KLK14蛋白亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种人重组SPINK6蛋白的亲和层析纯化方法，包括：将人重组KLK14蛋白与亲和层析介质混合，偶联反应，制得人重组KLK14蛋白亲和层析介质；将人重组SPINK6蛋白通过预先用缓冲液A平衡好的装有上述的胰蛋白酶亲和层析介质的层析柱；然后用缓冲液A清洗上样后的人重组KLK14蛋白亲和层析柱；再用缓冲液B将SPINK6蛋白从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰。采用本发明专利技术的方法，人重组SPINK6蛋白的活性回收率为45-60％，纯度可达90％-95％，蛋白纯化倍数为10-20倍以上。本发明专利技术方法处理速度快、重复性好、柱效长且结合效率基本不变。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
KLK14蛋白亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法，其特征在于，其包括步骤：(1)制备亲和层析介质：将人重组KLK14蛋白与亲和层析介质混合，偶联反应，制得人重组KLK14蛋白亲和层析介质；(2)人重组SPINK6蛋白用亲和层析介质进行纯化将人重组SPINK6蛋白通过用pH7.0?9.0的缓冲液A平衡的装有步骤(1)的人重组KLK14蛋白亲和层析介质的层析柱；然后用pH7.0?9.0的缓冲液A清洗上样后的人重组KLK14蛋白亲和层析柱；再用pH?2.5?4.5含0.05?0.15mol/L?NaCl的缓冲液B将SPINK6蛋白从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰；所述pH7.0?9.0的缓冲液A选自PBS、Tris?HCl缓冲液中的一种或一种以上；所述的pH?2.5?4.5含0.05?0.15mol/L?NaCl的缓冲液B选自醋酸?醋酸钠、NaHPO4?柠檬酸、柠檬酸?柠檬酸钠缓冲液的一种或一种以上。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陆海荣，黄晋江，李斌宾，黄青山，
申请(专利权)人：复旦大学，上海高科联合生物技术研发有限公司，
类型：发明
国别省市：