一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法，利用自主筛选鉴定的蜡样芽孢杆菌Bacillus?cereus(CGMCC?NO.4348），通过微生物发酵培养出蜡样芽孢杆菌发酵液，并利用硫酸铵分级沉淀方法提取出抑菌蛋白粗品；再利用葡聚糖凝胶柱来进一步纯化抑菌蛋白粗品，并将其对真菌病害进行抑菌活性检测。本发明专利技术操作方便、工艺简单、成本低廉，可以显著提高其发酵液中抑菌蛋白的抑菌能力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，具体涉及微生物发酵，生物制药，发酵产物的提取、分离和纯化工艺，特别涉及。
技术介绍
腊样芽孢杆菌(Bacillus, cereus简称B.cereus)广泛地分布在在自然界中，在空气、尘埃、土壤、水及植物中都可以分离出蜡样芽孢杆菌。蜡样芽孢杆菌活菌制剂是我国农业部正式批准生产的微生物制品，具有调节宿主微生态平衡的功能，广泛应用于农业、饲料、医药保健和食品等领域。然而，此制剂也和其他微生态制剂一样，存在以下几个问题:生产过程中温度、压片等因素导致活菌数减少有效期内活菌量不稳定，产品有效期不长、货架期短等。因此，提闻腊样芽抱杆菌制剂的活菌数对广品质量的提闻具有重大意义，也为工业化生产蜡样芽孢杆菌活菌制剂奠定了基础。蜡样芽孢杆菌可单独制成微生态制剂，用于胃肠道疾病的防治、降血脂、抗衰老、防止细菌移位、抗肿瘤及自身免疫性疾病防治，如能效改善肝硬化患者肠道菌群失调，并可降低血清LBP浓度，可以作为肝硬化患者的辅助治疗措施。蜡样芽孢杆菌不但其本身可以被制成微生物菌剂和微生物肥料，它还能通过体内的SOD酶，调节作物细胞微生境，维持细胞正常的生理代谢和生化反应，提高抗逆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法，其具体步骤如下：（1）抑菌蛋白的提取：利用蜡样芽孢杆菌Bacillus?cereus?CGMCC?No.4348，通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液，并将此发酵液采用硫酸铵分级沉淀以提取获得抑菌蛋白粗品；（2）装柱：称取葡聚糖凝胶用蒸馏水以15?20mL/g的比例进行装柱前的溶胀3?5h；将处理好的葡聚糖凝胶用湿法上柱；上柱后用缓冲液进行充分平衡；（3）上样：将步骤（1）中获得的抑菌蛋白粗品配成15?20mg/ml样品溶液，注入到平衡好的凝胶柱上；（4）洗脱收集：用缓冲液进行洗脱，其中缓冲液的流速为0.5?1.0mL/min，每2?5min收集...

【技术特征摘要】
1.一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法，其具体步骤如下: (1)抑菌蛋白的提取:利用蜡样芽孢杆菌Bacilluscereus CGMCC N0.4348，通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液，并将此发酵液采用硫酸铵分级沉淀以提取获得抑菌蛋白粗品； (2)装柱:称取葡聚糖凝胶用蒸馏水以15-20mL/g的比例进行装柱前的溶胀3-5h;将处理好的葡聚糖凝胶用湿法上柱；上柱后用缓冲液进行充分平衡； (3)上样:将步骤(I)中获得的抑菌蛋白粗品配成15-20mg/ml样品溶液，注入到平衡好的凝胶柱上； (4)洗脱收集:用缓冲液进行洗脱，其中缓冲液的流速为0.5-1.0mL/min，每2-5min收集一次洗脱液；将收...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡永红，杨文革，江心敏，唐容容，沈飞，朱文俊，冯旌，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：