一种以己醛含量判别甜玉米烫漂终点的方法技术

本发明专利技术提供了一种甜玉米烫漂终点的判别方法。具体步骤为：1)甜玉米粒液氮速冻后，与pH7.0的磷酸缓冲液1∶4(w/v)进行冰浴匀浆；2)取8mL匀浆于萃取瓶中，升温至60℃，并在此温度下，顶空固相微萃取20min；3)采用气相色谱质谱联用法检测挥发性成分，解析温度220℃，解析2min；4)在设定升温程序及分离色谱柱条件下，综合质谱图、标准样品的保留时间比对以及保留指数对己醛定性分析，再根据标准曲线进行定量分析。5)甜玉米中己醛含量低于4μg/g时，为烫漂终点。试验结果表明该方法具有准确率高、与速冻甜玉米贮藏期品质具有良好相关性等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种甜玉米中己醛生成量的測定方法，可用于甜玉米烫漂终点的判定。ニ
技术介绍
甜玉米是指乳熟期采收并用于食用的玉米，甜玉米在氨基酸、水溶性蛋白、维生素及微量矿物质元素等营养成分上高于老玉米，并且甜玉米具有适ロ性好，香甜可ロ，易于消化吸收等特点而受到消费者欢迎。但由于甜玉米采收时处于玉米生命活动的旺盛期，采收后品质下降很快，速冻为甜玉米最常用的加工方法。但是在低温下，酶仍保持一定的活性，尤其是一些參与脂肪氧化 的酶使得速冻玉米易出现氧化味、陈腐味等不良风味。因此用于速冻或其它加工前，甜玉米需要经过烫漂灭酶。甜玉米的烫漂一般以过氧化物酶的活性为指标来判断終点。过氧化物酶为最耐热的酶，基于节约能源的角度，很多专家提出以与风味直接相关的关键酶，脂氧合酶的失活为标志。脂氧合酶活性的測定一般采用分光光度计法，如专利“一种测定玉米种胚脂肪氧化酶活性的方法”(申请号201110096159. 4)，此种方法基于脂氧合酶以亚油酸为底物时，产物羟过氧化物(在234nm有特定吸收)的生成速率与酶活力之间的线性关系。这种方法在用于新鮮玉米胚中脂氧合酶活性时具有良好的准确性与重现性。但在我们的測定中发现，经过一定程度烫漂后的甜玉米整粒，由于出现淀粉糊化以及蛋白变性等诸多变化，提取得到的酶粗提液的体系与新鲜样品存在很大的不同，最終使得234nm的吸光值在加入酶液后的升高趋势与鲜样的测定值不具有可比性。从另一角度，作为脂氧合酶启动的脂肪氧化反应的代表性产物，已多有方报道己醛为脂氧合酶活性的标志性成分，如江巨鳌和田森林2004年发表论文研究己醛生成量与大豆种子脂氧合酶基因表达缺失情况的评价。但就甜玉米而言，国外虽有专家提出脂氧合酶的失活作为甜玉米烫漂程度的标志，但一直未有相关试验数据发表，并且未建立脂氧合酶活力与烫漂终点的对应关系。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供ー种判断甜玉米烫漂终点的方法，该方法以己醛的含量为标o本专利技术所提供的己醛含量的測定方法，包括如下步骤I)己醛的生成与固相微萃取甜玉米按照玉米粒与磷酸缓冲液的质量与体积比I 4进行匀浆，取适量匀浆于顶空萃取瓶中，将萃取瓶及玉米浆升温至60°C，并在此温度顶空萃取20min ;萃取结束后，将萃取头取出，气相色谱进样。2)气相色谱与质谱联机測定进样ロ温度250°C，固相微萃取解析时间2min ;离子源温度230°C，MS四极杆温度为150°C，质量扫描范围30-450m/z，扫描速率为5. 27scan/S。色谱柱为HP-1nnowax毛细管色谱柱(30mX ID 0. 25mmX0. 25 ii m)。升温程序50°C保留2min，然后4°C /min升温至220°C。综合离子扫描质谱图、保留指数、标准样品的保留时间，对己醛进行定性；3)建立己醛定量标准曲线确称取5mg己醛标准品，用色谱纯甲醇溶解并定容至IOmL,混匀，制成浓度为500 u g/mL的标准液。再分别取0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5mL标准液置于5mL容量瓶中，用稀释溶剂定容并混匀，制成浓度为10、20、30、40、50ii g/mL的系列标准液，按照与甜玉米中己醛测定相同的固相微萃取及气相色谱质谱联机条件測定，以进样量为横坐标，相应的吸收峰面积为纵坐标，进行线性回归分析。4)通过标准定量曲线计算测得己醛的含量。己醛含量低于4 i! g/g甜玉米时，为烫漂終点。本专利技术通过己醛的含量来作为判断甜玉米烫漂终点，这种方法相对于目前现有的方法，具有以下优点一、本专利技术确定了以己醛作为甜玉米中脂氧合酶启动的脂肪氧化反应的标志成分。虽然已有报道将己醛作为大豆豆腥味的代表成分，但尚未建立甜玉米风味成分与酶促脂肪氧化产物之间的关系。如图1所示，在新鮮玉米浆中加入亚油酸后，己醛、己醇、庚醛、庚醇等几种成分含量増加，其中己醛的生成量增加为未添加的3. 22倍，高于其他成分的增长幅度，是玉米中酶促反应产物的代表成分。ニ、本专利技术建立了甜玉米中己醛生成量測定的固相微萃取条件。此条件既需要充分体现酶促反应过程，体现脂氧合酶活力的作用，又需要满足固相微萃取对目标成分的富集。虽然固相微萃取及保持酶活力的温度、时间等參数调整均为公知技术，但本专利技术将二者结合，选择了以磷酸缓冲液(PH7.0)与甜玉米按照特定质量比匀浆，并设定在60°C下萃取20min，測定结果很好体现了烫漂条件对酶的作用效果。如图2所示，烫漂6min的甜玉米，己醛的含量仅为未烫漂样品的8. 56%，而烫漂IOmin的样品则未检测到己醛。三、本专利技术确定了以己醛含量作为甜玉米烫漂终点的判别方法，弥补了紫外分光光度法测定酶促反应产物缺乏针对性的缺陷，提高了判别的准确性。国外有诸多报道认为冷冻甜玉米风味劣变的关键酶为脂氧合酶，并建议将脂氧合酶活力作为烫漂标志。而测定脂氧合酶的常用方法——紫外分光光度法通过特定波长234nm下吸光值的上升作为存在酶活的标志，进而通过残余酶活的方法来判断是否到达烫漂終点，这种方法缺乏足够的针对性，尤其对于烫漂后的甜玉米，由于酶活的降低与玉米体系的改变，很难判断吸光值的上升是否由酶的活力造成。如图3所示，在甜玉米烫漂0min-6min内，测得的酶活呈下降趋势，但随烫漂时间的延长，酶活又有所増加。为证明这种上升趋势与酶的活力无关，我们将玉米匀浆煮沸，使酶充分灭活，在亚油酸反应体系中，加入酶液(粗提液)后，仍出现吸光值的上升趋势(图4)。因此可以判定此吸光值上升与酶活力无关。四、本专利技术建立了固相微萃取——气相色谱质谱联机对己醛含量測定的定性定量方法，通过构建己醛标准样品的磷酸缓冲液测定体系，得回归方程为Y = 80787X-155764 (R2=0. 9942)(见图5)，2 500 ii g/mL范围内测定峰面积和己醛浓度呈良好的线性关系。五、确定了在本专利技术条件下，己醛含量低于g/g即可认为已达到烫漂终点。经贮藏试验证明，此方法与甜玉米烫漂程度及贮藏过程中品质变化情况有良好的相关性(表I)。四附图说明图1玉米浆萃取体系中加入外源亚油酸后挥发性成分的变化情况图2甜玉米蒸汽烫漂0min、6min、IOmin后，测得的挥发性成分色谱3分光光度计法测得不同烫漂时间的甜玉米脂氧合酶酶活图4不同脂氧合酶活力样品采用分光光度计法测得的吸光值变化图5己醛定量标准曲线图6保留时间为10. 990min色谱峰的离子扫描图谱五具体实施方式 下面的实施例可以更好地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1、实验仪器与试剂I)实验仪器Agilent 7890 GC-8963 MS 联用仪(美国 Agilent 公司)可加热磁力搅拌器(PC-420，北京康林科技有限公司)CAR/PDMS/DVB 萃取头(SupeIco，USA)2)实验试剂己醛标准品(彡98 %，美国Sigma公司)色谱纯甲醇(美国天地公司)C6-C2tl系列正构烧经标准品(美国Sigma公司)2、实验设计在本实施例中，采用将玉米与缓冲液匀浆的方法使酶与底物充分接触并反应；采用购买的己醛參照样品，结合保留指数的计算以及Agilent 7890GC-8963MS联用仪对检测得到的己醛进行定性分析；建立己醛测定的标准曲线，进行定量分析；对冷冻贮藏7个月的不同烫漂程度的甜玉米的风味进行了感本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甜玉米烫漂终点的判别方法，其特征在于以甜玉米匀浆后生成的挥发性己醛含量作为判别标准，己醛的生成、富集、定性定量方法如下：1)烫漂后甜玉米的匀浆方法为：取完整玉米粒与已预冷的磷酸缓冲液(4℃，pH?7.0)按照1∶4(w/v)进行冰浴匀浆；2)取上述玉米浆8mL于15mL萃取瓶，插入CAR/PDMS/DVB固相微萃取头，萃取纤维距离液面0.5cm，升温至60℃并在此温度下萃取20min；3)气相色谱质谱联机的测定条件为：进样口温度250℃，固相微萃取解析时间2min；离子源温度230℃，MS四极杆温度150℃，质量扫描范围30?450m/z，扫描速率为5.27scan/s。色谱柱为HP?Innowax毛细管色谱柱(30m×ID?0.25mm×0.25μm)，升温程序：50℃保留2min，然后以4℃/min升温至220℃。4)综合离子扫描质谱图、保留指数、标准样品的保留时间，对己醛进行定性；5)称取5.0mg己醛标准样品溶于10mL色谱纯甲醇，再分别取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL上述己醛甲醇溶液置于5mL容量瓶中，用pH7.0磷酸缓冲液定容并混匀，制成浓度为10、20、30、40、50μg/mL的系列己醛浓度标准液。按照上述2、3步骤的固相微萃取及色谱条件测定，建立己醛定量回归方程为Y＝80787?X?155764(R2＝0.9942)，在2～500μg/mL浓度范围内峰面积和样品浓度呈良好的线性关系。...

【技术特征摘要】
1.一种甜玉米烫漂终点的判别方法，其特征在于以甜玉米匀浆后生成的挥发性己醛含量作为判别标准，己醛的生成、富集、定性定量方法如下 1)烫漂后甜玉米的匀浆方法为取完整玉米粒与已预冷的磷酸缓冲液(4°c，pH7.0)按照1: 4(w/v)进行冰浴匀浆； 2)取上述玉米浆8mL于15mL萃取瓶，插入CAR/PDMS/DVB固相微萃取头，萃取纤维距离液面O. 5cm,升温至60°C并在此温度下萃取20min ； 3)气相色谱质谱联机的测定条件为进样口温度250°C，固相微萃取解析时间2min；离子源温度230°C，MS四极杆温度150°C，质量扫描范围30-450m/z，扫描速率为5. 27scan/S。色谱柱为HP-1nnowax毛细管色谱柱(30mX ID O. 25mmX O. 25 μ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛丽影，刘夫国，李大婧，刘春泉，刘春菊，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：