一种核酸适配体靶上富集和激光酶解检测蛋白质的方法技术

本发明专利技术属于化学生物学领域，涉及一种利用核酸适配体靶上富集和激光酶解检测蛋白质的方法。首先，将直径13nm的纳米金胶滴在靶板上，晾干并煅烧，在靶板上形成均匀厚实的金膜。该方法能在靶板表面修饰具有疏松孔状结构的金膜，提供了大的比表面积，并且具有优秀的稳定性和生物相容性，可以用于多种功能化修饰。然后，在靶板上固定巯基修饰的核酸适配体。接下来，富集目标蛋白并辅以靶上快速激光酶解，并将样品送入MALDI-TOFMS进行定性和定量分析。整个实验流程简单、快速、准确，可在高通量定性和定量分析重要蛋白中得到广泛的应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种核酸适配体靶上富集和激光酶解检测蛋白质的方法，其特征在于具体步骤如下：（1）将50?100nmol/L的金胶溶液点在靶板的表面，自然晾干10?12小时后，将靶板在150?200?℃下煅烧1?3小时，得到表面修饰金膜的靶板；（2）将一端为巯基修饰的核酸适配体共价修饰在表面修饰金膜的靶板表面；（3）将需要分析的目标蛋白滴在步骤（2）所得的靶板上，在湿盒中放置1小时后，用体积比为0.1%?的吐温20?和去离子水依次进行冲洗，晾干；（4）将步骤（3）所得的靶板表面滴加10?30?ng/μL的胰蛋白酶溶液，用激光照射10?40?秒，晾干；（5）在步骤（4）所得的靶板表面上滴加基质α?氰基?4?羟基肉桂酸，进行质谱分析。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邓春晖，张学洋，熊娅，张祥民，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：