云南红梨PybHLH基因及其原核表达载体和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种云南红梨花青素生物合成、毛状体发生发育及盐胁迫调控蛋白PybHLH基因及其原核表达载体，本发明专利技术利用RT-PCR技术从云南红梨云红梨1号红色果皮中克隆PybHLH基因，然后构建了原核表达载体pGEX-4T-PybHLH，pGEX-4T-PybHLH载体在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达PybHLH蛋白，纯化后，获得云南红梨PybHLH纯化蛋白，本发明专利技术还将PybHLH基因原核表达载体应用在制备PybHLH特异性抗体中，获得的PybHLH特异性抗体还用于研究蛋白质与蛋白质以及蛋白质与DNA的相互作用以及对PybHLH转基因植物的检测，本发明专利技术获得的PybHLH特异性抗体中含有谷胱甘肽S转移酶（GST），获得的PybHLH特异性抗体运用于FarWesternblotting和免疫共沉淀实验研究蛋白质相互作用以及准确分离获得与PybHLH相互作用的蛋白质和DNA片段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种云南红梨花青素生物合成、毛状体发生发育及盐胁迫调控蛋白基因及其原核表达和原核表达载体在制备PybHLH蛋白和特异性抗体中的应用。
技术介绍
红色果皮是梨分子育种的重要性状指标。云南省因其独特的地理和气候条件而拥有较多的红皮梨种质资源，1986年以来先后已选育出早白蜜、美人酥、满天红和云红梨I号四个栽培品种。但生产中除云红梨I号外，其它3个品种都会因气候变化而导致着色较差甚至不着色，因此需要研究红梨果皮的着色机理。已有研究表明植物花青素的合成是由转录复合物MYB/bHLH/ WD40调控的。前人对MYB研究较多，而对植物中的bHLH和WD40蛋白研究较少。在拟南芥中LDOX基因启动子直接包括EGL3和TT8在内的不同的MYB-BHLH-TTG1转录复合物的调控，egl3、tt8和egl3 tt8功能缺失突变体试验也表明了 egl3和tt8是拟南芥幼苗花青素累积的必要条件。在拟南芥中JAZ( Jasmonate ZIM-domain)蛋白与WD-repeat/bHLH/MYB 转录复合物中的 bHLH (Transparent Testa8, G本文档来自技高网...

【技术保护点】
云南红梨PybHLH基因，其特征在于：PybHLH基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示或编码如SEQ?ID?NO：4所示的氨基酸序列的蛋白质。

【技术特征摘要】
1.云南红梨/基因，其特征在于基因的核苷酸序列如SEQID N0:3所示或编码如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的蛋白质。2.权利要求1所述云南红梨基因的原核表达载体pGEX-4T-/^^yZ仏其特征在于:该载体含有/基因，上游有Ptac启动子和细菌核糖体结合位点RBS，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李昆志，崔道雷，张晓东，樊磊，陈丽梅，舒群，苏俊，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：