本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及南蛇藤茎乙酸乙酯提取物在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用，特别是对类风湿关节炎滑膜细胞侵袭具有抑制作用，对大鼠胶原诱导型关节炎（collagen-inducedarthritis,CIA）有治疗作用。本发明专利技术南蛇藤乙酸乙酯提取物为纯中药制剂，避免了传统抗风湿药物的毒副作用，并且高剂量组与甲氨蝶呤具有相似的抗RA疗效，有利于进一步明确南蛇藤有效成分抗RA的药效物质基础及机理，为进一步开发和利用南蛇藤有效成分治疗RA提供研究基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药
，具体涉及南蛇藤茎乙酸乙酯提取物在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用，特别是对类风湿关节炎滑膜细胞侵袭具有抑制作用，对大鼠胶原诱导型关节炎有治疗作用。
技术介绍
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种严重危害人类健康的慢性自身免疫性疾病，基本病理改变为滑膜的增殖和侵袭，形成侵袭性血管翳，导致骨和软骨破坏。若不积极有效地治疗，70%的病人在起病两年内发生骨质破坏，最终导致关节畸形。因此，对RA进行研究，寻找有效抗RA药物，降低致残率极为必要。目前RA病因及发病机理不完 全明了，可能是环境、遗传、免疫等多因素作用的结果。现代医学对本病得治疗主要包括传统的改善病情抗风湿药物(DMARDs)以及近年来以B细胞、T细胞及促炎症因子等为靶点的生物制剂，但由于传统DMARDs对机体具有免疫抑制作用，患者往往难以耐受其不良反应，有至少30%的患者对传统DMARDs和生物制剂治疗耐受，因此急需寻找具有多重作用机制的高效低毒的抗RA药物。滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocyte, FLS),作为复杂细胞调控网络中的一员，是RA的关键效应细胞，FLS侵袭在RA的发生、发展中起重要作用。研究发现，FLS侵袭不仅是导致RA关节破坏的主要原因，也是RA关节炎症向远处关节蔓延的原因。鉴于FLS侵袭的机制尚未明确，缺乏有效的干预药物，因此，有必要进一步探讨FLS侵袭的调控机制并寻找有效的干预药物。传统中医理论认为，RA (痹症)主要因“风寒湿三气杂至”所致，治疗上应以祛风除湿、散寒通络为主。传统中药南蛇藤、雷公藤具有祛风除湿、活血通络、消肿止痛等功效，临床治疗RA的中药方剂中，有不少含有南蛇藤成分。南蛇藤分布资源极其丰富，在我国用于临床抗风湿治疗已有几百年历史，但以往由于缺乏对其药效物质基础及机理的研究，影响了它的开发与利用，因此，研究南蛇藤中活性成分治疗RA的具体机制具有重要的意义。该专利申请中提到的南蛇藤茎乙酸乙酯提取物，是基于公开号为CN101120960A的专利中公开的制备方法得到。既往研究发现国内他人公开号为CN1823870A的专利制备的南蛇藤的根及藤茎中的提取物，证实其对佐剂诱导性关节炎大鼠具有抗炎、镇痛、免疫抑制作用，但与我们的制备工艺不同，且南蛇藤茎的乙酸乙酯提取物对于RA-FLS侵袭的作用还未有报道。基于上述目的，本研究旨在观察南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(COE)对RA-FLS侵袭的作用和机制，以及其在大鼠胶原诱导型关节炎(collagen-1nduced arthritis, CIA)治疗中的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种南蛇藤茎的乙酸乙酯提取物的新用途。本专利技术研究发现南蛇藤茎的乙酸乙酯提取物对类风湿关节炎滑膜细胞侵袭的抑制作用及在胶原诱导型关节炎大鼠的治疗中的应用。因此本专利技术公开了制备治疗类风湿关节炎药物中的应用。所述类风湿关节炎是由滑膜侵袭引起的或者是胶原诱导型关节炎。本研究通过观察RA-FLS侵袭能力的变化来验证COE对RA-FLS侵袭的抑制作用。通过体外实验，研究不同浓度的COE对炎症因子IL-1 β介导的RA-FLS侵袭的抑制作用，结果发现，非细胞毒浓度的COE (5，10，20yg/mL)预处理24小时，RA-FLS迁徙和侵袭能力显著下降；非细胞毒浓度的COE (5，10，20 μ g/mL)可呈浓度依赖性的抑制MMP_9mRNA、蛋白、分泌水平及酶活性，而对MMP-2表达无影响，RNA干扰阻断MMP-9表达可抑制IL-1 β诱导的FLS侵袭；进一步研究发现，COE通过阻断NF- K B与ΜΜΡ-9启动子的结合以及I κ B α的磷酸化和核转位，进而抑制ΜΜΡ-9的转录活性。另外我们进行了整体动物实验，5-6周龄的雌性Wistar大鼠，右后足趾垫皮内免疫 CII及3周后加强免疫建立CIA大鼠模型，初次免疫后20天，随机分为如下实验组(I) CIA对照组；(2) COE (25mg/kg) +CIA组；(3) COE (50mg/kg) +CIA组；(4)正常对照组;(5)MTX(2mg/g/ M)+CIA组，每组有8只大鼠，COE从第21天开始灌胃每天一次，MTX从第21天开始每周腹腔注射一次，CIA组和正常对照组给予同等剂量的生理盐水处理。连续治疗3周结果显示，与空白组对比，25mg/kg与50mg/kg COE均能显著改善CIA大鼠关节炎症与关节破坏程度，50mg/kg COE疗效与MTX (2mg/kg)相似。本专利技术证实了纯中药制剂COE在体外具有显著的抗RA-FLS侵袭的作用，并且对于CIA大鼠滑膜炎症与关节破坏也具有明显的抑制作用，避免了传统抗风湿药物的毒副作用，并且高剂量组与甲氨蝶呤具有相似的抗RA疗效，有利于进一步明确南蛇藤有效成分抗RA的药效物质基础及机理，为进一步开发和利用南蛇藤有效成分治疗RA提供研究基础。附图说明图1COE对IL-1 β诱导的RA-FLS迁徙与侵袭的影响。与正常对照组相比差异有统计学意义，*ρ〈0· 05广Ρ〈0. 01，与IL-1 β组相比差异有统计学意义广Ρ〈0. 05， 〈()· 01。图2C0E通过抑制ΜΜΡ-9活性进而抑制IL-1 β诱导的RA-FLS迁徙与侵袭。与正常对照组相比差异有统计学意义，呷〈O. 01，与IL-1 β组相比差异有统计学意义， Ρ〈0· 05，**Ρ<0. 01。图3C0E通过抑制IL-1 β刺激的NF-κ B活性下调ΜΜΡ-9转录活性。与正常对照组相比差异有统计学意义，乍〈O. 05广Ρ〈0. 01，与IL-1 β组相比差异有统计学意义， Ρ〈0· 05，**Ρ<0. 01。图4C0E抑制NF- κ B DNA与ΜΜΡ-9启动子结合活性及NF- κ B信号通路的转导。图5C0E抑制大鼠CIA关节破坏及临床症状。其中A :正常对照组；B :CIA对照组；C C0E(50mg/kg) +CIA 组；D C0E (25mg/kg) +CIA 组；E MTX (2mg/kg/ 周)+CIA 组。*Ρ〈0· 05versus CIA+ 空白对照组，与CIA+C0E (25mg/kg)组相比差异有统计学意义Λ P〈0. 05。图6C0E抑制大鼠CIA关节滑膜炎症。其中A :正常对照组；B :CIA对照组；C :COE (25mg/kg) +CIA 组；D C0E (50mg/kg) +CIA 组；E MTX (2mg/kg/ 周)+CIA 组。与 CIA 空白对照组相比差异有统计学意义广P〈0. 05，与CIA+C0E(25mg/kg)组相比差异有统计学意义，fΡ〈0·05。具体实施方式实施例1 :C0E对RA-FLS侵袭的抑制作用与机制1.材料与方法1.1 药物南蛇藤购自广州致信药业有限公司，经中国药科大学中药资源研究室秦民坚教授鉴定为卫矛科南蛇藤属植物南蛇藤的藤茎。将南蛇藤茎切断、粉碎成粉，烘干(15kg)，用95%乙醇(150L)提取3h，重复3次，合并提取液，回收乙醇，浸膏(900g)加水分散后，石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯层，水洗涤3次，减压浓缩，真空冻干，得南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(C本文档来自技高网...
【技术保护点】
南蛇藤茎的乙酸乙酯提取物在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.南蛇藤茎的乙酸乙酯提取物在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘延庆，李国青，钱亚云，张华，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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