草鱼肿瘤坏死因子alpha的竞争抑制酶联免疫检测方法技术

本发明专利技术涉及草鱼肿瘤坏死因子alpha的竞争抑制酶联免疫检测方法，包括如下步骤：步骤1：确定包被抗原的浓度和多克隆抗体的最适稀释倍数；步骤2：建立竞争抑制酶联免疫检测方法，包被草鱼肿瘤坏死因子alpha蛋白的酶标板得到固定于酶标板上的抗原；将酶标抗体与抗原混合液混合后与固定于酶标板上的抗原竞争结合；洗涤酶标板以及对底物显色；对酶标板的孔进行读数得到每个孔的吸光值，根据读取的吸光值分别计算标准品抗原和待测样品的抑制率从而根据该抑制率计算待测样品的浓度。本发明专利技术的有益效果是：为检测草鱼中肿瘤坏死因子alpha的蛋白表达水平提供了快速高效的检测手段，该法稳定可靠，且成本较低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测
，具体涉及酶联免疫检测(ELISA)生物

技术介绍
肿瘤坏死因子alpha (tumor necrosis factor-alpha, TNF-a )是一种重要的细胞因子。早在30多年前，Carswell等人发现了一种存在于血清中，能抑制和杀伤某些肿瘤细胞，并使体内肿瘤发生出血坏死的蛋白物质，被命名为肿瘤坏死因子(tumor necrosisfactor, TNF)。研究发现,肿瘤坏死因子alpha参与和调控机体的免疫功能和炎症反应,发挥促进细胞生长、分化、凋亡等重要作用。自从牙鲆中克隆出第一个肿瘤坏死因子alpha基因的全长cDNA序列开始，肿瘤坏死因子alpha在鱼类中的研究开始受到重视，研究表明鱼类肿瘤坏死因子alpha表现出极大的功能差异说明其功能具有种属特异性，因此有必要对草鱼肿瘤坏死因子alpha在草鱼中的功能检测和应用进行研究。草鱼(Ctenopharyngodon idellus)属鲤形目鲤科雅罗鱼亚科草鱼属，英文名Grass carp，是中国淡水养殖的四大家鱼之一，具有重要的经济价值。但草鱼抗病力和成活率较低，易患出血病、烂本文档来自技高网...

【技术保护点】
草鱼肿瘤坏死因子alpha的竞争抑制酶联免疫检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：确定包被抗原的浓度和多克隆抗体的最适稀释倍数；步骤2：建立竞争抑制酶联免疫检测方法，具体过程包括如下步骤：步骤21：包被草鱼肿瘤坏死因子alpha蛋白的酶标板得到固定于酶标板上的抗原；步骤22：封闭去除酶标板上没有包被上草鱼肿瘤坏死因子alpha蛋白的部位；步骤23：制备酶标抗体与抗原混合液；步骤24：将酶标抗体与抗原混合液混合后与固定于酶标板上的抗原竞争结合；步骤25：洗涤酶标板以及对底物显色；步骤26：对酶标板的孔进行读数得到每个孔的吸光值（OD），根据读取的吸光值分别计算标准品抗原和待测样品的抑制率从...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：周红，陈丹燕，张安英，
申请(专利权)人：电子科技大学，
类型：发明
国别省市：