一种用于促通读药物筛选的有限细胞株的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种表达绿色荧光蛋白（EGFP）和红色荧光蛋白（DsRed）的真核生物表达载体；突变体在绿色荧光蛋白EGFP的445氨基酸位置含有一个提前终止密码子，该突变位点能有效的阻止绿色荧光蛋白EGFP的表达。将构建的双荧光表达载体及其突变体导入非洲绿猴肾细胞Cos-7中，经促通读药物PTC124处理，利用流式细胞术对绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的表达强度进行检测，能高效测定出促通读药物对该载体的促通读效率。另外该表达载体的多克隆位点可以引入不同的无义突变以及其上下游相关序列，从而可以特异性的筛选针对不同无义突变引发的疾病的靶向药物。

【技术实现步骤摘要】

:本专利技术涉及生物工程动物细胞株领域，具体涉及，更具体的说是一种双荧光哺乳动物表达载体及其PTC突变体有限细胞株的建立方法和依照该方法建立的双荧光哺乳动物表达载体及其PTC突变体有限细胞株。
技术介绍
: 根据人类基因组突变数据库(HumanGenome Mutation Database, HGMD, http://WWW.hgmd.0rg)2012年权威统计，由于移码突变、选择性剪切或者直接的无义突变，在人类基因组上形成了提前终止密码子(Premature termination codons, PTC), PTC的存在使机体产生截断型的蛋白质或者具有负显性效应的蛋白质，有三分之一的人类遗传疾病是由此导致的；11.2%的人类遗传疾病是由于无义突变直接引发或者是伴随出现的。临床治疗遗传疾病的主要方向之一就是通过对PTC的促通读，从而抑制产生截断型蛋白质，促进产生全长的有活性的蛋白质来缓解和治疗遗传疾病。目前基因内PTC的通读研究是分子细胞生物学的热点之一，对由此导致的遗传疾病的治疗具有潜在应用价值。主要针对的遗传疾病有囊性纤维化病变(cystic fibrosis,CF)、杜氏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双荧光基因，其核苷酸序列为SEQ?ID?NO：1。

【技术特征摘要】
1.一种双荧光基因，其核苷酸序列为SEQ ID N0:1。2.一种哺乳动物表达载体，含有权利要求1所述的双荧光基因。3.一种用于促通读药物筛选的有限细胞株的建立方法，包括如下步骤:1)利用基因重组技术将DsRed和EGFP基因克隆到pEGFP-Nl哺乳动物表达载体上，构建成pDsRed-EGFP，重组质粒经酶切鉴定；2)利用PCR快速定点突变方法，将DsRed基因的终止密码子tag突变至tac，并且调整DsRed和EGFP基因至一个阅读框，构建成双荧光哺乳动物表达载体pDsRed-EGFPmtag-；3)利用P...

【专利技术属性】
技术研发人员：申泉，李毳，柴宝峰，王刚，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：