用于治疗性结合物的短且含D氨基酸的多肽及其使用制造技术

本发明专利技术涉及具有一个或多个D氨基酸（作为靶向部分）的短多肽（例如，在长度上，少于19个氨基酸）和较长多肽（例如，在长度上，具有19个或更多氨基酸）。当结合至试剂（例如，治疗剂或运输载体）时，这些多肽可将试剂运过BBB或运至特定细胞类型。具体地，短多肽可包括一个或多个D氨基酸。因此，这些化合物可特别用于治疗神经系统疾病或与特定细胞类型、器官或组织相关的疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及(部分地)可用作靶向部分的短多肽。本专利技术还涉及包含连至治疗剂或运输载体的靶向部分的结合物及其使用。
技术介绍
大脑可通过两种屏障系统屏蔽潜在的有毒物质:血-脑屏障(BBB)和血-脑脊液屏障(BCSFB)。由于BBB表面积比BCSFB表面积大了约5000倍，所以BBB被视为是吸收血清配体的主要途径。大脑内皮(构成BBB)是针对许多中枢神经系统(CNS)疾病使用潜在药物的主要障碍。一般规则而言，仅小的亲脂性分子可通过BBB，即从循环系统的血液到大脑。虽然具有较大尺寸或较高疏水性的许多药物针对治疗CNS疾病在动物研究中显示出可喜成果，但是其通常不能穿过(跨越)BBB。因此，由于大脑毛细血管内皮壁对这些药物的可忽略不计的渗透性，肽和蛋白质的治疗通常在血至大脑的运输之外。由于其他的有效治疗剂不能穿过BBB，通常会削弱大脑疾病的治疗。因此，需要将试剂运输至大脑的新策略。
技术实现思路
现在我们已开发出具有增强疗效的能够穿过血-脑屏障(BBB)或能够进入特定细胞类型(例如，肝脏、眼睛、肺、肾、脾、肌肉或卵巢)的短多肽(即，在长度上，少于19个氨基酸)。我们还开发出具有一个或多个D氨基酸(例如，3D-An2或其片段)的短的(S卩，在长度上，6至18个氨基酸)和较长的(例如，在长度上，19或更多个氨基酸)多肽。这些多肽可用作靶向部分。当这些靶向部分与一个或多个试剂或运输载体相连(例如，结合到其上)时，穿过BBB或进入特定细胞类型的运输效率也同样地增强。因此，本专利技术的特征在于可选择地与一个或多个试剂(例如，一个或多个治疗剂)或运输载体(例如，纳米颗粒或脂质体)结合的靶向部分，以及这些化合物在治疗和诊断疾病中的使用。在第一个方面，本专利技术的特征在于纯化的多肽，或其药学上可接受的盐，包括氨基酸序列 Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys (式 Ia)，其中 X3 为 Asn 或 Gln ；X4 为 Asn 或 Gln,且 X5 为Phe、Tyr或Trp ;其中在长度上，所述多肽为少于200个氨基酸(例如，少于150、100、75、50、45、40、35、30、25、20、19、18、17、16、15、14、12、10、11、8 或 7 个氨基酸，或这些数值之间的任何范围)；其中所述多肽可选择地包括式Ia所述氨基酸的一个或多个D异构体(例如，Lys,Arg、X3、X4、X5或Lys的D异构体)；且其中所述多肽不为表2所示的多肽。在第二个方面，本专利技术的特征在于纯化的多肽，或其药学上可接受的盐，包括氨基酸序列 Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys (式 Ia)，其中 X3 为 Asn 或 Gln ；X4 为 Asn 或 Gln,且 X5 为Phe、Tyr或Trp ;其中在长度上，所述多肽少于19个氨基酸(例如，少于18、17、16、15、14、12、10、11、8或7个氨基酸，或这些数值之间的任何范围)；并且其中所述多肽可选择地包括式Ia所述氨基酸的一个或多个D异构体(例如，Lys, Arg、X3、X4、X5或Lys的D异构体)。在上述的任一多肽中，可以由氨基酸序列Lys-Arg-X3-X4-X5_Lys进行1、2、3、4或5个氨基酸(例如，I至3个氨基酸)的添加或缺失。在第一和第二方面的一些实施方式中，所述的氨基酸序列为Zl-Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys-Z2 (式 Ib)，其中 X3 为 Asn 或 Gln ；X4 为 Asn 或 Gln ；X5 为Phe、Tyr 或 Trp ；Z1 不存在，或为 Cys、Gly、Cys-Gly、Arg-Gly、Cys-Arg-Gly、Ser-Arg-Gly、Cys-Ser-Arg-Glyλ Gly-Ser_Arg_Gly、Cys-Gly-Ser-Arg-Gly、Gly-Gly-Ser-Arg-GlyΛCys-Gly-Gly-Ser-Arg-Glyλ Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-GlCys-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、 Cys-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-GlyλCys-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly,或 Cys-Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly ;且 Z2 不存在，或为 Cys、Tyrλ Tyr-Cys、Cys-TyrΛ Thr-Glu-Glu-Tyr,或 Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys ;且其中所述多肽可选择地包含式Ib、Zl或Z2所述氨基酸的一个或多个D异构体。在第一和第二方面的其他实施方式中，所述多肽具有一个或多个额外的Cys残基(在多肽的N末端、多肽的C末端，或两者上)。在其他实施方式中，所述多肽具有一个或多个额外的Tyr残基(在多肽的N末端、多肽的C末端，或两者上)。在又另外的实施方式中，所述多肽具有氨基酸序列Tyr-Cys和/或Cys-Tyr (在多肽的N末端、多肽的C末端或两者上)。在第一和第二方面的某些实施方式中，所述氨基酸序列为Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys。在其他实施方式中，所述氨基酸序列为Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Tyr。在又其他实施方式中，所述氨基酸序列为Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Tyr-Cys0在第一和第二方面的特定实施方式中，所述氨基酸序列为Xl-X2-Asn-Asn-X5-X6(式 Ila)，其中 Xl 为 Lys 或 D-Lys ;X2 为 Arg 或 D-Arg ；X5 为 Phe 或 D-Phe ;且父6 为 Lys 或D-Lys ;且其中X1、X2、X5*X6中至少一个(例如，至少两个、三个或四个)为D-氨基酸。在第一和第二方 面的其他实施方式中，所述的氨基酸序列为Xl-X2-Asn-Asn-X5-X6-X7(式 IIb)，其中 Xl 为 Lys 或 D-Lys ；X2 为 Arg 或 D-Arg ；X5 为 Phe或 D-Phe ；X6 为 Lys 或 D-Lys ;且乂7 为 Tyr 或 D-Tyr ;且其中 X1、X2、X5、X6 或 X7 中至少一个(例如，至少两个、三个、四个或五个)为D-氨基酸。在第一和第二方面的一些实施方式中，所述氨基酸序列为Zl-Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys-Z2 (式 He),其中 X3 为 Asn 或 Gln ；X4 为 Asn 或 Gln ；X5 为Phe、Tyr 或 Tip ；Z1 不存在，或为 Cys、Gly、Cys-Gly、Arg-Gly、Cys-Arg-Gly、Ser-Arg-Gly、Cys-Ser-Arg-Glyλ Gly-Ser_Arg_Gly、Cys-Gly-Ser-Arg-Gly、Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Gly-Gly-Ser-Arg-Glyλ Tyr-Gly-Gly-Ser_Arg_Gly、Cys-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-GlyΛPhe本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.02 US 61/361,305;2011.06.07 US 61/494,368;1.一种包含Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys (式Ia)氨基酸序列的纯化的多肽，或其药学上可接受的盐， 其中:X3为Asn或Gln ； X4为Asn或Gln ;且 X5 为 Phe, Tyr 或 Trp ； 其中所述多肽的长度少于50个氨基酸； 其中所述多肽可选择地包含式Ia所述氨基酸的一个或多个D异构体；以及 其中所述多肽不为表2中的肽。2.一种包含Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys (式Ia)氨基酸序列的纯化的多肽，或其药学上可接受的盐， 其中:X3为Asn或Gln ； X4为Asn或Gln ;且 X5 为 Phe, Tyr 或 Trp ； 其中所述多肽的长度少于19个氨基酸；且 其中所述多肽可选择地包含式Ia所述氨基酸的一个或多个D异构体。3.根据权利要求1至2中任一项所述的多肽，其中所述氨基酸序列为Zl-Lys-Arg-X3-X4-X5-Lys-Z2 (式 Ib)， 其中:X3为Asn或G ln;X4 为 Asn 或 Gln ；X5 为 Phe, Tyr 或 Trp ； Zl 不存在，或为 Cys、Gly、Cys-Gly、Arg-Gly、Cys-Arg-Gly> Ser-Arg-Gly>Cys-Ser-Arg-Gly> Gly-Ser-Arg-Gly> Cys-Gly-Ser-Arg-Gly、Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly> Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly> Cys-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly>Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、 Cys-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly>Cys-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly 或 Cys-Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly ;且 Z2 不存在，或为 Cys、Tyr> Tyr-Cys> Cys-Tyr> Thr-Glu-Glu-Tyr 或Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys ；以及 其中所述多肽可选择地包含式Ib、Zl或Z2所述氨基酸的一个或多个D异构体。4.根据权利要求1至2中任一项所述的多肽，其中所述氨基酸序列为Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys。5.根据权利要求1至2中任一项所述的多肽，其中所述氨基酸序列为Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Tyr06.根据权利要求1至2中任一项所述的多肽，其中所述氨基酸序列为Xl-X2-Asn-Asn-X5-X6 (式 Ila)， 其中:X1为Lys或D-Lys ；X2 为 Arg 或 D-Arg ；X5 为 Phe 或 D-Phe ;且X6 为 Lys 或 D-Lys ;且其中X1、X2、X5或X6中的至少一个为D氨基酸。7.根据权利要求1至2中任一项所述的多肽，其中所述氨基酸序列为Xl-X2-Asn-Asn-X5-X6-X7 (式 Ilb)， 其中:X1为Lys或D-Lys ;X2 为 Arg 或 D-Arg ；X5 为 Phe 或 D-Phe ；X6 为 Lys 或 D-Lys ;且X7 为 Tyr 或 D-Tyr ;且 其中X1、X2、X5、X6或X7中的至少一个为D氨基酸。8.根据权利要求1至2中任一项所述的多肽，其中所述氨基酸序列为Zl-Xl-X2-Asn-Asn-X5-X6-X7-Z2 (式 He)， 其中:X1为Lys或D-Lys ;X2 为 Arg 或 D-Arg ；X5 为 Phe 或 D-Phe ；X6 为 Lys 或 D-Lys ；X7 为 Tyr 或 D-Tyr ； Zl 不存在，或为 Cys、Gly、Cys-Gly、Arg-Gly、Cys-Arg-Gly^ Ser-Arg-Gly^Cys-Ser-Arg-Gly^ Gly-Ser-Arg-Gly^ Cys-Gly-Ser-Arg-Gly^ Gly-Gly-Ser-Arg-Gly^Cys-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly^ Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly^ Cys-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly^Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、 Cys-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly、Cys-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly^Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly 或 Cys-Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly ;且 Z2 不存在，或为 Cys、Tyr、Tyr-Cys、Cys-Tyr、Thr-Glu-Glu-Tyr 或Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys ； 其中X1、X2、X5、X6或X7中的至少一个为D-氨基酸；且 其中所述多肽可选择地包含Zl或Z2所述氨基酸的一个或多个D异构体。9.根据权利要求1至8中任一项所述的多肽，其中所述多肽的长度少于15个氨基酸。10.根据权利要求1至8中任一项所述的多肽，其中所述多肽的长度少于10个氨基酸。11.根据权利I至2中任一项所述的多肽，其中所述多肽选自由以下组成的组:Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-D-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr (3D_An2) ；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (Pl) ；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (Pla) ；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (Plb) ；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-D-Tyr-Cys (Plc) ；D-Phe-D-Tyr-Gly-Gly-Ser-D-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-D-Glu-D-Tyr-Cys (Pld) ；Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P2) ；Ser-Arg-Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P3) ；Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P4) ；Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P5) ；D~Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P5a) ；D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P5b) ；D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-D-Tyr-Cys(P5c) ；Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Tyr-Cys (P6) ；D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-Lys-Tyr-Cys (P6a) ；D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Tyr-Cys (P6b)；以及 D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-D-Tyr-Cys (P6c);或其片段。12.根据权利要求1至2中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含具有与选自以下组成的组中的一个或多个序列相关的氨基酸的O至5个取代、缺失或添加的序列Ahr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-D-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-Phe-LyS-Thr-Glu-Glu-Tyr(3D_An2) ；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (Pl)；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-Lys-Thr-Glu-GIu-Tyr-Cys (Pla) ；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (Plb) ；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-D-Tyr-Cys (Plc) ；D-Phe-D-Tyr-Gly-Gly-Ser-D-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-D-Glu-D-Tyr-Cys (Pld)；Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P2) ；Ser-Arg-Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P3) ；Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P4) ；Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P5) ；D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P5a) ；D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (P5b) ；D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-D-Tyr-Cys(P5c) ；Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Tyr-Cys (P6) ；D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-Lys-Tyr-Cys (P6a) ；D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Tyr-Cys (P6b)；以及 D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Ly s-D-Tyr-Cy s (P6c);或其片段。13.根据权利要求1至2中任一项所述的多肽，其中所述多肽选自由以下组成的组:Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-Ly s-Ar g-Asn-Asn-Phe-Ly s-Thr-Glu-Glu ;Gly-Gly_Ser_Arg-Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu ；Ser-Arg-Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu ；Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu ；Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu ;以及 Lys- Arg-Asn-Asn-Phe-Lys，或其片段。14.根据权利要求1至2中任一项所述的多肽，其中所述多肽为Thr-Phe-Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-D-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr (3D_An2);Phe_Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-Lys-Arg-Asn-Asn-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (Pl) ;Phe_Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (Pla)；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-Tyr-Cys (Plb)；Phe-Tyr-Gly-Gly-Ser-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-Glu-D-Tyr-Cys (Plc) ；D-Phe-D-Tyr-Gly-Gly-Ser-D-Arg-Gly-D-Lys-D-Arg-Asn-Asn-D-Phe-D-Lys-Thr-Glu-D-Glu-D-Tyr-Cys (Pld);或其片段。15.根据权利要求14所述的多肽，其中所述片段在Pl，Pla,Plb, Plc或Pld的N末端缺失I至7个氨基酸；在Pl，Pla，Plb, Plc或Pld的C末端缺失I至5个氨基酸；或在P1，Pla, Plb, Plc或Pld的N末端缺失I至7个氨基酸并在Pl，Pla, Plb, Plc或Pld的C末端缺失I至5个氨基酸。16.根据权利要求1至15中任一项所述的多肽，其中所述C末端被酰胺化。17.根据权利要求1至16中任一项所述的多肽，其中所述多肽被有效地运过血脑屏障。18.根据权利要求17所述的多肽，其中与Angiopep-2相比较，所述多肽被更有效地运过血脑屏障。19.一种治疗性多肽,包含 由权利要求1至18中任一项的多肽组成的靶向部分和 治疗性肽剂，其中将所述靶向部分连至所述治疗性肽剂。20.根据权利要求19所述的治疗性多肽，其中通过共价键将所述靶向部分...

【专利技术属性】
技术研发人员：让保罗·卡斯泰恩，米歇尔·德默勒，克里斯蒂安·切，卡里纳·蒂奥特，劳伦斯·佩斯尔赫尔布，
申请(专利权)人：安吉奥开米公司，
类型：
国别省市：