本发明专利技术涉及miR-146a作为调节血管生长靶标的用途。首次公开了miR-146a在血管生长中发挥作用，其通过上调VEGF而促进血管的生长。因此，miR-146a抑制剂可用于抑制血管生长，从而预防、缓解或治疗血管过度生长相关的疾病，如关节炎；而miR-146a促进剂可用于促进血管生长，从而用于需要促进血管生长的疾病状态。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
；更具体地，本专利技术涉及miR-146a作为调节血管生长靶标的用途。
技术介绍
血管内皮生长因子(VEGF)是一种促 进血管生长的因子，其表达上调代表着血管生长的促进；反之则血管生长缓慢。血管生长的失调与许多疾病相关，计入关节炎、肿瘤等。关节炎是常见的慢性疾病，由炎症、感染、创伤或其他因素引起的关节炎性病变，常见的是骨关节炎(OA)和类风湿关节炎(RA)，我国关节炎患者估计有I亿以上，且人数在不断增加。据统计，我国50岁以上人群中半数患骨关节炎；65岁以上人群中90%女性和80%男性患骨关节炎。关节炎主要病理改变包括软骨退行性破坏，滑膜增生等。在关节炎中许多细胞因子参与这一过程，而IL-1 β是主要的分解代谢因子，IL-1 β上调导致细胞外基质的降解，加重了软骨的破坏。近年来发展了多种药物和疗法来减轻主要由关节炎的炎症引发的疼痛，但是对于治愈受累部位的软骨破坏却无计可施。在过去的几十年中，miRNA作为动物和植物中一类新的基因调控分子越来越受到瞩目，超过三分之一的人类基因受到miRNA调节。Stanczyk等报道在RA滑膜中，miR-146表达上调。 Nakasa 等 艮道在来源于RA病人的滑膜组织中，miR-146a/b表达上升 0 已有研究表明miR-146a在人类关节软骨的所有层面表达，尤其是在软骨表层o目前，miR_146a与血管生长、关节炎等的关系以及具体的作用靶点还属未知。在药物开发过程中，药物靶点的研究是至关重要的。因此，本领域还有必要进一步研究miR-146a在调节血管生长过程中的作用机制和靶点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供miR_146a作为调节血管生长靶标的用途。在本专利技术的第一方面,提供一种miR_146a调节剂(调节miR_146a的表达水平的试剂)的用途，用于制备调节血管生长的组合物。在一个优选例中，所述的血管生长是血管内皮生长因子(VEGF)介导的血管生长。在另一优选例中，所述的miR_146a调节剂是miR_146a抑制剂,用于制备抑制血管生长的组合物。在另一优选例中，所述的组合物还用于促进Smad4基因的转录或蛋白的表达；抑制血管内皮生长因子的转录或表达；或抑制软骨细胞的凋亡。在另一优选例中，所述的血管是骨，软骨，滑膜中的血管。在另一优选例中，所述的miR_146a抑制剂包括(但不限于)化学合成的miRNA-146a抑制剂；以表达质粒为载体的抑制miRNA_146a的病毒和非病毒产品；与miR-146a互补的核酸序列或序列片段。在另一优选例中，所述的miR_146a 抑制剂是miRIDIAN microRNA Hairpin Inhibitors。在另一优选例中，所述的miR_146a调节剂是miR_146a促进剂,用于制备增加血管内皮生长因子的转录或表达的组合物。在另一优选例中，所述的组合物促进血管生长、促进机体生长发育、促进损伤组织愈合、防治心血管疾病。在另一优选例中，所述的miR_146a促进剂是表达miR_146a的表达载体、病毒、化学合成的小分子化合物等。在另一优选例中，所述的表达miR_146a的表达载体中，包含有miR_146a的表达盒。在另一优选例中，所述的表达miR_146a的表达载体中，包含有miR_146a前体的表达盒。在本专利技术的另一方面，提供一种调节血管生长的方法，包括调节动物中miR_146a的表达。在另一优选例中，所述的调节血管生长是抑制血管生长；所述的方法包括给予动物有效量的miR-146a抑制剂。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图UIL-Ιβ促进miR_146a和VEGF的表达，同时下调Smad4。原代大鼠软骨细胞在相应时间点用白介素处理。miR-146a、Smad4和VEGF的表达水平用实时定量PCR和Western检测。A, miR-146a表达在24h内逐渐增加。B, IL-1 β刺激后Smad4的mRNA水平下降。C，IL-1 β上调VEGF水平。数值为3次独立实验的均值土标准差。D，Smad4和VEGF的蛋白水平在IL-1 β刺激下分别下调和上调。条带底部数值表示蛋白以GAPDH为标准的相对表达水平。图2、Smad4是miR_146a的直接靶基因。A，图示Smad4的3’ UTR与miR_146a的结合位点，上行序列为Smad4野生型序列(Smad-WT),中行序列为miR_146a序列，下行序列为Smad4突变型序列(Smad-MT)。B,miR-146a抑制Smad4 3’UTR的荧光素酶活性。HEK293T细胞分别转染含Smad43’ UTR或相应突变3’ UTR的片段。过表达miR-146a导致野生型(WT) 3’ UTR荧光素酶活性降低，而突变后(MT)荧光素酶活性不受影响。数值为3次独立实验的均值土标准差。Vector为空质粒对照。 C，过表达miR_146a抑制Smad4的表达，增加VEGF的表达。NC表示阴性对照，即转染了阴性对照(转染的对照RNA，序列为sense :5’_UUC UCC GAA CGU⑶C ACG UTT-3’，ant1-sense :5’ -ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT-3’ )的软骨细胞内蛋白表达情况。D,下调miR_146a的表达导致Smad4上调和VEGF下调。条带底部数值表示蛋白以GAPDH为标准的相对表达水平。其中Inhibitors NC表示抑制剂的阴性对照miRIDIANmicroRNA Hairpin Inhibitor Negative Control (购自 Dharmacon) ;miR_146a 抑制剂指miRIDIAN microRNA Hairpin Inhibitors (购自 Dharmacon)。图3、抑制miR-146a削弱IL-1 β弓丨起的Smad4下调和VEGF上调。用miR_146a抑制剂转染软骨细胞，然后用IL-1 β处理24h。A,miR_146a抑制剂能够显著降低IL-1 β引起的miR_146a升高。其中，InhibitorsNC 表不抑制剂的阴性对照 miRIDIAN microRNA Hairpin Inhibitor Negative Control。B, miR-146a抑制剂能够拮抗IL_1 β对Smad4的抑制作用。C，由IL-1 β弓丨起的VEGF上调可被miR_146a抑制剂削弱。数值为3次独立实验的均值土标准差。D，蛋白水平，miR_146a抑制剂拮抗IL-1 β弓丨起的Smad4下调和VEGF上调。条带底部数值表示蛋白以GAPDH为标准的相对表达水平。图4、VEGF受Smad4调控。利用RNAi的方法降低Smad4的表达上调VEGF的蛋白水平。软骨细胞转染Smad4的siRNA。 A,针对Smad4的siRNA有效降低Smad4的RNA水平。数值为3次独立实验的均值土标准差。B，抑制Smad4增加VEGF的蛋白表达。其中siRNA ctrl表示无关序列对照。C，共转miR_146a和Smad4的表达质粒逆转miR_146a导致的VEGF上调。条带底部数值表示蛋白以GAPDH为标准的相对表达水平。其中，Contr本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种miR?146a调节剂的用途，用于制备调节血管生长的组合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓玲，李晶，戴尅戎，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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