一种长白山杜鹃花属植物菌根化苗的工厂化方法技术

本发明专利技术涉及一种植物繁殖领域，即一种长白山杜鹃花属植物菌根化苗的工厂化方法。其步骤如下：（1）取长白山杜鹃花属植物枝条处理后作为外植体备用。（2）茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基：基本培养基中附加激动素KT(0.03～0.010mg·L-1)、吲哚丁酸IBA(0.10～0.45mg·L-1)、萘乙酸NAA(0.06～0.13mg·L-1)、赤霉素GA3(1.40～2.60mg·L-1)、琼脂粉7.8g·L-1、添加蔗糖10.0g·L-1，调节pH值至5.6；光照周期9h·d-1、光照强度1000lx和温度(23±2)℃条件下培养。（3）组培苗的菌根化。（4）组培苗的栽培，扩繁，实现杜鹃花菌根化苗的工厂化生产。对杜鹃花属植物进行菌根化处理，成活率高，实现快速繁殖，最终实现长白山9种杜鹃花菌根化苗的工厂化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物繁殖领域，即。
技术介绍
在现有技术中，长白山杜胃$花属植物包括牛皮杜胃$ {Rhododendron chrysanthumPall.)、短果杜醇{Rhododendron brachycarpum D. Don)、照白杜醇{Rhododendronmicranthum Turcz.)、小叶杜匿$ {Rhododendron parvifolium Adams.)、大字杜匿${Rhododendron schlippenbachii Maxim.)、兴安杜匿$ {Rhododendron dauricum L.)、迎红杜匿$ {Rhododendron mucronulaturn Turcz.)、毛租杜匿$ {Rhododendron confertissimumNakai)和荀叶杜醇{Rhododendron redowskianum Maxim.)等共有9个种,均为吉林省重点保护植物，其中牛皮杜鹃和苞叶杜鹃为我国国家三级保护的珍贵稀有植物，短果杜鹃为长白山区珍贵稀有植物。其中，牛皮杜鹃、毛毡杜鹃、照白杜鹃和小叶杜鹃是常绿灌木，短果杜鹃为常绿小乔木，兴安杜鹃为半常绿灌木。牛皮杜鹃、苞叶杜鹃和毛毡杜鹃分布海拔达2500米高，属高山杜鹃。牛皮杜鹃、大字杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、迎红杜鹃和兴安杜鹃全株挥发油含量较高，为精油和药用植物。这9种杜鹃均可通过人工引种驯化为园林绿化植物，具有重要的社会、经济和生态价值。以上9种杜鹃对水土保持和维持生态平衡起重要作用，是杜鹃花育种的种质资源。但其在我国分布甚狭，仅在长白山有较大种群分布，其它地区仅为零星分布，由于人们乱采乱挖，野生资源遭到极大威胁。这9种杜鹃花种子细小，萌发率低，萌发后形成的小苗成活率极低；扦插繁殖需要大 量的野生杜鹃枝条，对野生资源破坏极大，且生根率和移栽成活率极低；而利用组织培养技术进行繁殖，具有年产试管苗量大，速度快等优点，但仍存在炼苗移栽成活率低、生长缓慢等问题，这就导致推广应用受到一定的限制。经过大量实验研究发现，杜鹃花根系没有根毛，吸收水分、大量元素、微量元素和有机物质等营养成分能力比具有根毛的根系小得多。但自然条件下，杜鹃花细根都有杜鹃花类EM(Eriocdimyochrriaz, EM)内生菌根真菌的寄生,从而克服了杜胃$由于根系不发达而造成的对营养物质吸收困难。对杜鹃花属植物菌根化处理有利于提高成活率。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述不足而提供一种对杜鹃花属植物菌根化处理，实现菌根化苗的快速繁殖，成活率高的长白山杜鹃花属植物菌根化苗的工厂化方法。本专利技术的技术解决方案是，其特征在于步骤如下 (I)取长白山杜鹃花属植物枝条，水培促其侧芽萌发生长，将鲜嫩的侧芽剪下处理，切割成I叶I段作为外植体备用。(2)培养基(茎段生根同时腋芽萌发生长培养基)87 mg · Γ1 (NH4)2SO4,375 mg · IZ1NH4NO3,180 mg · IZ1KNO3, 320 mg · IZ1CaCl2 · 2H20，245 mg · IZ1MgSO4 · 7H20,436 mg · IZ1KH2PO4 ；18. 4 mg · IZ1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · IZ1Na2 · EDTA · 2H20 ；12. 4mg · IZ1MnSO4 · 4H20，7. 2 mg · IZ1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3, 0. 32 mg · IZ1KI，0. 05mg .T1Na2MO4 ·2Η20 ;培养基中附加激动素 KT (O. 03 O. 010 mg .171)、吲哚丁酸 IBA (O. 10 O.45 mg · L O、蔡乙酸 NAA (O. 06 O. 13 mg · L O、赤霉素 GA3 (1. 40 2. 60 mg · L :)、琼脂粉7. 8 g · L—1、添加蔗糖10.0 g · L-1，调节pH值至5. 6 ;光照周期9 h · cf1、光照强度1000Ix和温度(23±2) °C条件下培养。(3)试管苗的菌根化将试管苗从培养瓶中取出，用清水洗净根部琼脂，再放入菌液中浸泡18 24 h ;所述菌液组分与配置为1000 mL培养基的成分及含量为KH2P04380mg, MgSO4 · 7H20149 mg,维生素 C26 mg,泛酸|丐67 11^,烟酸1.4 11^,蛋白胨3.0 g,葡萄糖16. 5 g ;将含有六个菌种接入液体基本培养基的三角锥形瓶中进行混合培养，得到液体菌种母液；再将液体菌种母液500 mL,红糖500 g溶解后，加水至50 L发酵7 10 d后即成菌液；六种主要杜鹃花类菌根真菌是从长白山9种野生杜鹃花科植物根部分离纯化获得， Phialocephala for tin i i, Pezi zi Ila eri cace, Oi di odendron mai us, Melini omycesvariabiHs, Cryptosporiopsis ercae，Acaulospora lacunosa。(4)菌根化苗的栽培把步骤(3)菌根化后的试管苗栽植到已用菌液灌透的基质中，基质为腐殖土、腐熟松针和蛭石，比例为3:2:1，覆盖透光性好的塑料薄膜保温保湿，开始温度控制在(25±2) °C, 15 d后温度控制在(20±2) °C,保持相对湿度在70% 75%之间，10 h · Cf1的自然光照；扩繁，实现杜鹃花菌根化苗的工厂化生产。所述的杜鹃花属植物为牛皮杜鹃，茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为培养基+ KT (O. 13 O. 1 4 mg *L_1) + IBA (O. 05 O. 08 mg *L_1) + GA3 (2. 70 2. 90 mg .171)。所述的杜鹃花属植物为短果杜鹃，茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+ KT (O. 09 O. 12 mg *L_1) + IBA (O. 03 O. 07 mg *L_1) + GA3 (2. 80 3. 00 mg .171)。所述的杜鹃花属植物为照白杜鹃，茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+ IAA (O. 20 O. 25 mg .1/1) + NAA (O. 02 O. 05 mg .171) + GA3 (2. 30 2. 60 mg .171)。所述的杜鹃花属植物为小叶杜鹃，茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+ KT (O. 08 O. 12 mg · L-1) + IBA (O. 15 O. 20 mg · L-1) + GA3 (2. 00 2. 30 mg · L-1) 所述的杜鹃花属植物为大字杜鹃，茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT (O. 07 O. 10 mg · L-1) + NAA (O. 01 O. 03 mg · L-1) + GA3 (2. 20 2. 50 mg · L-1)。所述的杜鹃花属植物为兴安杜鹃，茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+ NAA (O. 02 O. 04 mg · L O + GA3 (1. 00 1. 50 m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种长白山杜鹃花属植物菌根化苗的工厂化方法，其特征在于步骤如下：（1）取长白山杜鹃花属植物枝条，水培促其侧芽萌发生长，将鲜嫩的侧芽剪下处理，切割成1叶1段作为外植体备用；（2）培养基：87?mg·L?1(NH4)2SO4，375?mg·L?1NH4NO3，180?mg·L?1KNO3，320?mg·L?1CaCl2·2H2O，245?mg·L?1MgSO4·7H2O，436?mg·L?1KH2PO4；18.4?mg·L?1FeSO4·7H2O，24.9?mg·L?1Na2·EDTA·2H2O；12.4?mg·L?1MnSO4·4H2O，7.2?mg·L?1ZnSO4·7H2O，5.7?mg·L?1H3BO3，0.32?mg·L?1KI，0.05?mg·L?1Na2MO4·2H2O；培养基中附加激动素KT??0.03～0.010?mg·L?1、吲哚丁酸IBA??0.10～0.45?mg·L?1、萘乙酸NAA??0.06～0.13?mg·L?1、赤霉素GA3??1.40～2.60?mg·L?1、琼脂粉7.8?g·L?1、添加蔗糖10.0?g·L?1，调节pH值至5.6；光照周期9?h·d?1、光照强度1000?lx和温度23±2?℃条件下培养；（3）试管苗的菌根化：将试管苗从培养瓶中取出，用清水洗净根部琼脂，再放入菌液中浸泡18～24?h；所述菌液组分与配置为：1000?mL培养基的成分及含量为：KH2PO4380?mg，MgSO4·7H2O149?mg，维生素C26?mg，泛酸钙67?mg，烟酸1.4?mg，蛋白胨3.0?g，葡萄糖16.5?g；将含有六个菌种倒入液体基本培养基的三角锥形瓶中进行混合培养，得到液体菌种母液；再将液体菌种母液500?mL，红糖500?g溶解后，加水至50?L发酵7～10?d后即成菌液；六种杜鹃花类菌种是从长白山9种野生杜鹃花科植物根部分离纯化获得，分别为Phialocephala?fortinii，Pezizilla?ericace，Oidiodendron?maius，Meliniomyces?variabilis，Cryptosporiopsis?ercae，Acaulospora?lacunosa；（4）菌根化苗的栽培：把步骤（3）菌根化后的试管苗栽植到已用菌液灌透的基质中，基质为腐殖土、腐熟松针和蛭石，比例为3:2:1，覆盖透光性好的塑料薄膜保温保湿，开始温度控制在25±2?℃，15?d后温度控制在20±2?℃，保持相对湿度在70%～75%之间，10?h·d?1的自然光照；扩繁，实现杜鹃花菌根化苗的工厂化生产。...

【技术特征摘要】
1.一种长白山杜鹃花属植物菌根化苗的工厂化方法，其特征在于步骤如下(1)取长白山杜鹃花属植物枝条，水培促其侧芽萌发生长，将鲜嫩的侧芽剪下处理，切割成I叶I段作为外植体备用；(2)培养基87mg · T1(NH4)2SO4jSTS mg · IZ1NH4NO3,180 mg · IZ1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245 mg · L-1MgSO4 · 7H20，436 mg · L-1KH2PO4 ；18. 4 mg · L-1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · IZ1Na2 · EDTA · 2H20 ；12. 4 mg · IZ1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · IZ1ZnSO4 · 7H20, 5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05 mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ;培养基中附加激动素 KT 0. 03 O. 010 mg · L 1J引噪丁酸 IBA O. 10 O. 45 mg · L \蔡乙酸 NAA O. 06 O. 13 mg · L \ 赤霉素GA31. 40 2. 60 mg · L'琼脂粉7. 8 g · L'添加鹿糖10. O g · L-1,调节pH值至5.6 ;光照周期9 h · Cf1、光照强度1000 Ix和温度23±2 °C条件下培养；(3)试管苗的菌根化将试管苗从培养瓶中取出，用清水洗净根部琼脂，再放入菌液中浸泡18 24 h ;所述菌液组分与配置为1000 mL培养基的成分及含量为KH2P04380 mg, MgSO4 · 7H20149 mg,维生素 C26 mg,泛酸|丐 67 mg,烟酸1. 4 mg,蛋白胨 3.0 g,葡萄糖16. 5 g ;将含有六个菌种倒入液体基本培养基的三角锥形瓶中进行混合培养，得到液体菌种母液；再将液体菌种母液500 mL，红糖500 g溶解后，加水至50 L发酵7 10 d后即成菌液；六种杜鹃花类菌种是从长白山9种野生杜鹃花科植物根部分离纯化获得，分别 % Phialocephala fort ini i, Pezizi Ila eri cace, Oi di odendron maius, Meliniomyces vari abi Hs, Cryp tospori op si s ercae, Acaulospora lacunosa ；(4)菌根化苗的栽培把步骤(3)菌根化后的试管苗栽植到已用菌液灌透的基质中，基质为腐殖土、腐熟松针和蛭石，比例为3:2:1，覆盖透光性好的塑料薄膜保温保湿，开始温度控制在25±2 °C, 15 d后温度控制在20±2 °C,保持相对湿度在70% 75%之间，10 h .cf1 的自然光照；扩繁，实现杜鹃花菌根化苗的工厂化生产。2.按照权利要求1所述的长白山杜鹃花属植物菌根化苗的工厂化方法，其特征在于杜鹃花属...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾地周，杨丽娟，朱俊义，姜云天，徐洪伟，顾川岳，潘雨，禚玲玲，张学士，王秋爽，付航，倪伟佳，
申请(专利权)人：通化师范学院，
类型：发明
国别省市：