一种重组甘露聚糖酶及其基因工程菌和水解制备甘露寡糖的方法技术

本发明专利技术提出了一种重组甘露聚糖酶及其基因工程菌和水解制备甘露寡糖的方法，其步骤为：1）根据毕赤酵母密码子偏爱性，优化重组β-甘露聚糖酶基因；2）构建含有重组β-甘露聚糖酶基因的表达载体pHBM905BDM-Man，转化毕赤酵母GS115感受态细胞，培养验证得单拷贝基因工程菌；3）构建培养验证多拷贝的基因工程菌；4）用不同拷贝数的基因工程菌高效表达制备重组β-甘露聚糖酶；5）用重组β-甘露聚糖酶水解甘露聚糖底物生产甘露寡糖，底物水解浓度15-40%，温度50-55℃，时间0.5-2小时。目前，两拷贝β-甘露聚糖酶基因工程菌GS115/MAN78（CCTCCNo：2012554）表达水平较高。本发明专利技术重组β-甘露聚糖酶活性高达5000U/mL（DNS法），水解底物特异性高，水解底物浓度明显高于其他方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种 编码重组的0 -甘露聚糖酶的毕赤酵母基因工程菌株的构建以及利用毕赤酵母表达甘露聚糖酶的方法，同时，利用该重组甘露聚糖酶水解高浓度甘露聚糖制备甘露寡糖的方法，在工业生产中无需调节PH，操作简单，能够降低生产成本，缩短工艺流程，简化后续处理步骤。
技术介绍
甘露低聚糖是由2 — 10个单糖分子通过糖苷键连接而成的低度聚合糖，可以有效促进生物体内以双歧杆菌为代表的肠道有益菌群的特异性增殖，并具有抑制体内病原菌生长、减少有毒代谢产物产生、防止便秘、保护肝脏、抗肿癌及增强机体免疫力等多种生理功能。此外，低聚甘露糖还具有不被人体降解、低甜度、不引发龋齿、不增加血糖浓度等特点，是新一代功能性食品。近年来，关于低聚糖的研究越来越多，已有多种功能性低聚糖产品投入市场，但目前大多数低聚糖产品属于普通型的低聚糖，有效成分不足50%。欧美等国因限于资源，主要采用化学合成方法和从酵母细胞壁分离提取甘露低聚糖，其中酵母发酵法成本低，污染少，但它们的产品纯度低、性能差。为了提高产品纯度，必须在后续工艺中使用操作复杂成本过高的提纯工序，例如离子交换色谱法、凝胶过滤色谱法等。酵母发酵法生产的关键本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组甘露聚糖酶基因，其特征在于：优化后的序列为：atgttgccaa?aggcttctcc?agccccatcc?acttcttcta?gtgccgcctc?tacatctttt?60gcatctactt?ctggcttgca?gtttactatt?gatggtgaaa?ctggttattt?tgctggtact?120aactcttact?ggattggttt?tttgactgat?aacgctgatg?ttgatttggt?catgggtcat?180ttgaagtctt?caggattgaa?gattttgaga?gtttggggtt?ttaacgatgt?cacttctcaa?24...

【技术特征摘要】
1.一种重组甘露聚糖酶基因，其特征在于:优化后的序列为:atgttgccaa aggcttctcc agccccatcc acttcttcta gtgccgcctc tacatctttt 60gcatctactt ctggcttgca gtttactatt gatggtgaaa ctggttattt tgctggtact 120aactcttact ggattggttt tttgactgat aacgctgatg ttgatttggt catgggtcat 180ttgaagtctt caggattgaa gattttgaga gtttggggtt ttaacgatgt cacttctcaa 240ccatctagtg gtactgtttg gtatcaacta catcaggatg gcaagtctac tattaacaca 300ggtgctgacg gtttgcagag attggattac gttgtcagtt cagccgaaca gcacgatatc 360aaacttatca taaacttcgt gaattattgg acagactacg gcggcatgtc tgcatacgtt 420tctgcttacg gtggatctgg tgagactgat ttttacactt ctgacactat gcaaagtgct 480taccagacct acattaagac agttgtcgag cgttactcta attcctctgc tgtttttgct 540tgggaattgg ctaacgaacc aagatgtcct tcttgcgata cttcagtcct atataactgg 600atcgagaaga cctctaagtt catcaagggc ttggacgccg atagaatggt ttgtattggt 660gacgaaggtt ttggtttgaa tattgactcc gatggttctt acccatacca attctctgaa 720ggtctgaact ttaccatgaa cctaggcata gatactatcg actttggaac tctgcacttg 780tatccagatt catggggtac gtctgatgat tggggtaatg gctggatcac cgctcatgga 840gccgcctgca aggcagctgg taaaccttgt ttgttggagg aatacggtgt aacatctaat 900cactgttctg tggaaggttc ttggcagaag actgctttgt ctaccactgg tgtgggagct 960gatttgtttt ggcagtacgg agacgatttg agtactggaa agtctcccga tgatggtaac 1020acaatttact acggtacttc cgactatcag tgcttggtta cagatcatgt tgcagctatc 1080ggttctgct 1089设计的引物序列为:man-lGTCAATGTTGCCAAAGGCTTCTCCAGCCCCATCCACTTCTTCTAGman-2TAGATGCAAAAGATGTAGAGGCGGCACTAGAAGAAGTGGATGGGGC 46man-3GCCTCTACATCTTTTGCATCTACTTCTGGCTTGCAGTTTACTATTG 46man-4CAGCAAAATAACCAGTTTCACCATCAATAGTAAACTGCAAGCCAGA 46man-5GGTGAAACTGGTTATTTTGCTGGTACTAACTCTTACTGGATTGGTT 46man-6ACATCAGCGTTATCAGTCAAAAAACCAATCCAGTAAGAGTTAGTAC 46man-7TTTTGACTGATAACGCTGATGTTGATTTGGTCATGGGTCATTTGAA 46man-8TCTCAAAATCTTCAATCCTGAAGACTTCAAATGACCCATGACCAAA 46man-9TCTTCAGGATTGAAGATTTTGAGAGTTTGGGGTTTTAACGATGTCA 46man-1OACAGTACCACTAGATGGTTGAGAAGTGACATCGTTAAAACCCCAAA 46man-11TCAACCATCTAGTGGTACTGTTTGGTATCAACTACATCAGGATGGC 46man-12AGCACCTGTGTTAATAGTAGACTTGCCATCCTGATGTAGTTGATAC 46man-13AGTCTACTATTAACACAGGTGCTGACGGTTTGCAGAGATTGGATTA 46man-14GTGCTGTTCGGCTGAACTGACAACGTAATCCAATCTCTGCAAACCG 46man-15ACTTCAGCCCAACAGCACCATATCAAACTTATCATAAACTTCCTGA 46man-16CGCCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：马立新，赵西选，喻诗，李晔星，王亚平，姚永兰，
申请(专利权)人：湖北大学，湖北花果山实业有限公司，
类型：发明
国别省市：