本发明专利技术提供了一种含有成纤维细胞生长因子-l改构体的凝胶剂的制备方法及在糖尿病足引起的慢性皮肤溃疡治疗中的应用。本发明专利技术所述的凝胶剂的组分及用量为：重组人成纤维细胞生长因子-1改构体(FGF-1135)蛋白20000～80000IU；低分子量肝素钠为10?p?g～40μg；甘油含量为O．2g～1．Og；蛋白保护剂为50mg～150mg；凝胶基质为0．03g～0．05g；调节pH值，加注射用水至lOml。本发明专利技术中所用的成纤维细胞生长因子-1改构体比原序列更加稳定，制备成凝胶剂后更方便于临床应用，并能达到较好的稳定性和缓释效果，提高了蛋白的生物利用度，更有利于糖尿病足的治疗。该凝胶剂还可用于烧烫伤及其他慢性、难愈性溃疡的治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种含有重组人成纤维细胞生长因子一 I改构体(FGF-1135)蛋白的用于治疗糖尿病足等疾病的凝胶剂制备及应用，属生物医药领域。
技术介绍
糖尿病(Diabetes mellitus, DM)是一种多种因素引起的全身代谢性疾病，目前全世界超过1.8亿人患有糖尿病，已经成为全球性重大公共卫生问题。糖尿病患者中约有30% 80%合并有皮肤损害，严重危害糖尿病病人的健康，其中最典型和危害最大的为糖尿病足。糖尿病足(DiabeticF00t，DF)是DM的常见慢性并发症之一，主要是以糖代谢紊乱为前提的综合因素作用的结果。糖尿病代谢异常引起的高血糖、高血脂及其所产生的代谢产物一方面可致神经轴突、神经鞘膜及雪旺细胞变性致使感觉神经、运动神经、自主神经功能障碍，导致感觉缺失、皮肤干裂、组织抵抗力降低易于感染坏疽；另一方面可使血小板聚集力增强、血液粘稠度增加，促进动脉粥样硬化及血栓形成，使血管腔狭窄或闭塞，导致肢端缺血坏死溃烂。缺血及神经损伤又使局部组织愈合能力、抗感染能力降低因而伤口不易愈合。在病理生理方面主要表现为创面组织细胞代谢异常，免疫功能紊乱，尤其是创面局部巨噬细胞、肥大细胞功能失调，并伴随有创面微环境中生长因子功能受损，创面局部微循环灌注障碍，组织缺氧等，从而造成创面经久不愈从而引起难以愈合的溃疡，往往会导致坏疽或截肢，大大降低了患者的生存质量，而且治疗相当困难，周期长，医疗费用高，给患者带来极大痛苦及沉重的负担。据统计每年大约有3% 6%糖尿病患者发生足部溃疡，其中70%的患者需要手术治疗，欧美国家40% 70%的下肢截肢与糖尿病有关，美国每年约有5万例以上的糖尿病截肢手术，我国糖尿病截肢率在14% 22%。随着现代糖尿病的发生率不断上升，糖尿病足所带来的社会问题和经济负担不断加重。`目前临床上糖尿病足的治疗方法主要有药物治疗、外科手术治疗、自体干细胞移殖治疗等。外科手术及自体干细胞移殖治疗费用高、专业性强，对病人的耐受性也有较高要求，因此开发促进肉芽生长和创面愈合有效药物，促进糖尿病足的早期愈合、缩短病程和降低致残率，是当今医学领域研究的重要课题之一，越来越受到研究人员和生产企业的重视。成纤维细胞生长因子一 I亦称为酸性成纤维细胞生长因子(acidic Fibroblastgrowthfactor, aFGF)是一类对来源于中胚层和神经外胚层的多种类型细胞具有广泛的生物学活性的细胞因子。作为一个高度保守的功能蛋白，大量的研究己充分证实了成纤维细胞生长因子家族成员在促进创伤愈合、溃疡愈合、血管再生、神经组织修复、神经突起生长等方面具有突出的功效，孕育着巨大的临床应用前景。由于溃疡创面是细菌等微生物繁殖的温床，创面自身及细菌等微生物的分泌物使创面这一微环境呈酸性。haFGF在这一微环境中较碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)稳定，更有利于发挥其生物学活性。此外，与表皮生长因子(EGF)相比较，EGF可促进I型胶原的合成，导致瘢痕疙瘩形成，而haFGF能通过对I型前胶原基因表达的下行调节作用，抑制成纤维细胞的胶原合成，减少成纤维细胞的胶原蛋白的过量沉积，有助于防止瘢痕疙瘩的产生。因而应用haFGF治疗糖尿病足溃疡等慢性难愈性伤口有着广阔的前景，可提高这类病人的伤口愈合速度和质量，进而提高患者的生活质量。目前，美国CardioVascularBioTherapeutics (CVBT)公司应用 aFGF 治疗糖尿病足为目标的一期临床试验已完成，已进入二期临床试验阶段，发展前景非常乐观。国内外也有临床使用bFGF、EGF、G—CSF, PDGF等生长因子与其他药物配合治疗糖尿病足的报道，显示具有明显的临床疗效。本专利技术中重组人成纤维细胞生长因子一 I改构体(mrhFGF-1，FGF-1135)与美国CVBT公司相比具有以下特点:根据FGF — I的活性结构域位于c端，N末端部分氨基酸的缺失不影响FGF的生物学活性的特性，去除了 N末端影响蛋白表达及稳定性的19个氨基酸，使表达量由80mg / L提升到200mg / L以上；体外细胞测活与药效学表明，N末端缺失19个氢基酸不影响FGF — I的生物学活性:缺失后重组蛋白的N末端降解问题与二聚体形成明显降低。同时，也通过动物实验证实FGF-1135对糖尿病性皮肤溃疡具有较为显著疗效，并进一步证明其用药的安全性。
技术实现思路
对目前成纤维细胞生长因子一 I冻干粉制剂对糖尿病足等难愈性溃疡的临床应用中的不足进行改进，提供简单实用、稳定性及疗效好的凝胶剂及其制备方法。本专利技术目的是提供FGF-1凝胶剂制备方法。本专利技术进一步目的是在于提供FGF-1凝胶剂在糖尿病足溃疡疾病中的应用。本专利技术还可应用于烧烫伤、褥疮等难愈性溃疡的临床治疗。本专利技术的上述目的是通过如下方案予以实现的: 本专利技术提供了一种重组人成纤维细胞生长因子一 I改构体凝胶剂的制备方法。按照专利技术的实施例方案，卡波姆重量0.3% 1.0%，优选0.5%作为凝胶基质:人血白蛋白重量0.5% 1_5%，优选1.0%作为蛋白保护剂；低分子量肝素重量0.l%mg 0.4%mg，优选0.5% mg作为保护细胞活性，并减缓其释放；甘油重量2.0% 10.0%，优选5.0%作为凝胶保湿剂。在本专利技术的凝胶剂中，重组人成纤维细胞生长因子一 I改构体有效剂量2000Iu / g 8000Iu / g，优选6750 Iu / g，该剂量能有效促进I型及2型糖尿病溃疡模型创面的有效愈合。本专利技术还提供了凝胶剂的制备方法，包括基质溶胀及灭菌即将卡波姆940中加入甘油，搅拌充分混匀，用适量注射用水充分溶胀，调节PH值使其形成透明凝胶，121°C、30min高压灭菌。冷却后备用；将重组人成纤维细胞生长因子一 I改构体蛋白、人血白蛋白及肝素，加入适量冷却的注射用水中充分混匀，在无菌条件下用0.22 u m滤膜过滤除菌；在无菌条件下，将上述两种物质充分混合，分装即得。本专利技术具有以下优点:1.本专利技术采用卡波姆940作为基质材料，具有延展性好、易于涂抹和附着于皮肤，对皮肤及粘膜无刺激性并能吸收组织渗透液，有利于分泌物的排出；无油腻性，释药迅速，与皮肤组织耦合效果好等特性。2.本专利技术配伍合理，可达到稳定负载FGF-1蛋白于凝胶剂中，并保持其生物活性、延缓释放的作用，促进创面有效愈合。采用的组分均对皮肤无毒副作用、无刺激性，便于清洁。3.本专利技术产品可直接涂抹于创面部位，使用方便，增加患者的依从性和临床应用。附图说明图1皮肤外伤性溃疡模型图2皮肤烫伤性溃疡模型图3FGF_1135凝胶剂对I型糖尿病SD大鼠皮肤外伤及烫伤治疗愈合情况 图4FGF_1135凝胶剂对2型糖尿病GK大鼠皮肤外伤及烫伤治疗愈合情况图5FGF_1135凝胶剂对I型糖尿病GK大鼠皮肤外伤及烫伤皮肤组织病理学检查图6FGF_1135凝胶剂对I型糖尿病GK大鼠皮肤创伤及烫伤皮肤组织病理学检查具体实施例方式实施例1生产加载FGF-1135的凝胶剂基质溶胀及灭菌:将卡波姆940中加入甘油，搅拌充分混匀，用适量注射用水充分溶胀，调节PH值使其形成透明凝胶，12rC、30min高压灭菌。冷却后备用；蛋白除菌过滤:将重组人成纤维细胞生长因子一 I改构体蛋白、人血白蛋白及肝素，加入冷却的注射本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种含有成纤维细胞生长因子一1改构体的治疗糖尿病足凝胶剂的制备方法。以1000ml即100支(10g／支)凝胶剂制备量计，其组成配方为：①重组人成纤维细胞生长因子一1改构体蛋白2?X?lO6IU～8?X?lO6IU②蛋白保护剂????5g～15g；⑨低分子量肝素lmg～4mg；④甘油????20g～lOOg；⑤凝胶基质????3g～log；⑥注射用水，定容至1000ml。其中所述的蛋白保护剂为人血白蛋白，凝胶剂基质为卡波姆940。
【技术特征摘要】
1.种含有成纤维细胞生长因子一 I改构体的治疗糖尿病足凝胶剂的制备方法。以IOOOml即100支(IOg /支)凝胶剂制备量计，其组成配方为: ①重组人成纤维细胞生长因子一I改构体蛋白2 X IO6IU 8 X IO6IU ②蛋白保护剂5g 15g ； ⑨低分子量肝素Img 4mg ； ④甘油20g IOOg ； ⑤凝胶基质3g log ； ⑥注射用水，定容至1000ml。其中所述的蛋白保护剂为人血白蛋白，凝胶剂基质为卡波姆940。2.根据专利要求I所述的含有成纤维细胞生长因子一I改构体的治疗糖尿病足的凝胶剂的制备优选方法，以IOOOml凝胶剂制备量计，其组成配方为: ①重组人成纤维细胞生长因子一I改构体蛋白6.75X IO6IU ②蛋白保护剂10.0g; ③低分子量肝素3.0mg； ④甘油50.0g; ⑤凝胶基质4.0g ； ⑥注射用水，定容至1000ml。其中所述的蛋白保护剂为人血白蛋白，凝胶剂基质为卡波姆940。3.根据专利要求I或2所述的含有成纤维细胞生长因子一...
【专利技术属性】
技术研发人员：田海山，李校堃，王晓杰，金利泰，姜潮，唐禄，
申请(专利权)人：温州医学院，浙江格鲁斯特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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