一种检测单核苷酸多态性的方法技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，涉及单核苷酸多态性的分析检测，具体涉及一种普适的利用缺口-连接酶链式反应扩增目标DNA，将DNAzyme序列引入连接产物中，然后利用Lambda外切酶降解没有参与连接反应的磷酸化探针，及外切酶III释放DNAzyme的检测方法。本发明专利技术将DNAzyme探针与Gap-LCR探针相结合，通过在LCR体系中的待连接的一个磷酸化探针中加入一段DNAzyme序列，Gap-LCR扩增反应结束以后，向体系中加入Anti-G序列（与探针中的DNAzyme序列部分互补配对），利用Lambda外切酶降解5端磷酸化的DNA探针，然后利用外切酶III释放连接产物中的DNAzyme，通过DNAzyme的特性来进行SNP的定性和定量检测。本发明专利技术具有简单、方便、实用、经济，广泛适用于各种单核苷酸多态性检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学
，涉及单核苷酸多态性的分析检测，具体涉及一种普适的利用缺口 -连接酶链式反应扩增目标DNAdf DNAzyme序列引入连接产物中，然后利用Lambda外切酶降解没有参与连接反应的磷酸化探针,及外切酶III释放DNAzyme的检测方法。
技术介绍
单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP),主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，是基因组DNA中某一特定核苷酸位置上发生转换、颠换、插入或缺失等变化，而且任何一种等位基因在群体中的频率不小于1%。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以上，与许多疾病直接相关，如血友病和苯酮尿病等，是决定人类疾病易感性和药物反应差异的主要因素。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500 1000个碱基对中就有I个，估计其总数可达300万个甚至更多。探针是能与特异靶分子反应并带有供反应后检测的合适标记物的分子。核酸探针技术就是利用核苷酸碱基互补配对的原理，用特异的基因探针即识别特异碱基序列的一段单链DNA (或RNA)分子，与被测定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测单核苷酸多态性的方法，其特征是：在连接酶链式反应Ligase Chain Reaction或者缺口‑连接酶链式反应Gap‑LCR体系中加入两组探针，其中一个5端磷酸化探针的3端用DNAzyme标记，在进行目标核酸的链式连接酶扩增反应过程中，依次在DNA聚合酶和DNA连接酶的作用下将DNAzyme引入到扩增产物中，LCR扩增以后，向扩增的产物中引入能与DNAzyme的序列部分互补的阻断序列Anti‑G，同时加入终浓度为100mM的NaCl以促进Anti‑G和DNAzyme更好的形成双链结构，然后利用Lambda外切酶选择性切割双链DNA中的5端磷酸化的DNA探针，而对连接产物不起作用，此...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：唐卓，周丽，
申请(专利权)人：中国科学院成都生物研究所，
类型：发明
国别省市：四川;51