荧光定量PCR检测醋醅中巴斯德醋酸杆菌的方法技术

本发明专利技术采用荧光定量PCR来检测醋醅群落中巴斯德醋酸杆菌的动态变化。本发明专利技术针对醋醅群落中的巴斯德醋酸杆菌设计特异性引物，提取分离纯化得到的巴斯德醋酸杆菌的基因组，然后利用设计的特异性引物进行PCR得到特异性目的片段，再将目的片段与pMD19-TVector连接，获得重组质粒，将重组质粒转化JM109大肠杆菌感受态细胞，挑取成功转化的转化子进行扩大培养，获得高浓度质粒，然将此高浓度质粒做10倍比稀释，作为荧光定量PCR的标准品。利用液氮研磨、酶法和高盐结合的方法提取发酵过程中不同时间点醋醅群落的总DNA作为待测样品，将标准样品和待测样品同时进行荧光定量PCR，绘制标准曲线，然后根据标准曲线计算待测样品中巴斯德醋酸杆菌的含量。本发明专利技术提供了一种荧光定量PCR的分子生态技术对醋醅中的巴斯德醋酸杆菌进行定量分析，为其他微生物群落的研究提供技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，具体涉及荧光定量PCR技术应用于固态酿醋微生物群落中特定种属微生物的定量研究。
技术介绍
我国食醋的生产历史悠久，根据产地、品种的不同，食醋中醋酸含量也不尽相同。例如山西老陈醋的酸味较浓，而镇江香醋的酸味酸中带柔，酸而不烈。各地酿醋工艺、口感等的不同，造就了山西老陈醋、镇江恒顺香醋、福建永春老醋、保宁醋“四大名醋”。但众多的食醋生产厂家的发酵过程都以传统的经验为主，工艺可控性较差，并且产品品质存在批次差异，尤其是风味差异较大。这主要是由于酿造过程中微生物复杂多样，对醋醅发酵过程中的微生物作用机制不清楚。中国食醋的酿造工艺是多菌种混合发酵工艺，通过多种微生物的代谢作用产生风味饱满、酸味柔和的食醋。食醋的生产中有两个主要的发酵阶段:酒精发酵和醋酸发酵。在酒精发酵阶段，淀粉质原料如糯米、高粱等经过霉菌和酵母菌的一系列代谢，最终生成酒精；而在 醋酸发酵阶段是包括醋酸菌、乳酸菌在内的众多细菌起主要的作用，该阶段是决定食醋风味和品质的关键步骤。其中包括巴斯德醋酸菌在内的醋酸菌是醋酸发酵过程的优势微生物。荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用荧光定量PCR检测醋醅中巴斯德醋酸杆菌的方法，其特征及具体步骤如下：①设计、合成针对巴斯德醋酸杆菌（Acetobacter?pasteurianus）的特异性引物；②对分离纯化得到的巴斯德醋酸杆菌进行摇瓶培养，利用细菌提取试剂盒对其培养液进行DNA提取；③以巴斯德醋酸杆菌的DNA为模板，以Ap?F/Ap?R为引物进行PCR扩增，获得目的片段，并将PCR产物割胶回收；④构建重组质粒，将目的片段与pMD19?T?Vector?连接，连接后转化JM109大肠杆菌感受态细胞，挑取转化子扩大培养，提取质粒，并用PCR验证目的片段是否插入pMD19?T?Vector，验证成功的质粒作为荧光定量PC...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许正宏，史劲松，陆震鸣，王宗敏，李国权，钱建瑛，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：