一种制备苹果树腐烂病菌转化子及GFP标记菌株的方法技术

本发明专利技术的目的在于提供一种苹果树腐烂病菌转化子及其制备方法。该方法将含有二元载体的根癌农杆菌与腐烂病菌的分生孢子悬浮液混合后共培养，用抗生素筛选，获得转化子。该方法以苹果树腐烂病菌的分生孢子为受体，以根癌农杆菌为介体，克服了苹果树腐烂病菌原生质体制备困难，且聚乙二醇(PEG)介导的转化效率低等原因导致的腐烂病菌遗传转化困难的问题。该方法的转化效率可达1/103个分生孢子。本发明专利技术同时提供了一种苹果树腐烂病菌绿色荧光蛋白(GFP)标记菌株及其制备方法，该方法获得的转化子，表达强的绿色荧光蛋白的效率可达96.7%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物基因工程
，具体涉及一种苹果树腐烂病菌转化子及其制备方法，同时还提供一种苹果树腐烂病菌GFP标记菌株及其制备方法。
技术介绍
黑腐皮壳菌(Valsa ceratosperma)引起的苹果树腐烂病,是对苹果产业威胁最大的一种毁灭性病害，该病在我国苹果产区发生普遍，可造成果树主干及整树死亡，甚至毁园(陈策，1987 ;2009)。自1916年苹果树腐烂病在辽宁省南部地区发现以来，该病已在我国有过几次大流行，造成了严重的产量和经济损失(陈策等，1980 ;2009)。随着我国苹果种植结构和栽培制度的调整，腐烂病已成为限制我国苹果产业发展的主要因子。2008年，国家苹果产业技术体系调查显示，全国范围内苹果树腐烂病的总体发生率为52. 7%，部分地区发病率高达85%以上(曹克强等，2009)。2011年，山东烟台苹果产区腐烂病再次严重发生，本课题 组调查发现，旺盛结果期的苹果树具有新病疤的病株率为68. 20%，死株率为2. 76% (王彩霞等，2012)。针对苹果树腐烂病造成的严重危害及防治困难等问题，引起了国内外相关科研工作者及多国政府部门的高度重视，该病现在仍本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备苹果树腐烂病菌转化子的方法，其特征在于，包括以下步骤：A.制备苹果树腐烂病菌分生孢子：（1）将苹果树腐烂病菌接种于PDA培养基上，活化培养3天；（2）将活化培养的腐烂病菌打取菌饼接种于含有大麦粒的PDA培养基上，25℃恒温培养20?30天，至橘黄色分生孢子角溢出；B.培养农杆菌：（1）将质粒pBIG3C转入农杆菌中；（2）取步骤B（1）中的农杆菌单菌落接种于含有卡那霉素、利福平和链霉素的LB液体培养基中，28℃震荡培养1天；（3）取步骤B（2）中的农杆菌菌液于含卡那霉素的基本培养基中，28℃震荡培养2天，测量菌液的OD600值；（4）用含有乙酰丁香酮和2?（N?吗啉基）乙磺酸钠的IM培...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王彩霞，李保华，王海艳，李桂舫，董向丽，张清明，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：