一种具有穿膜功能的hMnSOD-R9及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种具有穿膜功能的hMnSOD-R9及其制备方法与应用，属于分子生物学与生物化学领域。通过设计引物进行PCR扩增得到引入R9的MnSOD的hMnSOD-R9基因片段，将该片段连接到pET15b构建表达质粒pET15b-hMnSOD-R9，再将该质粒转化大肠杆菌表达宿主Rosetta-gami得到表达菌株Rosetta-gami/pET15b-hMnSOD-R9。对该菌株进行诱导表达得到高效可溶的hMnSOD-R9，破碎表达菌体后直接对上清进行纯化，极大的简化生产工艺，降低了成本，解决了SOD工业化生产SOD原料的限制问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学与生物化学领域，涉及一种具有穿膜功能的hMnS0D-R9及其制备方法与应用。
技术介绍
超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)是生物在进化过程中形成的广泛存在于生物体内的有效清除活性氧的主要金属酶类之一，它在抗氧化防御中发挥最重要的作用。SOD能够平衡机体的氧自由基，从而避免当机体内超氧阴离子自由基浓度过高时引起的不良反应，在防辐射、抗衰老、消炎、抑制肿瘤和癌症、自身免疫治疗等方面显示出独特的功能，受到国内外学者和研究者的广泛关注，研究领域已涉及到化学、生物学、医学、食品科学和畜牧兽医学等多个学科。SOD根据其辅基部位结合的不同金属离子分为4类锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)，铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)，铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)和镍超氧化物歧化酶(N1-SOD)0 MnSOD主要存在于线粒体的基质中。线粒体是细胞的能量工厂，其氧化呼吸链的电子传递过程中是机体内自由基产生的最主要途径，所以Mn-SOD是清除02-的第一道防线。MnSOD基因的表达和调控对机体内自由基-自由基清除剂的平衡体系至关重要(Holle本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有穿膜功能的hMnSOD?R9，其特征在于：所述的hMnSOD?R9的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种具有穿膜功能的hMnS0D-R9，其特征在于所述的hMnS0D_R9的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。2.根据权利要求1所述的hMnS0D-R9，其特征在于编码所述的hMnS0D_R9的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。3.用于制备权利要求1所述的hMnS0D-R9的质粒pET15b_hMnS0D-R9，其特征在于所述的质粒pET15b-hMnS0D-R9由SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列与pET15b质粒构建而成。4.用于制备权利要求1所述的hMnS0D_R9的菌株Rosetta-gami/pET15b_hMnS0D-R9,其特征在于所述的菌株Rosetta-gami/pET15b_hMnS0D-R9通过将权利要求3所述的质粒pET15b-hMnS0D-R9 转化 Rosetta-gami 得到。5.权利要求1所述的hMnS0D-R9的制备方法，其特征在于包括如下步骤 (1)权利要求4所述的菌株Rosetta-gami/pET15b-hMnS0D-R9作为表达菌株，基于大肠杆菌系统进行诱导表达； (2)收集菌体，用裂解液重悬重悬菌体，冰浴中超声破碎至溶液澄清，收集上清，用N1-NTA树脂纯化得到hMnS0D-R9。6.根据权利要求5所述的hMnS0D-R9的制备方法，其特征在于 步骤(I)中所述的诱导表达为挑取Rosetta-gami/pET15b_hMnS0D-R9单菌落接种于5mL含200mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：王峰，张自德，黄璐圆，吴秋红，张光，李秀英，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：