转基因芸苔属植物事件MON 88302及其使用方法技术

本发明专利技术提供了包含转基因事件MON?88302的植物，所述植物显示对草甘膦除草剂的耐受性。本发明专利技术还提供了与所述事件相关的种子、植物部分、细胞、商业产品和方法。本发明专利技术还提供了对于事件是独特的并且通过将转基因DNA插入欧洲油菜植物的基因组产生的DNA分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生物技术和农业领域，尤其涉及转基因作物植物领域。
技术介绍
芸苔属作物在世界上许多地区是非常重要的。可将生物技术的方法用于此类作物以产生具有改良性状例如除草剂耐受性的作物。可通过表达能够提供这样的耐受性的转基因来在转基因植物中获得除草剂耐受性。转基因在植物中的表达可受因素例如转基因盒中使用的调控元件、转基因插入物的染色体定位以及接近整合位置的任何内源调控元件的接近度(proximity)的组合影响。例如，已观察到在类似产生的事件之间在转基因表达的总体水平上或转基因表达的空间或时间模式上存在广泛的变化。为此原因，可能必需产生和测试数百个单个植物转化事件以最终鉴定对于商业农业目的是有用的一个事件。一旦被鉴定为具有期望的转基因表达 和分子特征，随后可使用植物育种方法将这样的事件用于将该性状渐渗入其它遗传背景。所得的后代可包含转基因事件，因此可具有原始转化体的该性状的转基因表达特征。这可用于产生许多不同的包含改良的性状并且经适当地改造适合于特定地方生长条件的作物品种。专利技术概述本专利技术提供了包含事件MON 88302的转基因植物和种子，其代表性种子样品已由美国典型培养物保藏中心(ATCC)以登录号PTA-10955保藏。包含事件的植物展示商业上可接受的对草甘膦除草剂的应用的耐受性。本专利技术提供了包含事件的后代植物、植物部分和细胞；与事件相关的重组DNA分子和使用此类分子的方法；从事件衍生的或包含其的商业产品；以及使用事件的方法。本专利技术提供了包含事件的植物、种子、细胞、后代植物或植物部分以及从包含事件的植物、细胞、植物部分或种子衍生的商业产品。本专利技术因此提供了包含具有核苷酸序列的DNA分子的植物、种子、细胞、后代植物、植物部分或商业产品，所述核苷酸序列选自SEQ IDNO:USEQ ID N0:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7 和 SEQ ID NO:8及其片段。本专利技术提供了包含重组DNA分子的植物、种子、细胞、后代植物或植物部分，所述重组DNA分子例如在DNA扩增法中产生包含本专利技术的DNA分子的扩增子。本专利技术提供了与事件相关的DNA分子。此类DNA分子可包含代表或来源于如下序列的核苷酸序列:事件MON 88302的转基因插入与侧翼基因组DNA的接合处，和/或侧翼连接插入的DNA的基因组DNA的区域，和/或侧翼连接插入位点的整合的转基因DNA的区域，和/或整合的转基因表达盒的区域，和/或此类区域的任何区域的连续序列。本专利技术还提供了用作诊断事件的引物和探针的DNA分子。提供了包含此类分子的植物、细胞、植物部分、商业产品、后代和种子。本专利技术提供了用于检测来源于事件的DNA的存在的方法、组合物和试剂盒。本专利技术提供了通过如下步骤检测事件的方法:将包含DNA的样品与当与来自事件的基因组DNA一起用于核酸扩增反应时产生诊断事件的扩增子的引物组接触，进行核酸扩增反应，从而产生扩增子，和检测扩增子。本专利技术还提供了通过如下步骤检测事件的方法:将包含DNA的样品与当与来自事件的基因组DNA —起用于杂交反应时与对于事件是特异性的DNA分子杂交的探针接触，进行杂交反应，和检测探针对DNA分子的杂交。还提供了包括用于检测来源于事件的DNA的存在的本专利技术的方法和组合物的试剂盒。本专利技术提供了通过如下步骤控制田间杂草的方法:通过种植包含事件的植物(即，种植包含事件的种子)，随后施用有效剂量的能够控制杂草而不损伤包含事件的植物的草甘膦。 本专利技术提供了通过如下步骤产生耐受草甘膦除草剂的施用的植物和/或种子的方法:将包含事件或包含选自 SEQ ID NO:USEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:6, SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的序列的耐受草甘膦的植物与第二植物接触，从而产生种子，生长所述种子以产生后代植物，用草甘膦处理后代植物，以及选择包含事件并且耐受草甘膦的后代植物。本专利技术提供了通过如下步骤产生耐受草甘膦除草剂的施用的植物和/或种子的方法:将包含事件或包含选自SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQID NO:4, SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的序列的耐受草甘膦的植物自交，从而产生种子，生长种子以产生后代植物，利用草甘膦处理后代植物；和选择包含事件并且耐受草甘膦的后代植物。本专利技术提供了通过如下步骤测定包含事件的植物或种子的接合性的方法:将包含DNA的样品与当与来自事件MON 88302的基因组DNA —起用于核酸扩增反应时产生诊断事件的扩增子的第一引物组接触，进行核酸扩增反应，从而产生扩增子，检测扩增子，将样品与第二引物组(所述第二引物组，当与来自植物的基因组DNA—起用于核酸扩增反应时产生第二扩增子，所述第二扩增子包含与鉴定为事件MON 88302的转基因插入的基因组区域同源的天然基因组DNA)接触，进行核酸扩增反应，从而产生第二扩增子，检测第二扩增子，并且比较样品中的第一与第二扩增子，其中两种扩增子的存在表明样品和从而植物或种子对于转基因插入是杂合的。本专利技术的上述和其它方面根据下列详述将变得更显而易见的。附图简述附图说明图1:事件MON 88302的图解表示；[A]相应于5’连接区域(junction region)的相对位置；[B]相应3’连接区域的相对位置；[C]相应于插入的转基因DNA的侧翼区域的相对位置和5’末端的部分；[D]相应于插入的转基因DNA的3’侧翼区域的相对位置和3’末端的部分；[E]表示转基因表达盒；和[F]表示欧洲油菜(Brassica napus)基因组侧翼序列和转基因表达盒的连续序列。图2:显示当在4至6叶期施用草甘膦时与MON 88302相比较RT73事件的籽粒产量。RT73命名为RRl。图3:显示当在第一朵花时施用草甘膦时与MON 88302相比较RT73事件的籽粒产量。RT73命名为RRl。序列简述SEQ ID NO:1_代表欧洲油菜基因组DNA与整合的转基因表达盒之间的5’接合序列的60个核苷酸的序列。该核苷酸序列相应于SEQ ID NO:3的位点762至821 ([C]，参见图1)和相应于SEQ ID NO:6的位点762至821。SEQ ID NO:2_代表整合的转基因表达盒与欧洲油菜基因组DNA之间的3’接合处的60个核苷酸的序列。该核苷酸序列相应于SEQ ID NO:4的位点313至372 ([D]，参见图1)和相应于SEQ ID NO:6的位点5189至5248。SEQ ID NO:3_侧翼连接事件MON 88302的插入DNA达到和包括转基因DNA的区域的5’序列。SEQ ID NO:3的核苷酸位点762至821相应于SEQ ID NO:1的核苷酸位点I至60 ；SEQ ID NO:3的核苷酸位点742至841相应于SEQ ID NO:7的核苷酸位点I至100，以及SEQ ID NO:3的核苷酸位点792至956相应于SEQ ID NO:5的核苷酸位点I至165。SEQ ID NO:4_侧翼连接事件MON 88302的插入DNA达到和包括转基因DNA的区域本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.04 US 61/351,3171.一种分子，其包含:a.具有选自SEQ ID NO:USEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7 和SEQ ID NO:8的序列的多核苷酸分子； b.具有与SEQID NO:6具有至少95%同一性的核苷酸序列的多核苷酸分子；或 c.具有与(a)或(b)互补的序列的多核苷酸分子。2.根据权利要求1所述的DNA分子，其中所述DNA分子来源于事件MON88302，包含事件MON 88302事件的种子的代表性样品已于ATCC登录号PTA-10955下保藏。3.根据权利要求1所述的DNA分子，其中所述DNA分子包含在芸苔属植物、植物细胞、种子、后代植物、植物部分或商业产品中。4.根据权利要求1所述的DNA分子，其中所述DNA分子为从来源于事件MON88302的DNA的模板分子产生的扩增子。5.根据权利要求1所述的DNA分子，其中所述DNA分子被诊断为事件MON88302的存在。6.一种诊断事件88302的存在的多核苷酸探针，其中所述多核苷酸探针具有充分长度以结合包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的核酸分子，并且其中所述多核苷酸探针在严格杂交条件下与包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2的DNA分子杂交，并且在严格杂交条件下不与不包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的DNA分子杂交。7.一种用于检测来源于事件MON 88302的DNA分子在DNA样品中的存在的方法，所述方法包括: a.将DNA样品与根据权利要求6所述的多核苷酸探针接触； b.将所述样品和所述多核苷酸探针经历严格杂交条件；和 c.检测所述多核苷酸探针对所述DNA分子的杂交 其中所述杂交的检测诊断所述来源于事件MON 88302的DNA分子在所述DNA样品中的存在。8.对由第一 DNA分子和与所述第一 DNA分子不同的第二 DNA分子组成的DNA分子，其中所述DNA分子包含具有拥有充分长度的SEQ ID NO:6的连续核苷酸或其互补序列的核苷酸序列的多核苷酸分子，以用作当与来源于事件MON 88302的模板一起用于扩增反应中时产生诊断样品中的事件MON 88302 DNA的扩增子的DNA引物。9.根据权利要求8所述的DNA分子对，其中所述扩增子包含选自SEQID NO:1和SEQID NO: 2的核苷酸序列。10.一种检测来源于事件MON 88302的DNA分子在DNA样品中的存在的方法，所述方法包括: a.将DNA样品与根据权利要求8所述的DNA分子对接触； b.进行足以产生包含具有SEQID NO:1或SEQ ID NO:2的至少40个连续核苷酸的多核苷酸分子的扩增子的扩增反应；和 c.检测所述扩增子， 其中所述扩增子的检测被诊断为所述来源事件MON 88302的DNA分子在所述DNA样品中的存在。11.一种包括至少一种多核苷酸分子的DNA检测试剂盒，所述多核苷酸分子包含具有充分长度的SEQ ID NO:6的连续核苷酸和其互补序列，以用作对于检测来源于事件MON88302的DNA的存在是特异性的DNA引物或多核苷酸探针，其中所述DNA的检测被诊断为所述事件MON 88302 DNA在样品中的存在。12.一种包含多核苷酸分子的植物、种子、细胞或其植物部分，所述多核苷酸分子具有选自 SEQ ID NO:USEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7 和 SEQ ID NO:8的核苷酸序列。13.根据权利要求12所述的植物、种子、细胞或其植物部分，其中所述植物、种子、细胞或其植物部分耐受草甘膦除草剂处理。14.根据权利要求12所述的植物、种子、细胞或其植物部分，其基因组，当在DNA扩增法中测试时，产生诊断事件MON 88302的扩增子。15.根据权利要求12所述的植物部分，其中所述植物部分选自花粉、胚珠、豆荚、花、根组织、茎组织或叶组织。16.一种包含事件MON 88302的植物、种子、细胞或其植物部分，包含事件MON 88302的种子的代表性样品已于ATCC登录号PTA-10955下被保藏。17.根据权利要求16所述的植物、种子、细胞或其植物部分，其中所述植物、种子、细胞或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·J·布朗，J·F·伯恩，R·H·科尔，J·H·克劳利，J·A·米克洛斯，R·C·里普利，S·赛弗特希金斯，谢嘉丽，
申请(专利权)人：孟山都技术公司，
类型：
国别省市：