一种快速鉴定鸭病毒性肝炎病毒血清型的多重RT-PCR方法技术

本发明专利技术涉及一种快速鉴定鸭病毒性肝炎病毒血清型的多重RT-PCR方法，是分别合成鸭甲肝病毒1型特异性引物SEQ1和SEQ2，鸭甲肝病毒3型特异性引物SEQ3和SEQ4，鸭星状病毒1型特异性引物SEQ5和SEQ6，以待检样品RNA为模板，以SEQ1、SEQ3和SEQ5为引物反转录获得病毒cDNA，以上述三组引物为多重引物，以病毒cDNA为模板，在同一反应体系中进行PCR反应，可同时完成对鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型和鸭星状病毒1型的快速血清型鉴定。本发明专利技术根据RT-PCR技术原理，根据鸭病毒性肝炎病毒基因型与血清型相对应和我国大陆地区目前存在的3种鸭病毒性肝炎病毒的特点，建立了多重RT-PCR检测方法，其简单、快速、特异性好、灵敏度高，可以用于鸭病毒性肝炎病毒的快速血清型鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术所涉及的是一种快速鉴定鸭病毒性肝炎病毒血清型的多重RT-PCR方法，属于病毒分子生物学领域。
技术介绍
鸭肝炎病毒包括鸭甲肝病毒(DuckhepatitisAvirus, DHAV)、鸭星状病毒(Duckastrovirus, DAstV) I型(DAstV-1)和2型(DAstV_2) 3个不同的血清型,相互之间无抗原交叉性。DHAV作为小RNA病毒科禽肝病毒属的唯一成员，目前又分为三个基因型和血清型:DHAV-UDHAV-2和DHAV-3，三个血清型之间几乎无交叉保护。近年来，我国鸭病毒性肝炎的病原日趋复杂化，研究表明目前至少存在DHAV-1、DHAV-3和DAstV-1三种血清型的鸭肝炎病毒，导致许多地区针对某型鸭病毒性肝炎采取主动或被动免疫后仍不能有效控制鸭病毒性肝炎的发生和流行，给养鸭业生产造成严重的经济损失。目前鸭病毒性肝炎的鉴定主要依靠流行病学调查、临床症状和病理变化，但不同鸭肝炎病毒引起的鸭病毒性肝炎在流行病学、临床症状和病理变化方面极为相似，特别是两种或多种病毒混合感染时，依靠上述方法和手段难以确定病毒类型。有效控制鸭病毒性肝炎的关键是要明确鸭肝炎病毒的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速鉴定鸭病毒性肝炎病毒血清型的多重RT?PCR方法，其特征在于包括以下步骤：A、对GenBank上已发表的DHAV?1，DHAV?3和DAstV?1的序列进行比对，在三种病毒基因序列的保守区，分别设计一对针对DHAV?1的特异性引物SEQ1和SEQ2，一对针对DHAV?3的特异性引物SEQ3和SEQ4，和一对针对DAstV?1的特异性引物SEQ5和SEQ6，SEQ1：5’?GATGTGGCAY(T/C)GTTGTY(T/C)AAY(T/C)CGA?3’，SEQ2：5’?CTGATGTD(G/A/T)CCAGGR(A/G)ATTGGTCG?3’，SEQ3：5’?GAGCCAGAATTGGA...

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定鸭病毒性肝炎病毒血清型的多重RT-PCR方法，其特征在于包括以下步骤: A、对GenBank上已发表的DHAV-1，DHAV-3和DAstV-1的序列进行比对，在三种病毒基因序列的保守区，分别设计一对针对DHAV-1的特异性引物SEQl和SEQ2，一对针对DHAV-3的特异性引物SEQ3和SEQ4，和一对针对DAstV-1的特异性引物SEQ5和SEQ6，SEQ1: 5 ’ -GATGTGGCAY (T/C)GTTGTY(T/C)AAY(T/C)CGA-3，，SEQ2: 5，-CTGATGTD (G/A/T)CCAGGR(A/G)ATTGGTCG-3，，SEQ3:5’ -GAGCCAGAATTGGAATGGACACA-3'SEQ4:5’ -CATACTTR(G/A)CCACCAACTGCCAATC-3’，SEQ5:5’ -ATGGCCCAGAGCGGTGAAAA-3’，SEQ6:5’ -GCCAGGTGTCAACAATCATGC-3’ 所有引物以无菌ddH20配成25pmol/μ I的浓度备用； B、常规方法提取待测鸭肝组织总R...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜世金，陈琳琳，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：