本发明专利技术涉及淡水鱼真菌病防治技术领域，具体涉及一种山苍子精油和二硫氰基甲烷制备淡水鱼病防治药剂的方法。制备时取二硫氰基甲烷，加入二甲基甲酰胺，升温、搅拌、静置后过滤去除滤渣得A组分；取山苍子精油，加入乙醇，搅拌、静置后得B组分；将A组分加入B组分中，混匀后再加入月桂氮酮，升温至35～45℃，搅拌后，保持温度静置18～28小时，过滤去除滤渣得到本发明专利技术所述的山苍子精油和二硫氰基甲烷混合药剂。本发明专利技术以山苍子精油为主要原料发明专利技术出高效、低毒、靶动物体内无残留、水环境中易降解的渔用制剂，完全替代孔雀石绿、结晶紫等禁用抑霉药物，从源头上保障水产食品安全，既控制了养殖过程的真菌性疾病又保障了食品安全。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及淡水鱼病防治
，具体涉及一种山苍子精油和二硫氰基甲烷混合制备淡水鱼真菌病防治药剂的方法。
技术介绍
山苍子精油是从樟科木姜子属植物花鸡椒的果实中提取的植物精油含66%以上的柠檬醛为天然香料，广泛应用于香料化工、医药化工、食品添加剂等领域。我国的山苍子精油产量居世界首位，2010年产量超过3000吨，在福建、江西、湖南贵州等省有丰富的天然资源。山苍子精油多以原油出口为主，国内精加工产品较少，附加值低。山苍子精油是已知抗菌谱最广且药力强劲的天然植物之一，含有66%以上的a -柠檬醛、3 -柠檬醛，还有香茅醛、a -菔烯等萜类化合物，对黄曲霉、烟曲霉、红毛痫菌、念珠菌等真菌都有较强的抗菌作用。山苍子精油含70%左右的柠檬醛，柠檬醛经化学方法可以转化为紫罗兰酮、鸢尾酮和大马酮等高档香料，精油对多种真菌和细菌有一定的杀灭或抑制作用，也可作防治作物害虫的杀虫剂。山苍子精油(或柠檬醛)在水产养殖上却少有相关研究的文献报道。国外对水霉病(Saprolegniasis)的研究较多，应用龙胆紫、丫唳黄、灰黄霉素、福美锌、亚砷酸钙等防治水霉病，多以鲤鱼、虹鳟为对象。国内一直使用孔雀石绿、亚甲基兰、甲醛、戊二醛、重铬酸钾、螯合铜等来治疗水霉病，往往忽视其毒副作用及对食品安全的影响，而对高效低毒无残留的无公害渔药研究较少。目前，国内有戊二醛、“检科一号”氧化还原型消毒剂、苦参等中草药等多为广谱水体消毒剂，用于防治水霉，在养殖水环境中使用的效果尚不确定，无确切的科研论文和防治效果报道。且戊二醛对人体有一定毒性和可能致癌作用。国内外对柠檬醛的抗植物真菌、细菌病及抗病机理有较多研究。对柠檬醛有很多研究，但未见对鱼类水霉菌作用的报导，也未见开发成渔药用于防治水霉病等鱼类真菌病的报导。鳗鲡、罗非鱼、四大家鱼养殖是水产业的支柱之一，也是主要的出口水产品，鳗鱼、罗非鱼及加工品年产值120亿以上。日本鳗鲡、暗纹东方豚、罗非鱼、草鱼、鲫鱼、黄颡鱼的水霉、鳃霉病是养殖全程常见多发的真菌性疾病，对鳗鲡等养殖的成活率、生长期都有很大的影响。以往多用孔雀石绿(Malachite green)作为有效的防治药物，孔雀石绿和在鱼体内的代谢产物无色孔雀石绿及其衍生物对生物体有致畸、致癌、致突变等毒副作用，是全球明文禁止不得用于食用鱼的药物。但孔雀石绿还被商贩应用于活鱼运输暂养过程中消毒以延长鱼的存活时间，而且消毒后的鱼即 使死亡颜色也较鲜亮卖相好，不易被消费者察觉。随着人们对食品安全问题的日益重视，寻找有效防治水霉病的高效低毒无残留的无公害药物、保障食品的安全显得十分迫切。而现在的替代药物如亚甲基兰、戊二醛、重铬酸钾等都不适用于食用鱼，螯合铜、硫代磷酸脂在养殖水环境中使用的效果不好，食盐仅适用于少数品种且成本太高不适合池塘养殖生产使用。
技术实现思路
本专利技术以山苍子精油为主要原料开发用于防治真菌病的渔用制剂，针对养殖水环境特点和靶动物生理特点进行科学合理复配，专利技术出高效、低毒、靶动物体内无残留、水环境中易降解的渔用制剂，完全替代孔雀石绿、结晶紫等禁用抑霉药物，从源头上保障水产食品安全，既控制了养殖过程的真菌性疾病又保障了食品安全。1、以重量份比计的配方: 山苍子精油15 26 二硫氰基甲烷1.5 4.6 乙醇50 80 二甲基甲酰胺6 20 月桂氮酮I 2 2、制备方法: ⑴准确称取二硫氰基甲烷，加入二甲基甲酰胺，升温、搅拌、静置后过滤去除滤渣得A组分； ⑵准确称取山苍子精油，加入乙醇，搅拌、静置后过滤去除滤渣得B组分； ⑶将B组分加入A组分中，混匀后再加入月桂氮酮，升温至35 45°C，搅拌30 45分钟后，保持温度静置18 28小时，过滤去除滤渣得到本专利技术所述的山苍子精油和二硫氰基甲烷混合药剂。本专利技术所述的山苍子精油，符合GB/T 11424-2008，柠檬醛含量彡67%。 本专利技术所述的二硫氰基甲烷，其含量彡98.6%。本专利技术所述的乙醇,含量彡99%。本专利技术所述的二甲基甲酰胺，含量彡99%。本专利技术所述的月桂氮酮，含量> 97%。采用本专利技术所述的方法制备的药剂，呈酒红色，有柠檬香味，相对密度(20°C)0.857 0.887，电导率(20。0 181 230 y s/cm。药效学试验: 本专利技术从抑制对水霉孢子萌发和菌丝生长两方面来探讨霉清等药物对水霉的抑杀作用，采用了传统的琼脂扩散培养法及改进的医用产孢真菌微量稀释药敏实验法(美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的M38方案)来测定药物对水霉孢子的抑杀效果；采用了琼脂扩散培养法和微量固体菌核液体培养法测定药物对水霉菌丝的抑杀效果；确定了常见的9种药物对同丝水霉Saprolegnia monoica卵孢子的最低抑菌浓度(MIC80):孔雀石绿 > 本药剂 > 山苍子精油 > 水杨醛 > 噻苯咪唑 > 邻苯二甲醛 > 戊二醛 > 苦参碱 > 异噻唑啉酮。测定了 9种药物对多子水霉Saprolegnia ferax菌丝的最低抑菌浓度(MIC):孔雀石绿4 mg/L、结晶紫8 mg/L、本药剂12.5 mg/L、噻苯咪唑25 mg/L、甲醛320 ul/L、山苍子精油、水杨醛400 ul/L、戊二醛640 ul/L、柠檬醛800 ul/L。比较了该制剂与9种抗真菌商品渔药对水霉菌丝生长的抑制能力强弱，本药剂>杀菌红 > 水霉净 > 水杨醇 > 暴血停 > 鱼康I1、鳗菌净、硫醚沙星 > 异噻唑啉酮 > 渔得福。在温度为19±0.5°C，湿度78%培养条件下，本药剂的抑菌能力受pH值影响较小，其在pH值5.5-8.5的不同培养基中，24h、48h的MIC值均为12.5 mg/L，说明本药剂在弱酸、中性、弱碱环境中抑菌カ较强且药效维持时间较长。分别在温度18_20°C和12_14°C对罗非鱼Tilapia进行室内人工感染试验结果表明，在水温18-20°C时，该制剂以0.5mg/L的浓度给药，对罗非鱼的水霉病保护率达到80.33%。在水温11°C _14°C时，该制剂以0.5mg/L的浓度给药，对罗非鱼的水霉病保护率达到72.86%。因此，0.5-lmg/L的本药剂对罗非鱼的水霉菌感染有显著的预防效果。靶动物安全性试验通过对罗非鱼和鳗鲡进行96h急性毒性实验，得出药物对參试鱼类的半致死浓度和安全浓度。结果显示药物对罗非鱼的毒性強弱排序为:孔雀石緑〉ニ硫氰基甲烷 > 水杨醛 > 本药剂 > 柠檬醛 > 山苍子精油；而对鳗鲡:孔雀石绿> ニ硫氰基甲烷>水杨醛 > 本药剂 > 柠檬醛 > 山苍子精油。该制剂对日本鳗鲡(体重4.6-7.2克)的半致死浓度(96hLC 50)为5 mg/L,安全浓度(SC)为0.5 mg/L ;罗非鱼的半致死浓度(96hLC 50)为6.96 mg/L和安全浓度为0.7 mg/L。亚急性毒性实验选择总抗氧化能力(T-A0C)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)等的含量作为测定实验动物对药物应激反应的指标。亚急性毒性试验表明:本药剂对日本鳗鲡的肝和鳃具有一定程度的损伤，但在浓度本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种山苍子精油和二硫氰基甲烷制备淡水鱼病防治药剂的方法，其特征在于以重量份比计的配方：山苍子精油????????????????????15～26二硫氰基甲烷????????????????1.5～4.6乙醇??????????????????????????50～80二甲基甲酰胺???????????????????6～20月桂氮酮??????????????????????????1～2；制备方法：⑴准确称取二硫氰基甲烷，加入配方中二甲基甲酰胺溶剂，升温、搅拌、静置后过滤去除滤渣得A组分；⑵准确称取山苍子精油，加入配方中的乙醇，搅拌、静置后得B组分；⑶将A组分加入B组分中，混匀后再加入月桂氮酮，升温至35～45℃，搅拌后，保持温度静置18～28小时，过滤去除滤渣得到本专利技术所述的山苍子精油和二硫氰基甲烷混合药剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林岗，饶小珍，陈由强，高如承，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：
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