一种肿瘤标志物钙网蛋白检测试剂盒的制备及应用制造技术

一种肿瘤标志物钙网蛋白检测试剂盒的制备及应用，属于基因工程和临床诊断领域。本发明专利技术应用重组CRT蛋白免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔制备了CRT的单克隆抗体、多克隆抗体，并建立了检测CRT最低量为0.3125ng/ml，检测限为40-0.3125ng/ml的高特异性和敏感性的ELISA试剂盒。通过制备的ELISA试剂盒，对收集的临床样品进行检测，结果发现肺癌病人血清中的CRT明显高于正常对照血清，统计学有显著差异(P<0.01)，为临床肺癌病人的诊断提供实验方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程和临床诊断领域，涉及ー种肿瘤标志物钙网蛋白检测试剂盒的制备及应用。
技术介绍
钙网蛋白(Calreticulin，CRT)为46KD大小的具有多种生物学功能的内质网分子伴侶蛋白，除了分布在内质网，细胞核、核膜、细胞膜表面以及细胞外基质中均有表达，能发挥多种生化生理效应。在肿瘤发生时，分泌性的CRT在肝癌病人的血清以及膀胱癌患者的尿液中都有上升趋势，除此之外，对妇科肿瘤如乳腺癌、宫颈癌的研究也显示相比健康对照CRT的表达量有所増加；用免疫组化染色研究胃癌时发现CRT阳性的患者往往伴有远处淋巴结的转移、肿瘤微血管聚集以及五年存活率低下的症状。然而，由于肿瘤发生发展的机制至今尚未阐明，因此肿瘤的早期发现也变得越来越重要。在肿瘤的研究和临床实践中，早期发现、早期诊断、早期治疗是关键。肿瘤标志物(Tumor Marker, TM)在肿瘤普查、诊断、判断预后和转归、评价治疗疗效和高危人群随访观察等方面都具有较大的实用价值。随着单克隆抗体技术的不断成熟，出现了大量的抗肿瘤标志物的单克隆抗体，并与特异敏感的免疫学检测技术(RIA、IRMA、ELISA、CLIA、IFA、TRF本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断癌症或评价癌症风险的酶联免疫吸附试剂盒，其包含：钙网蛋白（CRT）的特异性抗体，所述特异性抗体为通过以钙网蛋白为免疫原得到的单克隆抗体和/或多克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种诊断癌症或评价癌症风险的酶联免疫吸附试剂盒，其包含:钙网蛋白(CRT)的特异性抗体，所述特异性抗体为通过以钙网蛋白为免疫原得到的单克隆抗体和/或多克隆抗体。2.权利要求1所述的试剂盒，其中所述单克隆抗体为鼠源单克隆抗体，其制备方法如下:使用纯化的钙网蛋白作为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫；经效价检测达标后，进行细胞融合；经筛选克隆获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，经杂交瘤细胞株分泌，得单克隆抗体。3.权利要求1所述的试剂盒，其中:所述多克隆抗体为兔源多克隆抗体。4.权利要求1-3任一所述的试剂盒，其还包含:酶标抗体，包被有所述单克隆抗体的微孔板，HRP标记的羊抗兔酶标抗体，标准阳性对照钙网蛋白，标准阴性对照大肠杆菌BL-21菌体蛋白，封闭液，样品稀释液，洗涤液，终止液，底物显色液。5.权利要求4所述的试剂盒，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘朝奇，吴薇，杨建林，汪龚泽，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：