本发明专利技术公开了日本血吸虫重要抗原的高通量筛选及其在血吸虫病诊断中的应用。具体的，本发明专利技术提供了一类重要的血吸虫抗原及其在血吸虫病诊断以及疫苗制备方面的用途。本发明专利技术人基于GST融合表达的高通量功能蛋白筛选技术，获得24个能被血吸虫病病人血清识别的阳性抗原，其中8个抗原呈现较强的阳性反应。血吸虫病血清学检测表明，用这些阳性抗原检测血吸虫具有高敏感性和特异性。本发明专利技术还提供了相应的诊断和监测血吸虫病的方法和试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
；更具体地，本专利技术公开了日本血吸虫重要抗原的高通量筛选及其在血吸虫病诊断中的应用，本专利技术还涉及一类血吸虫阳性抗原，并提供这些抗原在血吸虫病诊断和疫苗制备中的应用。
技术介绍
血吸虫病是一种严重威胁人类健康的人畜共患病，全球每年因血吸虫病死亡人数约28万。经过几十年的努力，我国血吸虫病防治工作取得了举世瞩目的成就，然而目前我国仍有现症感染人群约50万，尤其是目前大量人口流动，加之人们对血吸虫病防范意识松懈，导致我国血吸虫病防治形势不容乐观，防治任务依然艰巨。血吸虫的诊断是防治血吸虫的重要前提和手段之一。精确的诊断技术不仅可以用于患者确诊，还可用于划分流行区等级、评估流行态势和考核防控效果等。目前血吸虫病诊断方法主要有三种，一是病原学检测方法，二是免疫学检测方法，三是分子生物学检测方法。病原学检测方法主要包括虫卵检测法(Kato-Katz Technique)和毛蝴孵化法(Ha tching Test)。免疫学检测方法主要有间接红血球凝集试验(IndirectHemagglutination Assay, IHA)、酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay, ELISA)、环卵沉淀试验(Circum Oval Precipitating Test, COPT)以及斑点免疫金渗滤试验(Dotimmunogoldfiltration Assay, DIGFA)。分子生物学方法是通过血吸虫特异的核酸扩增技术来进行诊断。以上三种方法各有优缺点病原学检测结果虽然目前仍然是血吸虫病确诊的金标准，但是病原学检测敏感度低，费时费力，同时还有污染环境的危险。免疫学方法中的环卵沉淀试验(COPT)和间接红血球凝集试验(IHA)特异性高，但敏感性低，不能广泛使用。分子生物学的检测方法敏感性高，但易出现假阳性，同时该方法对实验条件要求较高，目前仅停留在实验室研究阶段，无法广泛应用。相比而言，ELISA技术具有操作简单、敏感度高、易标准化等优点，并且广泛应用在多种疾病诊断中，因此是血吸虫病诊断优先发展的方向。ELISA技术的关键是抗原的选择。目前市场上血吸虫抗体诊断ELISA使用的抗原是虫卵可溶性抗原(SEA)，但SEA是粗抗原，成分比较复杂，受个体生理和环境情况影响很大，使得SEA-ELISA的特异性较差，容易出现交叉反应，无法区分现症感染和既往感染。此外，虫卵可溶性抗原SEA通常要从动物肝脏中的虫卵提取，检测条件难以精确控制，且SEA-ELISA的方法成本较高，因此导致批次间的结果不稳定，无法产业应用。利用基因工程技术生产重组蛋白是替代SEA的潜在新型抗原。重组抗原具有产量高、价格低、交叉反应少等优点，但抗原的选择依然是制约产业应用的瓶颈。关键目前本领域内还没有有效的、高敏感性、高特异性的抗原分子用作ELISA反应检测血吸虫。因此本领域迫切需要开发用于血吸虫病诊断和防治的新靶标抗原分子。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一类用于日本血吸虫的阳性抗原及其用途。本专利技术的另一目的在于提供一种高通量血吸虫抗原的筛选方法。本专利技术的另一目的在于提供一种血吸虫病诊断试剂和试剂盒。在本专利技术的第一方面，提供了一种血吸虫阳性抗原，所述抗原选自(a)氨基酸序列如SEQ ID NO 1~24所示的多肽(b)将SEQ ID NO :1-24氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基取代、缺失或添加而形成的具有免疫原性的衍生多肽；(c)与SEQ ID NO 1~24所示氨基酸序列的同源性彡90%的、具有免疫原性的多肽；或(d)具有免疫原性的多肽(a)-(c)的片段。在另一优选例中，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO :1_8所示。在另一优选例中，所述抗原用于制备检测血吸虫的试剂或试剂盒。在本专利技术的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，包括一核苷酸序列，所述核苷酸序列选自下组(a)编码如本专利技术第一方面所述阳性抗原的多核苷酸； (b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。在另一优选例中，所述多核苷酸编码具有SEQ ID NO 1所示氨基酸序列的抗原。在本专利技术的第三方面，提供了一种载体，所述载体含有本专利技术的第二方面所述的多核苷酸。在本专利技术的第四方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，所述宿主细胞含有本专利技术的第三方面所述的载体或染色体整合有本专利技术的第二方面所述的多核苷酸。在本专利技术的第五方面，提供了一种血吸虫阳性抗原的制备方法，所述方法包括步骤(a)在适合表达的条件下，培养本专利技术第四方面所述的宿主细胞；(b)从培养物中分离出血吸虫阳性蛋白抗原。在本专利技术的第六方面，提供了一种检测血吸虫的试剂盒，所述试剂盒包括容器或载体；以及位于所述容器内或载体上的如本专利技术第一方面所述的阳性抗原。在另一优选例中，所述试剂盒还包括酶结合液、反应底物和任选的说明书，较佳地，所述的试剂盒还可包括选自下组的组分反应终止液、样本稀释液、和洗涤液。在本专利技术的第七方面，提供了一种检测血吸虫的试剂，所述试剂包括固相载体以及包被于所述固相载体上的本专利技术第一方面所述的阳性抗原。在另一优选例中，所述的固相载体上包被有SjGPl(序列如SEQ ID N0:1所示)以及任选的选自序列如SEQ ID NO :2-24所不的一种或多种阳性抗原。在另一优选例中，所述的试剂盒或试剂用于用于检测待测样本是否感染血吸虫。在另一优选例中，所述待测样本来自血吸虫病流行区人群。在另一优选例中，所述待测样本来自牛或其他哺乳动物。在本专利技术的第八方面，提供了一种能与本专利技术第一方面所述的血吸虫阳性抗原特异性结合的抗体。在另一优选例中，所述抗体是与氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示的阳性抗原结合的抗体。在本专利技术的第九方面，提供了一种抗原-抗体复合物，所述的复合物包括⑴氨基酸序列如SEQ ID NO :1_8所示的阳性抗原；(ii)与(i)阳性抗 原特异性结合的抗体；并且所述的抗原和抗体结合在一起。在另一优选例中，所述复合物由氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示的阳性抗原及其特异性结合的抗体所构成。在本专利技术的第十方面，提供了本专利技术第九方面所述的抗原-抗体复合物的用途，所述复合物用于(a)制备检测血吸虫的试剂或试剂盒；和(b)用作检测血吸虫的阳性对照。在另一优选例中，所述的检测是血清学检测。在本专利技术的第十一方面，提供了一种高通量筛选血吸虫抗原的方法，包括步骤(1)将含有信号肽的候选蛋白抗原与标志蛋白GST进行融合表达；(2)将步骤(I)得到的融合蛋白置于螯合了 GSH的多孔板的孔中，从而捕获GST融合蛋白；(3)将含有血吸虫抗体的血清置于步骤(2)的多孔板的孔中；(4)筛选形成特异性抗原-抗体复合物的孔，所对应的候选蛋白即为血吸虫阳性抗原。在另一优选例中，在步骤⑵中将5-100种(较佳地10-80种)GST融合蛋白置于多孔板的孔中。在另一优选例中，步骤(3)所述待测样本为人或除人外的哺乳动物的血清。在另一优选例中，步骤(3)所述的筛选方法是ELISA。在本专利技术的第十二方面，提供了一种检测样本中是否感染血吸虫的方法，包括步骤(1)制备本专利技术第一方面所述的血吸虫阳性抗原；(2)将步骤⑴得到的抗原与待检测的样本接触；(3)检测样本中是否含有与本专利技术第一方面任一所述抗原结合本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种血吸虫阳性抗原，其特征在于，所述抗原选自：(a)氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1?24所示的多肽：(b)将SEQ?ID?NO：1?24氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基取代、缺失或添加而形成的具有免疫原性的衍生多肽；(c)与SEQ?ID?NO：1?24所示氨基酸序列的同源性≥90％的、具有免疫原性的多肽；或(d)具有免疫原性的多肽(a)?(c)的片段。
【技术特征摘要】
1.一种血吸虫阳性抗原，其特征在于，所述抗原选自 (a)氨基酸序列如SEQID NO :1_24所示的多肽 (b)将SEQID NO :1-24氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基取代、缺失或添加而形成的具有免疫原性的衍生多肽；(c)与SEQID NO :1-24所示氨基酸序列的同源性彡90%的、具有免疫原性的多肽；或 (d)具有免疫原性的多肽(a)-(c)的片段。2.如权利要求1所述的阳性抗原，其特征在于，所述抗原的氨基酸序列如SEQID NO:1-8所示。3.权利要求1所述阳性抗原的用途，其特征在于，所述抗原用于制备检测血吸虫的试剂或试剂盒。4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，包括一核苷酸序列，所述核苷酸序列选自下组 (a)编码如权利要求1所述阳性抗原的多核苷酸； (b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。5.如权利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码具有SEQID NO:l所示氨基酸序列的抗原。6.—种载体，其特征在于，该载体含有权利要求4所述的多核苷酸。7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求6所述的载体或染色体整合有权利要求4所述的多核苷酸。8.—种血吸虫阳性抗原的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤 (a)在适合表达的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞； (b)从培养物中分离...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘卫庆，徐新东，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：
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