本发明专利技术公开了基于TGF-β1的B细胞抗原表位的合成肽疫苗及其应用，构建了AY25和LS30两个表位肽，并偶联载体蛋白合成TGF-β1肽疫苗，通过腹腔注射的方式免疫ICR小鼠，诱导小鼠产生抗TGF-β1抗体，中和在CCL4诱导的肝纤维化过程中过度表达的细胞因子TGF-Β1-BB，抑制其在肝纤维化发展过程中的促进作用，从而在一定程度上抑制肝纤维化的发展。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肝纤维化的防治
，涉及基于TGF-β I的B细胞抗原表位的合成肽疫苗及其应用。
技术介绍
肝纤维化是多种慢性肝病向肝硬化发展必经的病理过程，是决定慢性肝病预后的最主要因素。目前，大部分慢性肝病都缺乏有效的病因治疗，而且研究证实部分肝病在病因去除后肝纤维化仍可继续进展，故阻滞或延缓肝纤维化的发生发展从而防止进展为肝硬化成为慢性肝病治疗的主要途径之一。但目前尚无真正意义上有效的抗肝纤维化药物或措施，探索安全有效的抗肝纤维化措施是目前肝病学研究领域面临的重要课题。细胞因子疫苗是近年来疫苗学研究中的一个热点，主要是将某一疾病中起主要作用的细胞因子采用疫苗的方法主动免疫机体，诱导机体产生中和性抗体，中和该细胞因子以阻止其相应生物学功能的发挥，从而起到防治相关疾病的目的。合成肽疫苗是近年来研究较为广泛、且日渐成熟的新型疫苗之一，在稳定性、易获取性、安全性、纯化简单等方面具有明显的优势，已有大量文献报道其可行性和有效性。该疫苗不含核酸，是基于蛋白分子的抗原表位开发设计的一类疫苗，是最为理想的安全新型疫苗。转化生长因子-βI (transforming growth factor beta, TGF-βΙ)是一类能够调节细胞生长和分化的多肽，具备多种生物学作用，在肝纤维化发生、发展过程中具备活化肝星状细胞，促进胶原基因表达。促进细胞外基质合成与沉积等作用，是目前已知的促肝纤维化作用最强的细胞因子。TGF-β I在肝纤维化中的作用具体表现在:促进肝星状细胞表达和分泌1、II1、IV型胶原纤维、层粘连蛋白等多种细胞外基质成分；抑制细胞外基质中蛋白酶的活性，如对基质金属蛋白酶和组织纤溶酶原激活物的表达有抑制作用，抑制细 胞外基质的降解；增强某些细胞因子如血小板生长因子mRNA的表达；对成纤维细胞、单核细胞具有趋化作用；通过自分泌作用促进TGF- β I自身的表达。TGF^ I在肝纤维化发生发展过程中的关键作用已经得到研究者们的公认，针对TGF^ I的抗肝纤维化研究也成为抗肝纤维化研究的热点和极有应用前景的研究之一。目前面临的主要问题是探索安全有效的阻断TGFP I措施。已有报道用TGFP I抗体、可溶性TGF^ I受体及腺病毒介导截短的TGFi3 II型受体等通过中和作用使肝纤维化时过量产生的TGFP I降低，在动物实验中显示了显著的抗肝纤维化作用及减少肝细胞凋亡作用，且未发现有明显的肝脏局部或全身副作用。与肝纤维化有相似发生机理的肺、肾、心等器官纤维化的研究也得出类似结论。但从临床应用的角度来讲，以上方法都具有制备方法复杂、需反复多次给药、使用不便等突出缺点，应用前景欠佳。寻找更为方便有效地阻断TGFP I的手段是目前亟待解决的问题之一。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供基于TGF-β I的B细胞抗原表位的合成肽疫苗及其应用，通过诱导机体产生抗TGF-β I的抗体，以中和TGF-β I在肝纤维化过程中的促进作用，达到抑制肝纤维化进程的目的。本专利技术是通过以下技术方案来实现:一种TGF- β I的B细胞抗原表位，包括:氨基酸残基序列如SEQ.1D.N0.1所示的ΑΥ25表位；氨基酸残基序列如SEQ.1D.N0.2所示的LS30表位。一种合成肽疫苗，包括TGF-β I的B细胞抗原表位，并将其偶联在载体蛋白上；所示的抗原表位为如SEQ.1D.N0.1所示的ΑΥ25表位，或如SEQ.1D.N0.2所示的LS30表位。所述的载体蛋白为B SA或KLH。所述的合成肽疫苗在制备抗TGF-β I的抗体中的应用。所述的合成肽疫苗在制备抗肝纤维化的药物中的应用。所述的药物为抑制或拮抗TGF- β IB活性的药物。所述的药物为抑制肝细胞凋亡的药物。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果:本专利技术提供的TGF-β I的B细胞抗原表位，采用化学方法合成其多肽序列，制备偶联肽疫苗，通过腹腔注射的方法免疫小鼠，诱导小鼠机体产生相应的抗体，并通过CCl4构建肝纤维化模型，以观察所产生的抗TGF-β I抗体能否中和TGF-β I以达到抗肝纤维化的作用。结果表明，所筛选的表位ΑΥ-25和LS-30均具有抗原性，用ELISA和Western blot方法检测，相对于对照组和正常组而言，在免疫四次后实验组小鼠体内抗体滴度可达1:5120,该抗体滴度可持续4-6周，而后逐渐衰减,6个月后抗体滴度衰减至1:640-1:1280。能够与商品化、有生物学活性的重组TGF-β IB特异性反应；能够与原核表达的TGF-β I纯化蛋白结合；且所产生的抗体表现出较好的反应性和生物学活性。本专利技术提供的TGF- β I合成肽疫苗，免疫小鼠，诱导小鼠产生抗TGF- β I抗体，中和在CCL4诱导的肝纤维化过程中过度表达的细胞因子TGF-β 1，抑制其在肝纤维化发展过程中的促进作用，从而在一定程度上抑制肝纤维化的发展:在免疫后，在CCL4诱导的肝纤维化过程中，肝组织结构较完整，肝内纤维组织沉积少，肝纤维化程度分级显著降低；a-SMA和间质区PCNA的表达明显减少；间质区PCNA指数明显降低；肝组织Hyp含量均显著降低。证实TGF-β I合成肽疫苗免疫小鼠后能够显著抑制CCl4S导的小鼠肝纤维化。表明TGF-β I疫苗有望成为一种简单、安全、有效的肝纤维化防治新方法附图说明图1-1为ELISA检测各组免疫小鼠血清抗体滴度。图1-2为Western blot检测各组小鼠血清抗体的反应性。图1-3为MVlLU细胞生长实验检测各组小鼠血清抗体的生物学活性。图2为各组小鼠肝组织Masson染色结果。图3为各组小鼠肝组织羟脯氨酸含量结果。图4-1为各组小鼠肝组织a -SMA染色结果。图4-2为各组小鼠肝组织a -SMA阳性区域统计分析结果。图4-3为Western blot检测各组小鼠肝组织pSmad2/3和Smad2/3表达。图5-1 为 Western blot 检测各组 HSC-T6 细胞 pSmad2/3、Smad2/3 和 a -SMA 表达。图5-2为实时荧光定量PCR法检测C0LlA2mRNA表达。图5-3为实时荧光定量PCR法检测PA1-1表达。图5-4为实时荧光定量PCR法检测 ΜΡ-1表达。图6-1为各组小鼠肝组织TUNEL染色结果。图6-2为各组小鼠肝细胞凋亡指数统计分析结果。图7-1为各组小鼠肝组织PCNA染色结果。图7-2为各组小鼠肝细胞PCNA指数统计分析结果。 图8-1为各组小鼠肝组织DESMIN染色结果。图8-2为各组小鼠肝组织DESMIN染色阳性区域统计分析结果。具体实施例方式本专利技术提供基于TGF-β I的B细胞抗原表位的合成肽疫苗及其应用，筛选具有抗原性的表位肽并偶联载体蛋白合成TGF-β I肽疫苗，采用腹腔注射的方法免疫小鼠，重复免疫并检测小鼠血清抗体滴度，CCl4诱导小鼠肝纤维化模型。HE、Masson染色观察肝组织病理形态学改变。免疫组织化学染色检测肝组织中。碱水解法检测各组肝组织羟脯氨酸含量，观察各组小鼠肝组织纤维增生情况，比较疫苗免疫组与造模组、KLH组之间肝纤维化程度的差异。下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。1、TGF- β I的B细胞抗原表位的筛选及合成首先采用生本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种TGF?β1的B细胞抗原表位，其特征在于，包括：氨基酸残基序列如SEQ.ID.NO.1所示的AY25表位；氨基酸残基序列如SEQ.ID.NO.2所示的LS30表位。
【技术特征摘要】
1.一种TGF-β I的B细胞抗原表位，其特征在于，包括: 氨基酸残基序列如SEQ.1D.N0.1所示的ΑΥ25表位； 氣基酸残基序列如SEQ.1D.N0.2所不的LS30表位。2.一种合成肽疫苗，其特征在于，包括TGF- β I的B细胞抗原表位，并将其偶联在载体蛋白上； 所示的抗原表位为如SEQ.1D.N0.1所示的ΑΥ25表位，或如SEQ.1D.N0.2所示的LS30...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝志明，李爽，樊小宝，吕颐菲，苏厚强，蒋会平，张倩楠，郑晓燕，
申请(专利权)人：西安交通大学医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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