本发明专利技术的特征在于用非侵入性方法诊断哺乳动物中的IgA或IgM肾脏病症，例如IgA肾病、过敏性紫癜和IgM肾病。本发明专利技术的特征还在于在这些病症诊断中有用的组合物和试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及关于肾脏疾病的诊断方法以及在此类疾病诊断中有用的组合物和试剂盒的领域。
技术介绍
IgA肾病(IgAN、贝格尔氏(BergeW s)病)的特征在于IgAl沉积在肾脏皮质的肾小球系膜中，且是全世界最普遍的肾小球肾炎。IgA沉积通常在人生的第二个或第三个10年时自发地出现，且被认为是免疫复合物。抗原未知；IgA自身可能是抗原。该病的流行率在美国和欧洲很高，但在亚洲最高。在日本的发病率可能是所有肾活检的40-50 %。多年持续或间歇性检测到的显微镜性血尿和蛋白尿是这种疾病的临床特征，且超过50%的患者还发展为高血压。这不是曾经认为的良性病，约15-40%的患者最终发展成肾衰竭。事实上，IgA肾病是原发性肾小球疾病最终达到肾脏移植的患者中肾终末期疾病的主因。过敏性紫癜(Henoch-Sch0nleinpurpura, HSP)是另一种IgAl介导的感染后血管炎，在年龄2-11岁的儿童中最常见，而肾损害非常类似于IgAN。流行率在14岁以下是22/100, 000,且在年龄4-6岁的群体中是70/100，000。HSP是如此类似于IgAN，以致于认为IgAN是病变局限于肾脏形式的HSP的观念近来已获得接受(Smith和Feehally, SpringerSemin.1mmunopatho1. 24 :477-493,2003)。IgM肾病(IgMN)引起肾病综合征且特征在于IgM的肾小球系膜沉积。推测这些沉积来源于循环IgM聚集物或免疫复合物，类似于IgAN。IgMN通常见于儿童中，且IgMN的临床特征非常类似于微小病变疾病(MCD)，其中肾病综合征是主要临床表型，但IgMN导致明显高于MCD的高血压发病率。在本专利技术之前，这些疾病的诊断通过取出肾组织样品用于病理学检查的肾活检来进行。肾脏病理学家进行肾组织的免疫荧光染色。这需要连续应用抗人IgA抗体，随后用荧光染料缀合的第二抗体显色，以定位基于IgA的抗体-抗原复合物用于诊断IgAN和HSP。在IgMN的诊断中，可以应用相同操作，但使用的抗体特异性是结合人的IgM。如果测试检测到比共存的IgG更高的高水平的肾小球IgA，以及不同程度存在的补体组分，则可进行IgA肾病的诊断。对于IgMN也是如此，其中肾小球中的IgM沉积定义该疾病。活检时，患者通常取俯卧位躺着时进行，其肾脏已经过超声或CAT扫描定位。在局部麻醉下，在皮肤上制造小切口。使用合适的憋气规程，使用活检针获取大小1-1. 5cm X2mm的样品，随后再取出活检针。患者留在医院里，仰卧12-24小时，伴随监测以检测并发症，所述并发症可以包括出血、疼痛、动静脉瘘、泌尿道感染、以及罕见情况下的死亡。出血是肾活检最常见的并发症。尽管在活检前，患者被测试凝血能力，但大多数患者经历短时间的显微镜性血尿。罕见地，出血严重得足以需要输血或手术。估计在经皮肾活检中，有O. 1-0. 4%的病人需要经过手术才能控制出血，且在所有采用针吸活检的病人中，大约有O. 06% (6/10, 000)需要切除肾以控制出血。疼痛是常见问题且是短暂的。持续超过12小时的疼痛在大约4%的活检中发生。在血块阻塞输尿管之一或在大包膜下血肿的情况下，可能发生严重或延长的疼痛。2根血管之间的动静脉瘘可能起因于由活检针引起的邻近动脉和静脉壁的损害。此类瘘是罕见的且通常在I到2年内自发地关闭。 死亡在大约O.1 %的肾活检情况下发生。肾活检并非对于所有患者都是合适的。禁忌症包括无法补救的出血病症、小肾、无法在医学上控制的严重高血压、多重双侧肾囊肿或肾肿瘤、肾积水(尿流被阻塞导致肾损害的病症)、肾脏或周围组织的活动性感染、患者不能配合、和先天性单肾。经皮活检的可替代方法是开放性手术活检和经颈静脉肾活检。正因为以上各种原因，临床上需求更安全、更可靠和侵袭性更少的方法用于诊断IgA肾病、HSP和IgM肾病。
技术实现思路
本专利技术的特征是用于诊断哺乳动物(例如，人)中的IgA或IgM肾脏疾病的方法，所述方法包括给哺乳动物施用(例如，静脉内)特异性结合IgA或IgM的化合物，和检测哺乳动物肾中的该化合物，其中，所述哺乳动物肾中的该化合物的量相对于没有肾脏疾病的哺乳动物肾脏中的该量的增加有助于诊断哺乳动物中的IgA或IgM肾脏疾病。化合物可以包括肽(例如，人Fca Rl (SEQ ID N0:2)、人Fca/μ受体(SEQ IDNO 6)、多聚 Ig 受体(SEQ ID NO 7)、Sir22(SEQ ID NO 3)、链球菌 IgA 结合肽(Sap ；SEQID NO :4)、修饰的 Z-结构域蛋白质(SEQ ID NO 12)和 YDWIPSSAW(SEQ ID N0:9)、或这些肽的IgA或IgM结合片段)。肽可以包括N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、拟肽序列或间隔物的修饰。化合物可以包括抗体、或抗体的IgA或IgM结合片段(例如，抗人IgA或抗人IgM)。化合物可以含有量子点。化合物也可以与放射性标记(例如，99mTc、111 In、66Ga、67Ga、68Ga、86Y、90Y、201T1、55Co、60Cu、61Cu、62Cu、64Cu、67Cu、82Rb、18V187Re 和 1867l88Re)连接。连接可以通过双功能螯合剂，这可以包括N3S、N2S2、PnAO、HYNIC、 +、PADA、DTPA> D0TA、组氨酸、三肽(例如，Lys-Gly-Cys> Cys-Gly-Cys 和 Gly-Gly-Cys)和四肽(例如,Gly-Ala-Gly-Gly或Cys-Gly-Cys-Gly)。化合物可以与顺磁物质(例如，礼)连接。检测可以通过成像技术(SPECT、PET、平面扫描和MRI)来进行。在一个进一步的实施方案中，化合物包括半乳糖和结合对的第一个成员(例如，链霉亲和素)。化合物的施用可以进一步包括半乳糖-菲柯尔(Ficoll)的施用。检测随后可以通过下列来进行给哺乳动物施用与结合对的第二个成员(例如，生物素)以及半乳糖缀合的放射性标记(例如，99mTC、mIn、66Ga、67Ga、68Ga、86YJqY^iTu55Cck6qCiu61Ciu62Cu、64Ciu67Cu^82Rb, 1857l87Re或186/188Re标记)化合物(例如，人血清白蛋白)，随后检测哺乳动物肾中的该放射性标记化合物。本专利技术的第二个方面是包括IgA或IgM结合化合物、双功能螯合剂和在药学可接受载体中的可检测标记的组合物，其中IgA或IgM结合化合物通过双功能螯合剂与可检测标记连接。化合物可以包括肽(例如，人Fca Rl (SEQ ID NO :2)、人Fe α/μ受体(SEQ IDNO :6)、多聚 Ig受体(SEQ ID NO :7)、Sir22 (SEQ ID NO :3)、链球菌 IgA结合肽(Sap ;SEQ IDNO 4)、修饰的 Z-结构域蛋白质(SEQ ID NO :12) YDffIPSSAff (SEQ ID NO :9)、或这些肽之一的IgA或IgM结合片段)。肽可以包括N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、拟肽序列或间隔物的修饰。该化合物还可以包括抗体(例如，抗人IgA或抗人IgM)、或抗体的IgA本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种体内诊断试剂盒，应用于诊断哺乳动物包括人类中的IgA或IgM肾脏疾病，所述体内诊断试剂盒主要包含A、B二个静脉注射制剂的成份：A制剂主要包含特异性结合IgA或IgM的单克隆抗体，或抗体中的抗原结合段，例如抗体的Fab段，使用的单克隆抗体的来源是鼠类，或者是人鼠嵌合抗体(Chimeric?Antibody)，或者是人源化抗体，或者是人类的抗体，A制剂中的抗体将被生物素(biotin)或具有特殊抗原性的短肽链标记，带有特殊抗原性的短肽链是His?Tag(HHHHHH)；Myc?Tag(EQKLISEEDL)；HA?Tag(YPYDVPDYA)；FLAG?Tag(DYKDDDDK)等，B制剂主要含有以下三种成分：(a)能够识别A制剂中抗体所带标记的蛋白，例如链霉亲和素(Streptavidin)或亲和素(Avidin)；或特异性结合抗原短肽链的单克隆抗体或抗体中的抗原结合片段，如使用抗体，其来源是鼠类抗体，人鼠嵌合抗体，人源化抗体，或人类抗体，(b)双功能螯合剂，选自N3S、N2S2、PnAO、HYNIC、[M(CO)3(H2O)3]+、PADA、DTPA、DOTA、组氨酸、三肽(Lys?Gly?Cys、Cys?Gly?Cys或Gly?Gly?Cys)或四肽(Gly?Ala?Gly?Gly或Cys?Gly?Cys?Gly)，(c)放射性同位素或可用于磁共振成像的钆元素(gadolinium)，放射性同位素选自99mTc、111In、66Ga、67Ga、68Ga、86Y、90Y、201Tl、55Co、60Cu、61Cu、62Cu、64Cu、67Cu、82Rb、185/187Re和186/188Re中的一项。...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特·思东·仇，仇家舟，安德鲁·G··普劳特，
申请(专利权)人：RQ生物科技有限公司，新英格兰医学中心医院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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