本发明专利技术公开了一种可长期保存昆明狼犬精液的冷冻液配方，其组成成分为：三羟甲基氨基甲烷2.4～2.46g、柠檬酸钠1.26～1.27g、双羟乙基一氨基乙烷磺酸1.50g、甘油4ml、葡萄糖2.0～2.126g、家鸽卵黄20ml、加灭菌双蒸水到100ml、青霉素10万单位、链霉素5万单位。为进一步改进犬精液冷冻方法，提高冻配受胎率，本发明专利技术通过对不同配方的稀释液、添加不同剂量的不同维生素对解冻后精子活力影响的试验，提供了一种优良稀释液，达到提高冷冻精液精子成活率的目的。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于精液冷冻液
，尤其涉及。
技术介绍
犬是最早被人类驯化的家畜，目前数量最多的也是犬科动物，是世界上外形差异最大、分布最广和品种最多的家畜。人工授精(Al)对犬业的发展至关重要，而人工授精技术的推广依赖于精液的长期保存。与其他动物(如牛、猪)相比，犬人工授精发展的速度缓慢，其主要原因是精液冷冻技术不过关，精液不能长期保存。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术实施例的目的在于提供。本专利技术实施例是这样实现的，一种昆明狼犬精液冷冻液配方，其组成成分为:三羟甲基氨基甲烷2.4 2.46g、柠檬酸钠1.26 1.27g、双羟乙基一氨基乙烷磺酸1.50g、甘油4ml、葡萄糖2.0 2.126g、家鸽卵黄20ml、加灭菌双蒸水到100ml、青霉素10万单位、链霉素5万单位。进一步，pH在6.5 6.8之间。进一步，每IOOml所述昆明狼犬精液冷冻液配方可加入VB1212ml、复合VB4ml、Vc0.50g。 进一步，复合VB的组分为:每2ml含BfOmg, B22mg, B62mg,烟酰胺30mg。进一步，复合VB的添加量为4mL/100mL、Vc的添加量为0.50g。为进一步改进犬精液冷冻方法，提高冻配受胎率，本专利技术通过对不同配方的稀释液、添加不同剂量的不同维生素对解冻后精子活力影响的试验，提供了一种优良稀释液，达到提闻冷冻精液精子成活率的目的，为进一步在生广当中提闻冷冻精液的品质提供一定参考。具体实施例方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供了一种昆明狼犬精液冷冻液配方及配制技术，其组成成分为:三羟甲基氨基甲烷2.4 2.46g、柠檬酸钠1.26 1.27g、双羟乙基一氨基乙烷磺酸1.50g、甘油4ml、葡萄糖2.0 2.126g、卵黄(家鸽)20ml、加灭菌双蒸水到100ml、青霉素10万单位、链霉素5万单位。pH在6.5 6.8之间。每IOOml加入VB1212ml、复合Vb (每2ml含B120mg, B22mg, B62mg，烟酰胺 30mg) 4ml, Vc0.50g 更有助于保护精子。以下结合具体的试验结果对本专利技术作进一步的说明。I试验材料1.1试验动物:昆明 狼犬5只、体重20 30kg、年龄2 8岁、健康、体况良好。1.2试验试剂:三羟甲基-氨基甲烷、双轻乙基-氨基乙烷磺酸、葡萄糖、乳糖、果糖、柠檬酸、甘油、青链霉素、卵黄、姬姆萨染液、伊红-苯胺黑死活染色液、维生素B12、维生素C、复合维生素B等。1.3试验仪器:电光生物显微镜、细胞计数器、恒温箱、离心机、液氮罐、pH试纸等。1.4试验地点:四川农业大学动物医学院胚胎工程基地、奶牛疾病康复中心。1.5试验动物处理:试验前2周进行犬瘟热、细小病毒疫苗免疫，适应性单笼饲养，主要以犬粮附以少量生肉及牛杂等定时、定量、由固定饲养员常规饲喂，自由饮水，采精后每只犬补食两枚生鸡蛋。2试验方法2.1精液的采集用拇指和食指握住犬阴茎，轻拉包皮，将龟头球握在手掌内并给予适当压力，待阴茎充分勃起，用集精漏斗收集精液。2.2精液品质的常规检查2.2.1精液的气味与色泽的检查:无异味、乳白色或淡乳白色者为正常精液；否则均为不正常。2.2.2精液的pH值检查:取一小滴精液用pH值为5.0 8.4的精密试纸测定。2.2.3精子活力的检查:将精液置于37°C的显微镜下，放大400 600倍镜检，用10级评分法作初步评分。进一步用伊红一苯胺黑死活染色法检测(活精子不着色)。精子活率=呈直线运动精子数/总精子数X 100%。2.2.4精子密度的测定(血细胞计数法):血细胞计数法，在400倍显微镜下目测活力，将精液用生理盐水20倍稀释后用血细胞计数板计算密度。2.2.5顶体完整率:用姬姆萨染色法，滴压制片，在1000倍显微镜下检测(活精子不着色)。精子顶体完整率=顶体完整型精子数/精子总数X 100%。1.4.5精子崎形率的检查:用姬姆萨染色法,每样品做两个涂片。在每片左右_二个不同部位各数100个精子，用血细胞计数器记录下每个部位的畸形精子数；每样品两个涂片的平均畸形精子数，代表此精液样品的畸形精子数。畸形率=(片I左右部畸形总数+片2左右部畸形总数)/400 XlOO %。2.3精液的稀释根据原精子的活力、密度等因素采用一步稀释法对精液进行稀释。稀释前，先将稀释液预热到38°C左右。试验中一般将精液密度保持在1.0X IO8AiL左右，不应过高，这样有利于解冻后精子活力的检测。稀释液现配现用，配好后摇匀，1500r/min离心5min。在大量预备试验的基础上，筛选出效果较好的稀释液1、I1、III，其配方见表I。表I稀释液配方稀释剂配方 mill配方in三羟甲基氨基甲炼2.450g0.40 2.906g双羟乙基一一氨基乙烷磺酸(BES)1.50g1.50g 乳糖3.40g 果糖1.250g葡萄糖2.126g0.60g4.16 柠檬酸钠1.470g1.853卵黄(EYC)20mL20mL25mL 甘油4mL 4raL4mL双蒸水加到IOOmLIOOmL宵霉素(IU/mL)10000010001000链霉素(mg/mL)50000 I]2.4精液的降温与平衡:把稀释好的精液包上8 16层纱布，转移到4°C的恒温环境中进行降温平衡3.5 4.0h02.5犬颗粒冻精制作用泡沫塑料改制成炸熏盒，内设两室:一室内上置铜纱网，下盛液氮，并设一盖子，为“熏室”;另一室内可直接盛放液氮，为“炸室”。将平衡后的精液直接滴于炸室内液氮中，滴后静置5 8s,在移入熏室中加盖熏蒸6min,收集装袋,浸入液氮。2.6精液的解冻将试管预热到35°C 40°C，从液氮罐内取出颗粒精液迅速投入试管内，轻轻摇动，待颗粒融化到2/3时，即从水浴中取出，继续摇动使其全部融化。3试验结果3.1不同稀释液类型对解冻后精子顶体完整率、活率和畸形率的影响表2所示，1、I1、III三种稀释液制作的冻精解冻后活率均大于30.00%, I液的冻后平均活率最闻，但I和II液差异不显著(P > 0.05),都与III液差异显著(P < 0.05)；顶体完整率和畸形率I液优于Π、ΙΙΙ液，差异显著(P < 0.05)，II液与III液之间差异不显著(P > 0.05)。表2不同稀释液类型对解冻后精子顶体完整率、活率和畸形率的影响稀释液类别重复次数精子活率(％)顶体完整率(％) 崎形率(％$ 冻前1292.22±0.89a98.15±1.77a3.13±0.lieI 243.35±0.85b78.25 + 3.22b28.11±0.35b冻 ________,、 II1242.28土1.44b66.87±4.12c37.23±1.24ain*_________—-1II1236.34±1.56c64.33±2.58c36.ll±1.89a 、.---.....1、.，，.、.._*,..A -1_.- ' ,.I I 1-1 ~ .Γ _ ^.,ΠI—、f 1..~*注:同列内上标字母相同表示差异不显著(P > 0.05)本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种可长期保存昆明狼犬精液的冷冻液配方，其特征在于，其组成成分为：三羟甲基氨基甲烷2.4～2.46g、柠檬酸钠1.26～1.27g、双羟乙基一氨基乙烷磺酸1.50g、甘油4ml、葡萄糖2.0～2.126g、家鸽卵黄20ml、加灭菌双蒸水到100ml、青霉素10万单位、链霉素5万单位。
【技术特征摘要】
1.一种可长期保存昆明狼犬精液的冷冻液配方，其特征在于，其组成成分为: 三羟甲基氨基甲烷2.4 2.46g、柠檬酸钠1.26 1.27g、双羟乙基一氨基乙烷磺酸1.50g、甘油4ml、葡萄糖2.0 2.126g、家鸽卵黄20ml、加灭菌双蒸水到100ml、青霉素10万单位、链霉素5万单位。2.如权利要求1所述的昆明狼犬精液冷冻液配方，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈留红，宗小兰，邓俊良，左之才，曹随忠，余树民，彭广能，杨健美，张传师，马建山，欧红萍，杨庆稳，王海光，何桥，卿佰春，石锦江，王英柱，胡延春，马哓平，施飞，叶刚，王娅，钟志军，任志华，石先鹏，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：
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