生产γ-聚谷氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及构建方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种生产γ-聚谷氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及构建方法和应用，其特征是：是以野生型C.glutamicumATCC13869为出发菌株，转入含有γ-PGA合成酶复合体基因pgsBCA的重组表达质粒获得的工程菌。本发明专利技术的重组谷氨酸棒杆菌由于含有γ-PGA合成酶复合体基因pgsBCA，在生物素限制或添加Tween40发酵条件下，可以合成大量γ-PGA，降低γ-PGA生产过程中的谷氨酸添加成本，为更好地实现一步法生产γ-PGA的创新奠定基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生产Y-聚谷氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及构建方法和用途。
技术介绍
谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)最初由Kinoshita及其同事在土壤环境中分离得到，呈短杆至小棒状，有时微弯曲，两端钝圆，不分枝，单个或成八字排列，菌体0.7 0.9X 1.0 2.5微米，革兰氏阳性，无芽孢，不运动、菌落湿润、圆形，广泛存在于土壤、沟水、堆肥中及食品厂、酿酒厂、酱油厂、味精厂周围。在生物素限制、添加Tween40或盘尼西林等条件下，C.glutamicum通过磷酸烯醇式丙酮酸糖转运系统(PTS系统)利用葡萄糖、果糖、甘露糖和蔗糖作为碳源和能源用于生长和产谷氨酸(DominguezH,Lindley ND.Complete sucrose metabolism requires fruetose phosphotransferaseactivity in Corynebacterium glutamicum to ensure Phosphorylation in liberatedfructose.Appl Environ Microbiol,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产γ?聚谷氨酸的重组谷氨酸棒杆菌，其特征是：是以野生型C.glutamicum?ATCC13869为出发菌株，转入含有γ?PGA合成酶复合体基因pgsBCA的重组表达质粒获得的工程菌。

【技术特征摘要】
1.一种生产Y -聚谷氨酸的重组谷氨酸棒杆菌，其特征是:是以野生型c.glutamicumATCC13869为出发菌株，转入含有Y -PGA合成酶复合体基因pgsBCA的重组表达质粒获得的工程菌。2.—种权利要求1所述的生产Y-聚谷氨酸的重组谷氨酸棒杆菌的构建方法，其特征是:包括下列步骤:(I)构建含有Y -PGA合成酶基因pgsB、pgsC和pgsA的重组表达质粒；所述重组表达质粒是将pgsBCA基因插入E.coli/和C.glutamicum穿梭载体pEKEx2,得到的重组质粒pEKEx2 — BCA ； (2)将步骤(I)构建的重组表达质粒转化入C.glutamicumATCC13869 中。3.根据权利要求2所述的生产Y-聚谷氨酸的重组谷氨酸棒杆菌的构建方法，其特征是:步骤(I)的具体方法是:以枯草芽孢杆菌TKPG011基因组作为PCR模板，设计引物分别扩增PgsB、pgsC和pgsA,将pgsB片段两端分别接上BamHI和Hind III位点，引物为:正义链:5’ -gttgttggatccatgtggttactcattatagcctgtg-S’，反义链:5’ -gttgttaagcttcatgcttacgagctgcttaacc-3’，PCR 扩增参数如下:95°C 30s, 54°C 50s, 72°C lmin30s,共 30 个循环；将pgsC片段两端分别接上Hind III和NdeI位点，引物为:正义链:5’_gttgttaagcttctagatgttcggatcag-3’，反义链:5’ -gttgttcatatgcattaaattaagtggtaaac-3’，PCR 扩增参数如下:950C 30s, 56 V 40s, 72°C lmin,共30个循环；将pgsA片段两端分别接上NdeI和XbaI位点，引物为:正义链:5’ -gttgt...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚文娟，孟国梁，张伟，陈向凡，殷润婷，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：