利用海参肠自溶制备活性物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用海参肠自溶制备活性物质的方法，所采用的制备方法是海参肠匀浆后，经紫外线照射诱导，在一定条件下利用内源酶的作用使其自溶，自溶混合液经离心、冷冻浓缩、Sephadex?G-15分离、冷冻干燥制成。海参肠自溶活性物质为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。本发明专利技术的突出特点是利用海参肠本身具有的自溶能力制备活性物质，能够最大程度的保持原有的营养成分，同时还减少环境污染。加工处理的工艺合理、简单、成本低，加工产品绿色、无污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于海洋副产物精深加工领域，同时涉及自溶、凝胶柱层析和真空冷冻干燥的

技术介绍
海参肠是海参加工过程中的副产物，其蛋白质含量高，可达70%左右(以干重计)，是制备活性物质的良好原料。在中国，海参肠多被作为废弃物丢弃，利用率极低，造成资源浪费及环境污染。海参肠具有较强的自溶能力。目前，有关利用自溶技术从海参肠中制备活性物质的相关专利未见报道。关于海参肠自溶的文献报道，主要集中在对其内源酶进行分离、纯化及酶学特性研究。日本学者对日本传统发酵食品“盐辛”的制作方法进行改进，采用静水压不添加食盐而促进海参肠自溶，但未涉及海参肠自溶活性物质的提取及分离制备。
技术实现思路
针对海参加工中的副产物海参肠自溶能力较强，但同时并未得到充分利用的状况，本专利技术旨在提供一种利用自溶技术制备海参肠活性物质及其自溶残渣活性物质的制备方法。本专利技术，以海参肠为原料，经匀浆、自溶、离心取上清液即为海参肠自溶产物；该产物可进一步采用冷冻浓缩的方法浓缩至原体积的10 % 20 %;还可以采用真空冷冻干燥的方式干燥至水分含量小于等于8 %，从而获得不同产品形式的海参肠活性物质粗品。其中，所述自溶工序的优选方案为:匀浆后所得匀浆液经紫外线照射后，加入I 4倍体积、pH4.0 7.0的柠檬酸与磷酸氢二钠缓冲溶液，进行自溶。根据实际情况不同自溶可采取两种条件:温度在4 10°C时，自溶4 12h，或者温度在35°C 60°C自溶时，自溶0.5 4h。优选方式下，处理量较少时，紫外线照射可以选用30W紫外灯，距离0.5m照射5 40min后进行自溶诱导；处理量较大时，可以将海参肠匀浆液放置在不锈钢槽内，浆液厚度I 2cm，在上方0.2 0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 120 μ ff/cm2,保持5 40min进行自溶诱导。此外，所述离心取上清液的工序，优选方式为:2500 6000r/min离心10 30min,取上清液；或采用超滤的方式,收集IOkDa以下的组分。为了获得海参肠活性物质精制品，本专利技术在制得海参肠活性物质粗品后，经分离、冷冻干燥制得精制活性物质。其中，所述分离的工序，优选方式为:将所述海参肠活性物质粗品上样于葡聚糖凝胶Sephadex G-15层析柱,用去离子水洗脱,控制流速为0.3 0.5mL/min,对主要组分(峰面积占各组分总峰面积的70% 80%)进行收集。采用二苯代苦味肼自由基(DPPH)体系和还原能力测定体系，已经证明主要组分具有较强的清除DPPH自由基及还原能力。此外，所述冷冻干燥的优选工序为:在冷阱温度-30 -45°c、真空度为50 80Pa条件下进行干燥。本专利技术另外提供了一种，主要针对海参肠自溶残渣活性物质，其目的在于提高海参肠的利用率。具体过程为，以海参肠为原料，经匀浆、自溶。而后分离上清液获得海参肠自溶产物，同时利用余下残渣作如下处理:加入2 4倍体积的去离子水混勻，90 100°C加热5 15min。冷却后于50°C,pH7.0下,加入1500 3000U/g蛋白的中性蛋白酶，如枯草芽孢杆菌1398，酶解30 180min。酶解完毕后，酶解液于95 10CTC加热5 IOmin灭酶，冷却后于2500 6000r/min下离心10 30min,取上清液，或采用超滤的方式，收集IOkDa以下的组分，即为海参肠自溶残渣活性物质。该产物可进一步采用冷冻浓缩的方法浓缩至原体积的10% 20%;还可以采用真空冷冻干燥的方式干燥至水分含量小于等于8%，从而获得不同产品形式的海参肠自溶残渣活性物质粗品。将所述海参肠自溶残渣活性物质粗品上样于葡聚糖凝胶S^hadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.2 0.4mL/min,对峰面积占各组分总峰面积的80% 95%的主要组分进行收集。最后，在冷阱温度为-30 _45°C，真空度为50 80Pa，至水分含量为小于等于8%为止，冻干后制得精制活性物质。上述利用残渣制备活性物质的自溶工序，优选方案为:匀浆后所得匀浆液经紫外线照射后，加入I 4倍体积、pH4.0 7.0的柠檬酸与磷酸氢二钠缓冲溶液，进行自溶。此夕卜，优选方式下，处理量较少时，紫外线照射可以选用30W紫外灯，距离0.5m照射5 40min后进行自溶诱导；处理量较大时，可以将海参肠匀浆液放置在不锈钢槽内，浆液厚度为I 2cm,在上方0.2 0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 120 μ ff/cm2,保持5 40min进行自溶诱导。本专利技术突出的优点在于:1.提高了海参加工过程中副产物的利用率，使其所含营养成分和功能因子得到充分开发，同时还减少了对环境造成的污染。加工处理后的海参肠活性物质具有一定的抗氧化能力，可作为功能基料用于开发多种功能型产品，极具开发潜力。2.本专利技术提及的自溶是利用海参肠自身所含有的内源酶进行酶解，采用自溶技术制备海参肠活性物质，最大限度的保持了海参肠所含有的活性成分，得到更优质的产品。同时，针对海参肠自溶后的残渣，可采用外源酶酶解制备活性物质，使海参肠得以充分利用。本专利技术优选工艺中提及的工艺参数，旨在提高活性物质产品的得率和质量，在本专利技术的工艺参数条件下，海参肠自溶产物中TCA可溶性寡肽的含量提高为自溶前的2 3倍，自溶残渣蛋白质经变性处理、外源酶酶解后肽得率达到10% 30%。具体实施方式本专利技术一种海参肠自溶活性物质及其自溶残渣活性物质。海参肠自溶活性物质以海参肠为原料，经匀浆、自 溶、离心、冷冻浓缩、凝胶柱分离及冷冻干燥制成；海参肠自溶后的残渣，可经变性预处理、外源酶酶解、离心、冷冻浓缩、凝胶柱分离及冷冻干燥的方式制成。该两种营养品为淡黄色固体粉末，无臭、有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。1.海参肠自溶活性物质制备具体工艺步骤如下:(I)原料处理从新鲜海参中取出海参肠、清洗，去除泥沙和杂质，直接匀浆备用或在_15°C冷冻备用;⑵自溶利用海参肠所含内源酶的作用，使其在不同的条件下进行自溶:海参肠匀浆液经紫外线(30W，0.5m)照射5 40min后，加入I 4倍体积的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液(ρΗ4.0 7.0)，于35°C 60°C自溶0.5 4h或者于4°C 10°C自溶4 12h。自溶结束后,2500 6000r/min离心10 30min,取上清液；或采用超滤的方式，收集IOkDa以下的组分。真空冷冻浓缩后至原体积的10% 20%，或直接冷冻干燥，即为海参肠自溶活性物质粗品。处理量较大时，可以将海参肠匀浆液放置在不锈钢槽内，浆液厚度为I 2cm，上方0.2 0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 120 μ ff/cm2,保持5 40min进行自溶诱导，之后加入I 4倍体积的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液(pH4.0 7.0)，按照上述方法进行自溶。(3)分离将海参肠活性物质粗品上样于S^hadex G_15凝胶柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.3 0.5mL/min。对主要组分(峰面积占各组分总峰面积的70% 80% )进行收集，同时达到脱盐的目的。(4)干燥 对收集的活性组分进行冷冻干燥，冷阱温度为-30 _45°C，真空度为50 8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，以海参肠为原料，经匀浆、自溶、取上清液，冷冻浓缩至原体积的10％～20％或真空冷冻干燥至水分含量小于等于8％，制得海参肠活性物质粗品；再经分离、冷冻干燥制得精制活性物质。

【技术特征摘要】
1.一种利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，以海参肠为原料，经匀浆、自溶、取上清液，冷冻浓缩至原体积的10% 20%或真空冷冻干燥至水分含量小于等于8%，制得海参肠活性物质粗品；再经分离、冷冻干燥制得精制活性物质。2.根据权利要求1所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述自溶的工序为: 匀浆后所得匀浆液经紫外线照射后，加入1 4倍体积、pH 4.0 7.0的柠檬酸与磷酸氢二钠缓冲溶液，在35 60°C下自溶0.5 4h，或在4 10°C时，自溶4 12h。3.根据权利要求2所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述自溶工序中选用30瓦紫外灯,距离0.5m照射5 40min,进行自溶诱导； 或者，将匀浆液放置在不锈钢槽内，在上方0.2 0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 120 μ W/cm2，保持5 40min进行自溶诱导。4.根据权利要求3所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述取上清液的工序为:2500 6000r/min离心10 30分钟，取上清液；或者所述取上清液的工序采用超滤的方式，收集10kDa以下的组分。5.根据权利要求1-4任一所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述分离的工序为: 将所述海参肠活性物质粗品上样于葡聚糖凝胶Sephadex G_15层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.3 0.5mL/min,对峰面积占各组分总峰面积70% 80%的活性组分进行收集。6.根据权利要求5所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述冷冻干燥的工序为:在冷阱温度-30 _45°C、真空度为50 SOPa条件下进行干燥。7.一种利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，以海参肠为原料，经匀浆、自溶； 而后取残洛，加入2...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱蓓薇，吴海涛，董秀萍，郑杰，孙黎明，周大勇，李冬梅，杨静峰，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：