一种极耐热糖苷酶基因及其可溶性表达与应用方法技术

本发明专利技术公开了一种极耐热糖苷酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达与应用，该极耐热糖苷酶基因的DNA序列SEQ?NO：1通过密码子的替换和诱导条件的改变，实现了该酶在大肠杆菌中可溶性表达，酶活达到13U/mL，该糖苷酶具有极强的耐热性能和特异性降解人参皂苷Rb1为Rd的能力，该酶在90℃、pH4.8的条件下酶活最高，在温度70-100℃、pH4.8-8.0的范围内，均保持较高的酶活，该酶对葡萄糖的耐糖系数Ki为1.5mol/L，该酶1U/mL在90℃、pH5.2、5％甲醇条件下30min可将99％人参皂苷Rb1转化为人参皂苷Rd，该极耐热糖苷酶性质优异，可应用于苷元类物质的酶法转化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程及生物质利用
，尤其涉及。
技术介绍
人参Panax ginseng是亚洲传统的名贵中药材,具有生物活性广泛,药理作用独特等特点，但其化学成分复杂。随着分析技术的革新，人参主要的化学成分得到了进一步的明确。研究发现，人参皂苷是人参主要的生物活性物质，到目前为止，已经分离鉴定40余种人参皂苷单体，其中5种主要皂苷(人参皂苷Rbl、Rb2、Re和Rgl)占总皂苷的80%以上，其它的阜苷(Rd、Rg3、Rh2和Compound K等)含量很低,称为稀有阜苷(Applied MicrobiologyandBiotechnology，2012，94:673-682)。由于对单体进行生物活性研究，易于阐明其确切的药理作用，发现活性较强的化合物，因此越来越多的学者对人参皂苷单体进行了生理功能的研究。人参皂苷Rd药理作用广泛，有些药理作用与其它人参皂苷类似，但是Rd具有许多独特的药理作用，如保护心脑血管、清楚自由基、促进T细胞增殖、提高天然杀伤细胞(NK)活性、保护神经系统等药理作用(中草药2009，40 (5):832-836)。但是，由于人参皂苷Rd在人参属植物中含本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种极耐热糖苷酶基因，其特征在于，该极耐热糖苷酶基因的获取过程为：参照NCBI上已发表的T.thermarum?DSM?5069极耐热糖苷酶的基因序列设计引物，登录号：YP_004660190.1，以提取的T.thermarum?DSM?5069基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得极耐热糖苷酶基因全序列；该极耐热糖苷酶基因克隆到pET?28a载体，可得到包含极耐热糖苷酶基因核苷酸序列的重组质粒pET?28a?bgl。

【技术特征摘要】
1.一种极耐热糖苷酶基因，其特征在于，该极耐热糖苷酶基因的获取过程为:参照NCBI上已发表的T.thermarum DSM 5069极耐热糖苷酶的基因序列设计引物，登录号:YP_004660190.1，以提取的T.thermarum DSM 5069基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得极耐热糖苷酶基因全序列； 该极耐热糖苷酶基因克隆到pET-28a载体，可得到包含极耐热糖苷酶基因核苷酸序列的重组质粒pET-28a_bgl。2.如权利要求1所述的极耐热糖苷酶基因，其特征在于，所述重组质粒pET-28a-bgl的制备方法为: 步骤一，以Thermotoga thermarum DSM 5069的基因组为模板，以Pl和P2为引物进行PCR扩增，得到极耐热糖苷酶基因的PCR扩增产物，引物为:Pl:CCCCCATGGGTTTTCCAAAGGATTTTCT Gl TCGG CG AGCk TGGC CoG CT T O: AAGTTGAAATGGGATATG，下划线表示Nco I，斜体加粗表示优势密码子替换的位占.P2:CCCCTCGAGCAT OC OC CACGTA TG G GCTl TT CA GGTAGTTGTG AAAOCG/GCCGTTGTCCCTTCTTTG,下划线表示Xho I，斜...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵林果，裴建军，曹福亮，王飞，汪贵斌，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：