一种检测邻苯二甲酸二丁酯含量的ELISA方法技术

本发明专利技术提供了两种酶联免疫吸附法检测生物样品和非生物样品中邻苯二甲酸二丁酯（DBP）含量的方法。一种是人工抗原包被竞争抑制ELISA法测定DBP的含量，一种是半抗原包被竞争抑制ELISA法测定DBP的含量。两种方法都是利用DBP人工抗原DBAP-BSA免疫小鼠而制得DBP单克隆抗体，样品中DBP和包被抗原与DBP单克隆抗体竞争结合，再通过酶联二抗的显色反应和抑制率计算而得到DBP的含量。本发明专利技术可以一次处理大量样品，灵敏度高，方便快捷，稳定性好，成本低廉，特异性强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测邻苯二甲酸二丁酯含量的ELISA方法，属于生物

技术介绍
近年来在许多国家和地区，塑化剂对食品、环境的污染引起了人们强烈的担忧。邻苯二甲酸二丁酯(DBP)属于苯二甲酸酯类化合物，被普遍应用于塑料制品、胶水、油漆、指甲油、洗发水和沐浴液等数百种产品中。邻苯二甲酸二丁酯是半挥发性化合物，不与终产品共价结合，在生产和生活中，被不断地释放到大气、土壤和水环境中。环境中的邻苯二甲酸二丁酯又通过呼吸、饮食、皮肤接触等三种途径进入人体。因此，人类正面临着越来越高的邻苯邻苯二甲酸二丁酯暴露风险。有研究报告指出我国普通人群DBP日摄入量为12. 2ug/kg bw,高于世界平均水平。动物模型研究和流行病学调查发现邻苯二甲酸二丁酯可以引起雄性生殖发育的障碍。邻苯二甲酸酯还具有免疫毒性，能导致儿童产生哮喘、湿疹、鼻炎等持久性过敏症。此夕卜，邻苯二甲酸二丁酯还能能导致糖尿病、肥胖症等。因此，邻苯二甲酸二丁酯检测已成为食品安全、环境监测、毒理学研究等领域的重要工作。由于邻苯二甲酸二丁酯在水环境、生物体内的含量较低，常常在检测域以下，因此邻苯二甲酸二丁酯的含量分析是一件非常困难本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测邻苯二甲酸二丁酯含量的ELISA方法，其特征在于，利用DBP人工抗原DBAP?BSA免疫小鼠而制得DBP单克隆抗体，样品中DBP和包被抗原DBAP?BSA竞争结合DBP单克隆抗体，再通过酶联二抗的显色反应和抑制率计算，而得到DBP的含量。

【技术特征摘要】
1.一种检测邻苯二甲酸二丁酯含量的ELISA方法，其特征在于，利用DBP人工抗原DBAP-BSA免疫小鼠而制得DBP单克隆抗体，样品中DBP和包被抗原 DBAP-BSA竞争结合DBP单克隆抗体，再通过酶联二抗的显色反应和抑制率计算，而得到DBP的含量。2.根据权利要求1所述的ELISA方法，其特征在于，包括如下步骤1)DBP单克隆抗体的制备；2)抗体效价的测定将人工抗原DBAP-BSA于酶标板中包被、封闭，与不同稀释度的DBP单克隆抗体结合，后续加酶标二抗，显色，终止，用酶标仪测定492nm出的吸光度，吸光度接近1. O处抗体稀释度为单克隆抗体的工作浓度；3)标准抑制曲线的建立将人工抗原DBAP-BSA于酶标板中包被，封闭，不同浓度DBP标准溶液与包被抗原竞争结合DBP单克隆抗体，后续加酶标二抗，显色，终止，用酶标仪测定492nm处的吸光度，以抑制率为纵坐标，DBP浓度为横坐标，建立抑制率标准曲线；4)测定样品抑制率，通过抑制标准曲线确定样品中DBP含量将人工抗原DBAP-BSA于酶标板中包被，封闭，样品溶液与包被抗原竞争结合DBP单克隆抗体，后续加酶标二抗，显色，终止，用酶标仪测定492nm处的吸光度，计算出抑制率，通过抑制率标准曲线确定样品中DBP含量。3.根据权利要求2所述的ELISA方法，其特征在于，所述DBP单克隆抗体制备过程如下人工抗原DBAP-BSA免疫小鼠，取免疫小鼠脾细胞与瘤细胞融合，筛选出阳性杂交瘤细胞并克隆化；小鼠腹水法大量制备单克隆抗体；再通过硫酸铵沉淀法纯化DBP单克隆抗体。4.根据权利要求2或3所述的ELISA方法，其特征在于，将人工抗原DBAP-BSA于酶标板中包被的过程为用包被缓冲液将人工抗原DBAP-BSA稀释到O. 25 μ g/ml或O. 5 μ g/ml, 100 μ L/孔加入酶标板中，同时设置加有100 μ L包被...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明清，杨旭，曾强，魏晨曦，袁均林，丁书茂，
申请(专利权)人：华中师范大学，
类型：发明
国别省市：