一种用中低压制备柱分离决明子蒽醌成分的方法技术

本发明专利技术公开了一种用中低压制备柱分离决明子蒽醌成分的方法，其步骤：A.将干燥后的决明子种子粉碎，装入三角瓶，置入超声仪中超声，再将超声后的物质过滤，合并过滤液，回收过滤液中的乙醇，得到干浸膏；B.将乙醇提取决明子的干浸膏倒入三角瓶，用乙酸乙酯超声萃取，再将超声后的物质过滤回收，合并过滤液，回收过滤液中的乙酸乙酯；C.将萃取液用硅胶拌匀，蒸干至无乙酸乙酯气味，得到6个粗晶；D.将中低压制备色谱上串联的硅胶柱子换成C18柱、将6个粗晶用甲醇溶解，注入C18柱中，用55%甲醇-水洗脱，再以TCL检识辅助检测，得到6个单晶。方法易行，提供简便，工艺先进，极大地加快分离速度，极大地减少了分离成本，纯度可以达到95%以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及从药用植物中提取分离蒽醌类成分的
，更具体涉及一种提取分离决明子蒽醌活性成分的方法，这些活性成分有降血脂、抗动脉粥样硬化、降压、抑菌、增强机体免疫力和抗衰老作用，能广泛用于医药卫生行业。
技术介绍
决明子为豆科植物决明Cassia obtusifola L.或小决明C. tora L.的干燥成熟种子，具有清肝明目、润肠通便之功效，是国家卫生部公布的69种药食同源的物种之一。 现代药理学研究表明决明子具有较好的降血脂、抗动脉粥样硬化作用，还具有较好降压、 抑菌、增强机体免疫力和抗衰老等多方面作用。决明子主要含有蒽醌类化合物。中低压(O.Γ5Μ bar)制备色谱是目前先进的制备化合物单体的色谱技术，与高速逆流色谱(HSCCC)及高压制备色谱(HPLC)相比，中低压色谱更有洗脱溶剂选择范围大，分离样品的量大，分离单体的量在g级以上，而HSCCC和HPLC制备色谱分离的量在mg级。另外，运行成本低，仪器要求配置低，而且用戶可以自己裝柱；还可使用预装住，利用薄层色谱 (TLC)可以快速的建立分离方法，在发达国家，中低压制备色谱是实验室样品分离制备的主流方法，已经基本取代常压玻璃柱分离。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供了， 方法易行，提供简便，工艺先进，极大地加快分离速度，极大地减少了分离成本，分离得到的蒽醌类的成分，纯度可以达到95%以上，不仅能用作标准品，还能提高医药产品的附加值。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术措施，其步骤是共分为4步，第一步为提取乙醇浸膏，第二步用乙酸乙酯萃取乙醇浸膏，第三步为将硅胶柱串联到中低压制备色谱，对决明子浸膏粗分，第四步将C18柱串联到中低压制备色谱，对决明子的粗分物进行精分。而得到高纯度的蒽醌化合物系列，如决明子内酯-9-0-β -葡萄糖苷、橙黄决明素、决明素、美决明素、芦荟大黄素、大黄酚。，其步骤是Α、将干燥后的决明子种子粉碎后过35-45目筛，装入三角瓶，加入量为三角瓶容量的1/5，倒入95%的乙醇(乙醇水=95 :5)，乙醇倒入量为药材重量的5 10倍。置入超声仪中超声3(T50min，再将超声后的物质过滤，继续用95%的乙醇超声3(T50min，再将超声后的物质过滤，重复本步骤3飞次，合并这3飞次的过滤液，回收过滤液中的乙醇，得到用乙醇提取决明子的干浸膏。B、将乙醇提取决明子的干浸膏倒入三角瓶，用3-5倍体积的乙酸乙酯超声萃取 7 15min，再将萃取后的物质过滤，继续用3_5倍的乙酸乙酯超声萃取7 15min，再将超声后的物质过滤，重复本步骤3飞次，合并这3飞次的过滤液，回收过滤液中的乙酸乙酯，一直回收到滤液中的乙酸乙酯与浸膏成1:1的体积的萃取液(回收后的萃取液不成膏状，成液状即可)，其目的是去掉部分乙醇浸膏中的杂质，也利于下一步拌匀在硅胶中时，蒸干溶剂。C、将萃取液用3倍量的400-500目娃胶拌勻，蒸干至无乙酸乙酯气味(称样品娃胶)，取400ml和1500mL Flash柱各一个，400ml的柱装样品硅胶，1500ml的柱仅装硅胶作为分离柱。二根柱都干法上样；分别用石油醚洗脱至柱平衡，再将二根柱串联，串联后的柱子接到中低压制备型色谱仪上，洗脱溶剂分为A和B，A为石油醚，B为乙酸乙酯丙酮=8:1， 洗脱溶剂的比例为B为2%，4%，8%的比例洗脱(2%即石油醚B=49:1)，在中低压色谱柱的荧屏监控图下收集流份，按监控图出现的谱峰收集，再以TCL检识辅助，取TCL检测紫色斑点中Rf值一致的流份合并，收干流分中的溶剂后，得到6个粗晶，经用薄板层析及标准品对照确定为决明子内酯-9-0-β -葡萄糖苷、橙黄决明素、决明素、美决明素、芦荟大黄素、大黄酚。所述的石油醚为无色透明液体，有煤油气味。主要为戊烷和己烷的混合物。不溶于水，溶于无水乙醇、苯、氯仿、油类等多数有机溶剂。易燃易爆，与氧化剂可强烈反应。主要用作溶剂和油脂处理。通常用钼重整抽余油或直馏汽油经分馏、加氢或其他方法制得。所述的中低压色谱与高压色谱和常压色谱相比，其优势为中低压色谱更有洗脱溶剂选择范围大，分离样品的量大，而高压色谱分离的样品量少，对溶剂的选择范围非常窄，对仪器的条件要求高，成本也高，传统的常压耗时间长，分离的效果差。D、将中低压制备色谱上串联的二根硅胶柱子换成C18柱、将决明子内酯-9-0-β-葡萄糖苷、橙黄决明素、决明素、美决明素、芦荟大黄素、大黄酚的粗晶用甲醇溶解，注入C18柱中，用55%甲醇冰=55:45甲醇-水洗脱，再以TCL检识辅助检测，得到六个单晶，用液相色谱检测六个化合物的纯度为95-99%。ODS柱是一种常用的反相色谱柱，也叫C18柱；由于它是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应用的最为广泛。ODS柱是十八烷基硅烷键合硅胶填料(Octadecylsilyl，简 称 0DS)。这种填料在反相色谱中发挥本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果本专利技术与现有决明子分离技术相比，分离时间只有以往的1/10都不到，产品可以根据分离柱的多少及柱子成本分为多个等级。可以在极短的时间内得到多个有效成分，而且纯度高，是传统的方法无法比拟的。本方法的建立可以使得一些在短期内需要高纯度化合物及标准品，而市面又无法买到的人尽快得到样品。从而加快研究进展。具体实施方式，其步骤是A、将干燥后的IKg决明子种子粉碎后过35或38或40或42或45目筛，装入三角瓶，加入量为三角瓶容量的1/5，倒入95%的乙醇(乙醇水=95 :5)，乙醇倒入量为药材重量的5或6或7或8或9或10倍。置入超声仪中超声30或35或59或42或46或50min，再将超声后的物质过滤，继续用95%的乙醇超声30或35或38或44或48或50min，再将超声后的物质过滤，重复本步骤3或4或5次，合并这3飞次的过滤液，回收过滤液中的乙醇，得到用乙醇提取决明子的干浸膏122g，得率为12. 2%。B、将乙醇提取决明子的干浸膏倒入三角瓶，用3或4或5倍体积的乙酸乙酯超声萃取7或9或11或13或15min，再将萃取后的物质过滤，继续用3飞倍的乙酸乙酯超声萃取7或8或10或12或14或15min，再将超声后的物质过滤，重复本步骤3或4或5次，合并这3或4或5次的过滤液，回收过滤液中的乙酸乙酯，一直回收到滤液中的乙酸乙酯与浸膏成1:1的体积，乙酸乙酯萃取浸膏为42. 7g，得率为35%。C、萃取液用其3倍量的400或450或480或500目硅胶拌匀，蒸干至无乙酸乙酯气味(称样品硅胶)，取400ml和1500mL Flash柱各一个，400ml的柱装样品硅胶，1500ml的柱仅装硅胶作为分离柱。二根柱都干法上样；分别用石油醚洗脱至柱平衡，再将二根柱串联， 串联后的柱子接到中低压制备型色谱仪上，洗脱溶剂分为A和B，A为石油醚，B为乙酸乙酯 丙酮=8:1，洗脱溶剂的比例为=B为2%，4%，8%的比例洗脱(2%即石油醚B=49:1 )，在中低压色谱柱的荧屏监控图下收集流份，按监控图出现的谱峰收集，再以TCL检识辅助，取TCL检测紫色斑点中Rf值一致的流份合并，收干流分中的溶剂后，得到6个粗晶，经用薄板层析及标准品对照确定为决明子内酯-9-0-β-葡萄糖苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用中低压制备柱分离决明子蒽醌成分的方法，其步骤是:A、将干燥后的决明子种子粉碎后过35?45目筛，装入三角瓶，加入量为三角瓶容量的1/5，倒入95%的乙醇，乙醇倒入量为药材重量的5~10倍，置入超声仪中超声30~50min，再将超声后的物质过滤，继续用95%的乙醇超声30~50min，再将超声后的物质过滤，重复本步骤3~5次，合并这3~5次的过滤液，回收过滤液中的乙醇，得到用乙醇提取决明子的干浸膏；B、将乙醇提取决明子的干浸膏倒入三角瓶，用3?5倍体积的乙酸乙酯超声萃取7~15min，再将萃取后的物质过滤，继续用3?5倍的乙酸乙酯超声萃取7~15min，再将超声后的物质过滤回收，重复本步骤3~5次，合并这3~5次的过滤液，回收过滤液中的乙酸乙酯，一直回收到滤液中的乙酸乙酯与浸膏成1:1的体积的萃取液；C、?将萃取液用3倍量的400?500目硅胶拌匀，蒸干至无乙酸乙酯气味，取400ml和1500mL?Flash柱各一个，400ml的柱装样品硅胶，1500ml的柱仅装硅胶作为分离柱，二根柱都干法上样；分别用石油醚洗脱至柱平衡，再将二根柱串联，串联后的柱子接到中低压制备型色谱仪上，洗脱溶剂分为A和B?，A为石油醚，?B为乙酸乙酯：丙酮=8:1，洗脱溶剂的比例为：B为2%，4%，8%的比例洗脱，在中低压色谱柱的荧屏监控图下收集流份，按监控图出现的谱峰收集，再以TCL检识辅助，取TCL检测紫色斑点中Rf值一致的流份合并，收干流分中的溶剂后，得到决明子内酯?9?O?β?葡萄糖苷、橙黄决明素、决明素、美决明素、芦荟大黄素、大黄酚；D、将中低压制备色谱上串联的二根硅胶柱子换成C18柱、将决明子内酯?9?O?β?葡萄糖苷、橙黄决明素、决明素、美决明素、芦荟大黄素、大黄酚的粗晶用甲醇溶解，注入C18柱中，用55%甲醇：水=55:45甲醇?水洗脱，再以TCL检识辅助检测，得到六个单晶。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：袁晓，袁萍，
申请(专利权)人：中国科学院武汉植物园，
类型：发明
国别省市：