【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种制备宝霍苷I纯品的方法。主要包括淫羊藿苷的葡聚糖酶水解,及宝霍苷I的反相高效液相制备纯化。
技术介绍
淫羊藿(Herba Epimedii)隶属小檗科(Berberridaceae)淫羊藿属,为常用中药,具有强筋骨,祛风湿,抗病毒等功效。现代药理研究发现,淫羊藿中宝霍苷I等去糖后的低分子量化合物具有比含量较高的淫羊藿苷具有更高的活性。目前市场上,宝霍苷I非常稀缺,而且价格昂贵,而对宝霍苷I的需求越来越大,因此开发宝霍苷I的制备方法是非常有意义的。根据现有的专利及文献,宝霍苷的主要制备方法有酸水解法,碱水解法以及酶水解法。酸碱水解法,方法简单,然而由于其水解环境剧烈,制备出的宝霍苷I往往活性损失较大。酶水解法主要采用β-葡萄糖苷酶,然而其活性较低,水解效率低,原材料浪费严重。葡聚糖酶也叫β-1,3_1,4葡聚糖酶,是一种专一作用于β-葡聚糖的1,3及1,4糖苷键的内切酶。该酶可以通过Bacillus Lichenifomis菌株经过液态深层发酵制得,制备工艺路线成熟,是一种廉价高活性的葡萄糖苷键水解酶。其活性非常高,水解淫羊藿苷为宝霍苷I的转化率最高大于98%,且通过合适的回收,酶可二次利用,第二次的转化率大于50%,充分利用了原材料,节省了成本。本文首次尝试采用葡聚糖酶作为淫羊藿苷的水解酶,将相对价廉易得的淫羊藿苷纯品,转化为学术及经济价值均较高的宝霍苷I纯品,并对其生产条件进行了优化研究。结果发现,葡聚糖酶具有很高的内切酶活性,可以高产量的转化淫羊藿苷为宝霍苷I,同时结合反相高效制备色谱技术,可以制备高纯宝霍苷I纯品。
技术实现思路
本专 ...
【技术保护点】
一种宝霍苷I纯品的制备方法,其特征在于:以淫羊藿苷为原料,葡聚糖酶水解及反相高效制备色谱纯化,即可获得纯度大于98%的宝霍苷I纯品;具体步骤如下:1)葡聚糖酶水解:将1?25mg淫羊藿苷用10?100ml柠檬酸缓冲溶液溶解,加入40?150ul、4?10ug/ul的葡聚糖酶水溶液,保持19?80摄氏度并搅拌3?6小时,获得宝霍苷I沉淀;宝霍苷I沉淀经水洗除去部分酶和大部分葡萄糖,进一步用?4到4摄氏度冷甲醇溶解除去残余酶和不溶沉淀,上清液浓缩干燥即可得到宝霍苷I粗品;2)反相高效制备液相纯化:宝霍苷I粗品用甲醇溶解,经0.45um微膜过滤;通过微膜滤出的样品上样分析,采用C18反相填料制备色谱柱分离纯化,采用C18键合硅胶填料,采用体积浓度70?100%甲醇水溶液等度洗脱,采用紫外检测器检测,检测波长270nm,收集相应保留时间处馏分,浓缩干燥即得纯度大于98%的宝霍苷I纯品。
【技术特征摘要】
1.一种宝霍苷I纯品的制备方法,其特征在于:以淫羊藿苷为原料,葡聚糖酶水解及反相高效制备色谱纯化,即可获得纯度大于98%的宝霍苷I纯品;具体步骤如下: 1)葡聚糖酶水解: 将l_25mg淫羊藿苷用IO-1OOml柠檬酸缓冲溶液溶解,加入40-150ul、4_10ug/ul的葡聚糖酶水溶液,保持19-80摄氏度并搅拌3-6小时,获得宝霍苷I沉淀; 宝霍苷I沉淀经水洗除去部分酶和大部分葡萄糖,进一步用-4到4摄氏度冷甲醇溶解除去残余酶和不溶沉淀,上清液浓缩干燥即可得到宝霍苷I粗品; 2)反相高效制备液相纯化: 宝霍苷I粗品用甲醇溶解,经0....
【专利技术属性】
技术研发人员:肖红斌,杨乾栩,王莉,
申请(专利权)人:中国科学院大连化学物理研究所,
类型:发明
国别省市:
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