一种以蕲蛇为原料提取Ⅱ型胶原蛋白的方法技术

本发明专利技术提供了一种以蕲蛇为原料提取Ⅱ型胶原蛋白的方法。所述方法包括：将蕲蛇粉末用盐酸胍-Tris-HCl混合溶液除去蛋白多糖；除去多糖后收集沉淀，用乙酸溶液溶解沉淀；溶液采用胃蛋白酶酶解释放Ⅱ型胶原蛋白；酶解液离心后取上清进行盐析充分沉淀Ⅱ型胶原蛋白；离心收集沉淀Ⅱ型胶原蛋白离心并用乙酸再次溶解，溶解液透析除胃蛋白酶和其他杂蛋白；透析袋中Ⅱ型胶原蛋白再次使用乙酸溶解并透析除去盐离子；将透析后的袋内液体低温冷冻真空干燥，得到蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白。本发明专利技术的有益效果主要体现在：本发明专利技术方法操作简单，制得Ⅱ型胶原蛋白纯度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种以蕲蛇为原料提取II型胶原蛋白的方法。
技术介绍
II型胶原(collagen type II, C II )是软骨基质的主要有机成分,是关节软骨中主要细胞外间质之一。近年来研究表明，类风湿性关节炎的发病与C II自身免疫反应有关[Deyl Z, Miksik I, Eckhardt A.Preparative procedures and purity assessment ofcollagen proteins [J].Chromatography B, 2003, 79(12): 245-275.Smolen JS, HayerS, Schett G, et al.Tmmunosenescence autoimmunity and Rheumatoid Arthritis[J].Autoimmunity and rheumatoid arthritis, 2004, 31 (1): 23-25.],用 C II 免疫某些动物可诱导出实验性关节炎[Sweeney SE, Firestein GS.Rheumatoid arthritis:regulation 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以蕲蛇为原料提取Ⅱ型胶原蛋白的方法，所述方法包括：（1）蕲蛇粉末用盐酸胍?Tris?HCl混合溶液混悬，4~6℃搅拌24~30h，离心，去上清，沉淀用40~60?mM?Tris?HCl溶液洗涤除去盐酸胍；所述盐酸胍?Tris?HCl混合溶液中盐酸胍浓度为4~5M，Tris?HCl浓度为40~60?mM；（2）步骤（1）所得沉淀用0.5~1?M乙酸水溶液重悬，以60~80%甲酸水溶液调节pH值为2~3，加入足量胃蛋白酶，4~6℃搅拌48~60h，离心，弃去沉淀；（3）步骤（2）得到上清液滴加5~6M?NaCl溶液至NaCl浓度为0.8~0.9?M，4~6℃静置12~24h，离心，去除上清液；...

【技术特征摘要】
1.一种以蕲蛇为原料提取II型胶原蛋白的方法，所述方法包括: (1)蕲蛇粉末用盐酸胍-Tris-HCl混合溶液混悬，4 6°C搅拌24 30h，离心，去上清，沉淀用40-60 mM Tris-HCl溶液洗涤除去盐酸胍；所述盐酸胍-Tris-HCl混合溶液中盐酸胍浓度为4 5M，Tris-HCl浓度为40 60 mM ； (2)步骤(I)所得沉淀用0.5^1 M乙酸水溶液重悬，以60-80%甲酸水溶液调节pH值为2 3，加入足量胃蛋白酶，4 6°C搅拌48-60h，离心，弃去沉淀； (3)步骤(2)得到上清液滴加5 6MNaCl溶液至NaCl浓度为0.8 0.9 M，4 6°C静置12 24h，离心，去除上清液； (4)步骤(3)得到沉淀用足量0.05、.2 M乙酸溶解，转入截留分子量50000道尔顿的透析袋中、用20-30 mM Na2HPO4充分透析，所得沉淀再用足量0.05-0.2M乙酸溶解，转入截留分子量10000道尔顿的透析袋中、用0.05-0.2M乙酸溶液充分透析，所得液体真空干燥，得到所述II型胶原蛋白的粉末。2.按权利要求1所述的方法，其特征在于所述蕲蛇粉末粒径不大于2mm。3.按权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中胃蛋白酶加入量为300-800U/g蕲蛇粉末。4.按权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(I)中所述蕲蛇粉末与盐酸胍-Tris-HCl...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁兴红，谷恒存，丁志山，蒋福升，范永升，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：