本发明专利技术提供了新的抑癌基因UNC5D基因及其编码蛋白的新应用，具体涉及：UNC5D基因和/或其编码的蛋白在制备治疗癌症的药物中的应用；检测UNC5D基因或其编码的蛋白的试剂在制备用于癌症的辅助诊断和/或预后判断的组合物中的应用；UNC5D基因和/或其编码的蛋白在制备具有抑制肿瘤细胞的生长、抑制肿瘤细胞的迁移、抑制肿瘤细胞的成瘤性、和/或诱导细胞凋亡的效果的制剂中的应用。本发明专利技术研究发现UNC5D是一种新的潜在抑癌基因，特别是在肾癌的发生、发展过程中具有重要作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一个新的潜在抑癌基因及其编码蛋白的新应用，具体地说，本专利技术涉及UNCro作为一个新的潜在抑癌基因及其编码蛋白的应用。
技术介绍
UNC5D属于UNC5受体家族成员。UNC5受体家族在1997年被报到是神经生长因子netrin-1的受体，该家族中除UNCOT外，其它成员还包括UNC5A、UNC5B、UNC5C。而UNCOT在UNC5家族中是发现最晚的。Netrin-1及其受体最初是被发现在神经经系统发育中起重要作用，因其能够调控神经纤维的定向迁移。近年来，Netrin-1及其受体在肿瘤发生中的作用越来越受到重视。Netrin-1及UNC5家族中的UNC5A、UNC5B和UNC5C在肿瘤发生发展中的作用都相继有了报道。目前关于UNCro基因的肿瘤生物学功能仍未有任何报道。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于研究UNCro在肿瘤特别是肾癌中的表达特点和其表达调控的机制、研究UNCro的新功能并提供UNCro的新应用。在本专利技术中，所述UNCro包括UNCro基因或UNCro蛋白等。所述UNCOT蛋白为如SEQ ID N0.2所 示氨基酸序列组成的蛋白，或在SEQ ID N0.2所示氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且与SEQ ID N0.2所示氨基酸序列组成的蛋白具有相同功能的衍生蛋白。所述UNCro基因为编码本专利技术的UNCro蛋白的多核苷酸序列，优选为编码SEQID NO:2所示氨基酸序列的多核苷酸序列，或者除了上述氨基酸序列的编码序列之外，还可以包括非编码序列，例如内含子、编码序列5'或3'端的非编码序列等。其中优选的UNCro基因为SEQ ID N0.1所示的多核苷酸序列，其为在GenBank的登记号为匪080872.2的基因。或者，更优选的UNCro基因为一种分离的核苷酸序列，其只包含编码UNCro蛋白序列，例如SEQ ID N0.1所示的编码序列:第329 3190位核苷酸序列。本领域普通技术人员已知，本专利技术的UNCro基因的核苷酸序列可以完全相同于如SEQ ID NO:1所示的编码序列，也可以由于遗传密码的简并性，不完全等同于上述核苷酸的编码序列。本专利技术研究了 UNCro在人类多种正常组织中的表达情况，及在多种组织来源的肿瘤细胞系、配对的肾癌和癌旁组织中的表达特点，发现UNCro在多种组织来源的肿瘤细胞系中表达下调或缺失，其在肾癌组织中的表达明显低于癌旁组织。本专利技术还进一步通过免疫组化实验，证实UNCro蛋白在肾癌组织中表达下调。本专利技术通过分析临床信息资料，发现UNCro在肾癌组织中的表达下调程度与肾癌的Fuhrman分级呈相关性。本专利技术进一步揭示了 UNCro表达下调的机制，发现染色体上的杂合性缺失(LOH)及UNCro基因启动子区CpG岛的甲基化是导致UNCro在多种肿瘤细胞系及肾癌组织中表达下调的重要机制。本专利技术通过实验证实:在UNCro表达下调或缺失的肾癌细胞系(786-0及A498)中恢复UNCro的表达，可抑制肿瘤细胞增殖、细胞迁移和肿瘤细胞的克隆形成率。通过分析肾癌细胞系786-0表达UNCro前后细胞周期的变化，发现UNCro抑制细胞增殖是通过减缓G2/M的释放实现的。本专利技术通过在人胚肾细胞(HEK293T)中过表达UNCOT发现，UNC5D可以诱导HEK293T的凋亡，通过western blot证实UNCro所诱导的凋亡是caspase依赖的。根据以上结果，可认为UNCro是一个抑癌基因，并可作为癌症的临床诊断和/或预后判断的辅助指标，而且UNCro基因或UNCro蛋白在治疗和/或抑制肿瘤中具有重要应用价值。根据本专利技术的实验研究发现，本专利技术提供了 UNCro基因或其编码的蛋白(UNCOT蛋白)在制备治疗癌症的药物中的应用。可将本专利技术的UNCro序列利用任何已知的转导、转化或转染的方法施用于患病个体的肿瘤部位，在UNCro表达下调或缺失的肿瘤细胞系及癌组织中恢复UNCro的表达，通过抑制细胞周期进程从而抑制细胞生长，抑制肿瘤细胞增殖、细胞迁移或肿瘤细胞的克隆形成率，可以用于治疗癌症。根据本专利技术的实验研究发现，本专利技术还提供了检测UNCro基因或其编码的蛋白的试剂在制备用于癌症的辅助诊断和/或预后判断的组合物中的应用。可将所述的UNCro作为癌症诊断和/或预后判断的一个新指标，通过检测样品中UNCro的表达或表达水平，从而为癌症的辅助诊断和/或预后判断提供新的依据。可以利用本领域已知的任何方法检测本专利技术的UNCro在核酸水平的表达，也可在蛋白质水平检测本专利技术UNCro的表达水平。所述检测UNCro基因或其编码的蛋白的试剂包括:用于在PCR中合成UNCro基因DNA链和/或其cDNA链的PCR引物、或抗UNCro蛋白的抗体等。本专利技术的UNCro基因或UNCro蛋白均可以通过常规方法获得。例如，UNC5D基因的多核苷酸序列可以依据标准的PCR扩增技术将cDNA、mRNA或者基因组DNA作为模板，并选取合适的寡核苷酸引物扩增得到。这样得到的核苷酸可以克隆进合适的载体中，并用DNA分析技术进行序列描述。也可以通过标准DNA合成技术得到。本专利技术的UNCro蛋白可用各种已知的方法通过转化宿主细胞并在被转化的宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用适当的方法诱导启动子，然后继续培养，培养完成后，回收和纯化本专利技术的UNCro蛋白。本专利技术中，作为重组UNCro蛋白，可带有或未带有标签。本专利技术的检测UNCro基因或UNCro蛋白的试剂也可通过本领域普通技术人员已知的各种方法来制备。具体而言,所述癌症为肾癌。本专利技术还提供了 UNCro基因或其编码的蛋白在抑制肿瘤细胞的生长和/或增殖、抑制肿瘤细胞的克隆形成、和/或肿瘤细胞迁移中的应用。本专利技术通过实验证实，UNCro基因或其编码的蛋白能够抑制肿瘤细胞的生长和增殖、抑制肿瘤细胞的克隆形成并能抑制肿瘤细胞迁移。具体而言，所述肿瘤细胞为肾癌细胞。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述细胞迁移为纤粘连蛋白诱导的肾癌细胞的迁移。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术所述的UNCro在具体应用时，可以是包含于载体中。所述载体可以为真核表达载体或病毒，优选为腺病毒。例如，在本专利技术的一个具体实施方案中，是通过腺病毒Ad-UNCOT而明显抑制肿瘤细胞的增殖或迁移。另一方面，本专利技术还提供了一种用于治疗癌症、抑制肿瘤细胞的生长、抑制肿瘤细胞的迁移、抑制肿瘤细胞的成瘤性、 和/或诱导细胞凋亡的药物组合物，该药物组合物含有:UNC5D基因和/或其编码的蛋白，以及一种或多种药用赋形剂或药用载体。具体地，本领域的技术人员可根据其所掌握的现有技术知识选用适当的药用赋形剂或药用载体，例如可以包括生理盐水、等渗葡萄糖溶液、缓冲盐水、甘油、乙醇及上述溶液的组合等。所述药物组合物可以采用适当的制剂形式并通过适当的给药途径来施用，这些对于本领域的技术人员而言在其知识范围内无需创造性劳动就可确定最佳的方式。根据本专利技术的具体实施方案，所述癌症为肾癌，所述肿瘤细胞为肾癌细胞。另一方面，本专利技术还提供了一种用于癌症特别是肾癌诊断和/或预后判断的试剂盒，所述试剂盒含有用于检测UNCro基因或其编码的蛋白的试剂，例如:用于在PCR中合成UNC5D基因DNA链和/或其cDNA链的PCR引物，或抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
UNC5D基因和/或其编码的蛋白在制备治疗癌症的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.UNC5D基因和/或其编码的蛋白在制备治疗癌症的药物中的应用。2.检测UNCro基因或其编码的蛋白的试剂在制备用于癌症的辅助诊断和/或预后判断的组合物中的应用； 优选地，所述检测UNCro基因或其编码的蛋白的试剂包括:用于在PCR中合成UNCro基因DNA链和/或其cDNA链的PCR引物、或抗UNCOT蛋白的抗体。3.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述癌症为肾癌。4.UNC5D基因和/或其编码的蛋白在制备具有抑制肿瘤细胞的生长、抑制肿瘤细胞的迁移、抑制肿瘤细胞的成瘤性、和/或诱导细胞凋亡的效果的制剂中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其中，所述肿瘤细胞为肾癌细胞。6.根据权利要求4所述的应用，其中，所述迁移为细胞外基质纤粘连...
【专利技术属性】
技术研发人员：张君，张毓，吕丹，董冬，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：
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