【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及一种重组鲤鱼Nrf2基因、蛋白及其制备与检测方法和应用。
技术介绍
核因子相关因子2 (NF-E2_related factor 2，Nrf2)是调控肠粘膜谷胱甘肽-S-反转移酶(glutathione S-trans ferase, GST)基因表达的关键信号分子。抗氧化反应兀件(Antioxidant Response Element, ARE)是GST基因启动子区域的5' -TGACnnnGC-3'序列。研究表明:信号分子Nrf2与GST基因的ARE序列结合，可激活GST转录。鼠和人的Cu/ZnSOD基因启动子上游区域存在ARE序列。然而，不同物种之间Cu/ZnSOD的基因全序列特征存在很大差异。人的Cu/ZnSOD基因组序列为8419bp (有5个外显子和4个内含子)，但海湾扇贝基因全序列仅为4279bp (只有4个外显子和3个内含子)，而果蝇基因全序列比较短，只有1425bp (仅有2个外显子和I个内含子)。因此,鱼的Cu/ZnSOD基因表达的调控与其它动物可能存在差异，需要进一步研究。有限的研究表明:Nrf2是大鼠...
【技术保护点】
一种重组鲤鱼NRF2基因，为下述序列之一：1)序列表中SEQ?ID?No：1所示的基因序列；2)?将SEQ?ID?NO?:1所示的基因序列经过一个或几个碱基的取代、缺失或添加且与SEQ?ID?No：1所示的基因序列表达的氨基酸序列相同的基因序列。
【技术特征摘要】
1.一种重组鲤鱼NRF2基因，为下述序列之一:1)序列表中SEQ ID No:1所示的基因序列；2)将SEQ ID NO:1所示的基因序列经过一个或几个碱基的取代、缺失或添加且与SEQID No:1所不的基因序列表达的氣基酸序列相同的基因序列。2.一种重组鲤鱼NRF2氨基酸序列，为下述序列之一:I) SEQ ID NO:2所示的由权利要求I所述重组鲤鱼NRF2基因所表达的氨基酸序列；2)将SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且与具有与SEQ ID NO:2的氨基酸序列相同活性的由SEQ ID NO:2序列衍生的蛋白质。3.一种权利要求1所述重组鲤鱼NRF2基因的制备方法，其特征在于，包括下述步骤: O采集鲤鱼的总RNA并以其肠道组织总RNA为模板进行反转录操作，得到cDNA第一链； 2)以步骤I)中的cDNA第一链为模板，利用引物N1、N2进。C R扩增，得到SEQ ID NO:1所示的序列，所述引物NI具有SEQ ID NO: 3所示的序列，引物N2具有SEQ ID NO:4所不的序列；` 所述步骤2)中以N1、N2为引物，利用DNA聚合酶进。C R反应的50 μ 1°C R扩增体系中各组分及其比例为:cDNA第一链，2.5 μ I ;50μΜ的Ν1，0.25μ I ;5(^] 的吧，0.25 μ I ；IOXLA0C R Buffer 11,5.0 μ I ；each 2.5 mM 的 dNTP Mixture, 8.0 μ I ；ddH20, 33.5 μ I ；5U/μ I的DNA聚合酶，0.5μ I ;反应循环条件:94°C预变性Imin ;94°C变性30sec，6(TC退火30 sec，72°C延伸2 min，共40个循环；最后72°C延伸10 min，反应完成。4.一种权利要求3所制备的重组鲤鱼NRF2基因的检测方法，其特征在于，包括下述步骤: 1)将附和吧1:1 回收产物1:1 扩增采用2\了391:1 MasterMix进行，50 μ 1°CR扩增体系中各组分及其比例为:50倍稀释的`NRF2回收产物，1.0μ I ;50μΙ^^Ν3，0.25μ I ；50μΜ的 Ν4，0.25 μ I ；2 X Taq0C R MasterMix, 25.0 μ I ；ddH20,23.5 μ I ;反应循环条件:94°C预变性Imin ;94°C变性30sec，60°C退火30sec，72°C延...
【专利技术属性】
技术研发人员：周小秋，姜维丹，冯琳，姜俊，刘扬，李树红，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：
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