导致人类感染，引发急性发热性肺部疾病——军团病。自1976年首次在美国发现军团病以来，该病已呈现出世界性分布及病死率高的两大特点。军团菌的生长繁殖与环境因密切相关，集中空调的冷却塔冷却水、冷凝水以及温泉水是军团菌在外界适宜的生存环境。当环境水中的军团菌繁殖到一定浓度，则会形成气溶胶进而感染人。宿主感染主要受其易感性和细菌毒力的影响，任何年龄均可发生，但中老年、基础免疫较差者、长途旅行者、吸烟者为高危人群，并以医院、宾馆、大型建筑工地等公共场所易染军团菌。此外，军团菌属种类多样，常规的细菌培养和血清鉴定分型，耗时长，工作量大，通量低，不能满足流行病学调查及对突发致病事件快速分析需要。免疫血清学方法是利用细菌抗原的独特性及抗原抗体结合的特异性建立起来的现代检测技术，具有特异性强等特点。许多临床疾病已经开始使用这种方法进行病原体检测，如利用HBV表面抗原检测HBV病毒。然而，由于这种方法需要经过至少48小时的细菌培养、扩增和单菌落的分析，并需要对每一个样品的大量单菌 落进行抗血清凝聚反应，耗时长且可能出现假阴性。另外，世界上没有一家公司或单位能生产全部细菌的抗血清，即使是最常用的大肠杆菌的抗血清，也只有少数几个公司和单位有全部血清型的抗血清而且价格昂贵。1993年,Luk, J.M.C et.al选取沙门氏菌(5: eflierica )0_抗原基因簇的特异核苷酸序列，通过PCR方法鉴定了沙门氏菌的O-抗原，开启了从0抗原基因簇中筛选特异分子标识的先河，为细菌多样的O-抗原检测提供了高通量、检测速度快、特异性强、灵敏度高的分子检测方法。细菌O抗原种类繁多，一般不同的细菌具有不同的O-抗原，同一种属内的细菌也大多有不同的O-抗原。研究表明，细菌O-抗原的多样性是由负责其合成的基因簇的遗传学多样性导致，O-抗原基因簇中的一些特定基因对于其编码的表面抗原具有极高的特异性，由此为启发，可以从O抗原基因簇中筛选特异分子标识，用于军团菌分子分型。目前，应用军团菌检测方面的专利或专利申请主要有: (I)扩增常见致病型军团菌基因特异区引物及其应用(公布号:CN102168131)，该专利申请提供了一种分别扩增米克戴德军团菌Hegionella micdadei)；博兹曼军团菌{Legionella bozemanii);长滩军团菌{Legionella 1ngbeachae')中 gjTi 基因(DNAgyrase B subunit gene,以下简称特异区的引物,还提供了一种包括扩增米克戴德军团菌、博兹曼军团菌、长滩军团菌基因特异区的引物的PCR试剂盒，利用该PCR试剂盒对米克戴德军团菌、博兹曼军团菌、长滩军团菌进行检测，简便快速、特异性好、灵敏度高，可用于水体和临床样品的监督和检测、饮用水中病原菌检测、细菌学分类及流行病学调查等领域，具有深远的社会效益和较大的经济效益。(2) 一种检测水中常见致病菌的DNA微阵列(公布号:CN1396270A，公开日:2003年2月12日)，该专利申请公开了一种DNA微阵列检测水中常见致病菌的技术。该技术利用16S rRNA基因检测与鉴定水中常见致病菌，两条引物分别设计在16S rRNA基因的保守区，探针在16S rRNA基因的可变区。该DNA微阵列技术可检测埃希氏菌属、志贺氏菌属、沙门氏菌属、葡萄球菌属、变形杆菌属、厌氧梭状芽孢杆菌属、链球菌属、军团杆菌、结核分枝杆菌、耶尔森氏菌、李斯特氏菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌，可用于临床疾病诊断、水和食品的监督与检测与流行病学调查。该技术由于16S rRNA的高度保守性，分辨能力较低，无法区分到种，也无法区分大肠杆菌和志贺氏菌。(3)一种扩增嗜肺军团菌gyrB基因特异区的引物及其应用(公布号:CN101967474)，该专利申请公开了一种扩增嗜肺军团菌中gyrB基因(DNA gyrase B subunit gene,以下简称gyrB)特异区的引物，还提供了一种包括扩增嗜肺军团菌gyrB基因特异区的引物的PCR试剂盒，利用该PCR试剂盒对嗜肺军团菌进行检测，简便快速、特异性好、灵敏度高，可用于水体和临床样品的监督和检测、饮用水中病原菌检测、细菌学分类及流行病学调查等领域，具有深远的社会效益和较大的经济效益。(4)嗜肺军团菌基因克隆、重组、表达和蛋白纯化方法(公布号:CN1664105)，该专利申请公开了一种嗜肺军团菌Legionella pneumophila macrophage infectivity potentiator基因的克隆、重组、表达、纯化方法与专用引物，以及MIP蛋白及其类似物、衍生物在军团菌感染病人的临床诊断和治疗方面的应用。本方法将获得的嗜肺军团菌基因组DNA，用PCR方法获得基因，并将该基因重组后克隆到大肠杆菌表达载体中，诱导表达后提取MIP蛋白，进而应用亲和层析方法得到高纯度的蛋白，为临床进一步诊断嗜肺军团菌感染应用于检测嗜肺军团菌抗原和抗体。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种用于检测常见致病军团菌的基因分型芯片及检测用试剂盒，以弥补传统饮用水水质检测技术存在的费时、耗力，分辨能力差的缺陷，扩展病原微生物检测范围，提高检测灵敏度和特异性，降低劳动强度，缩短检测周期。为实现上述目的本专利技术公开了如下的技术 内容: 一种检测致病军团菌(Z￡^i0/^77a)的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的寡聚核苷酸探针，其特征在于该寡聚核苷酸探针包含下述DNA片段中的至少一种: (1)嗜肺军团菌，安氏军团菌，博滋曼军团菌，杜莫夫军团菌，费菲军团菌，戈尔曼军团菌，乔丹河军团菌，长滩军团菌，米氏军团菌，迈氏军团菌等10种军团菌的16s-23s间区序列(ITS)中所选取的至少一种DNA片段； (2)(I)中选取的DNA片段的互补DNA片段； 本专利技术所述的固相载体为带有活性基团的玻璃片。所述寡聚核苷酸探针优选具有SEQ ID NO: 1-29所示的核苷酸序列，或不同于SEQID NO: 1-29但编码的氨基酸序列与SEQ ID NO: 1-29所编码的氨基酸序列相同的核苷酸序列；本专利技术所述的基因芯片，还包括正对照探针。上述的优选序列及功能如下所示:权利要求1.一种检测多种致病军团菌的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测多种致病军团菌的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的寡聚核苷酸探针，其特征在于该寡聚核苷酸探针包含下述DNA片段中的至少一种：（1）嗜肺军团菌，安氏军团菌，博滋曼军团菌，杜莫夫军团菌，费菲军团菌，戈尔曼军团菌，乔丹河军团菌，长滩军团菌，米氏军团菌，迈氏军团菌等10种军团菌的16s?23s间区序列（ITS）中所选取的至少一种DNA片段；（2）（1）中选取的DNA片段的互补DNA片段；上述所述的固相载体为带有活性基团的玻璃片。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，曹勃阳，刘向前，王敏，冯露，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。