铁皮石斛内生细菌特异性巢氏PCR检测方法及所用引物技术

本发明专利技术公开了一种巢式PCR扩增引物，包括第一次PCR扩增引物（fM1、rC5）和第二次PCR扩增引物（GC夹-f515、rC5）。本发明专利技术还同时公开了利用上述引物进行的铁皮石斛内生细菌的特异性巢氏PCR快速检测方法，包括如下步骤：1）、铁皮石斛总基因组DNA的提取；2）、特异性巢氏PCR扩增16S?rRNA基因的特定片段：第一次PCR扩增时，退火温度为50-54℃；第二次PCR扩增时，退火温度为55-59℃；3）、DGGE分析：将巢氏PCR的第二次扩增产物进行DGGE电泳；4）、内生细菌的种属鉴定：选择清晰的DGGE条带，进行PCR扩增；将扩增片段进行克隆、测序和BLAST比对，确定种属特征。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
巢式PCR扩增引物，其特征是：包括第一次PCR扩增引物和第二次PCR扩增引物，所述第一次PCR扩增引物为：fM1：5’?CCGCGTGNRBGAHGAAGGYYYT?3’，rC5：?5’?TAATCCTGTTTGCTCCCCAC?3’；所述第二次PCR扩增引物为：GC夹?f515：5’?CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGGT?GCCAGCMGCCGCGGTAA?3’；rC5：?5’?TAATCCTGTTTGCTCCCCAC?3’。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡秀芳，周晓风，于婕，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：