本发明专利技术公开抗LRP6并阻断Wnt信号传导途径的单克隆抗体。本发明专利技术还公开其制备和使用方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抑制Wnt信号传导途径的单克隆抗体及其制备方法和用途关于联邦政府资助的研究或开发的陈述本专利技术用美国国立卫生研究院授予的合同号EY019309下的政府支持来进行。政府具有本专利技术中的某些权利。
技术介绍
I.专利
本文公开并要求保护的专利技术构思涉及单克隆抗体，并且更具体地，但不是通过限制的方式，涉及抑制fct信号传导途径的单克隆抗体及其使用方法。2.
技术介绍
描述 异常或反常的新血管形成与许多疾病和病症相关，包括但不限于癌症、炎性疾病、黄斑变性和糖尿病性视网膜病变(DR)。Wnt信号传导途径在新血管形成以及包括视网膜血管发育和炎症过程在内的许多其他相关生物学过程中起着至关重要的作用。Wnt信号传导途径基因FriZZled-4(FZ4)或LRP5的突变导致家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)患者中视网膜血管发生的抑制，而Fz4敲除小鼠表现出不完整的视网膜血管形成。此外，在结肠癌和人内皮细胞中，作为Wnt信号传导的突变激活的结果，VEGF上调。VEGF是血管通透性和血管发生的有效介质，并且是建立的包括癌症和年龄相关性黄斑变性在内的许多血管发生相关疾病的治疗靶标。许多其他血管发生调节物也是fct靶基因，包括但不限于FGF18、内皮素-1、Cx43、uPAR、MMP7和 MMP3。在异常新血管形成相关疾病中，糖尿病性视网膜病变(DR)是很常见的糖尿病并发症和发达国家中四种常见的威胁视力的疾病状况(condition)之一。几乎100%患有I型糖尿病的患者和60%的II型糖尿病患者在他们的一生中会发展某些程度的视网膜病变。约10%的糖尿病患者在15年的糖尿病后发展严重的视觉障碍。DR是慢性和进行性病症，主要影响视网膜毛细血管。血-视网膜屏障的破坏是患有糖尿病的患者和链佐星(STZ)诱导的糖尿病动物模型中常见的病理变化。在DR的早期阶段中，视网膜血管通透性增加，但未出现临床视网膜病变。视网膜血管渗漏和视网膜的增厚导致糖尿病性黄斑水肿(DME)。在DR的晚期阶段中，毛细血管内皮细胞的过度增殖导致视网膜新血管形成(NV)，从视网膜和玻璃体中预先存在的毛细血管异常形成新血管。反过来，这导致增殖性糖尿病性视网膜病变(TOR)。异常血管发生最终可以引起严重的玻璃体腔出血和/或视网膜脱离，导致严重的视力丧失。据证实DR的发病机理涉及眼中的多种生长因子，例如但不限于VEGF、bFGF、IGF-I和PEDF。这些生长因子和它们的受体在糖尿病中的改变已在实验和临床研究中鉴定。升高的VEGF水平至少部分负责患有DR的患者中的视网膜血管渗漏、视网膜血管高通透性和视网膜NV。因此VEGF在DR的发展和发病机理中起重要作用。上调的视网膜VEGF及其受体的表达与OIR中的视网膜NV有关。据证实抑制VEGF和VEGF受体防止糖尿病和OIR动物模型中的视网膜NV。越来越多的证据显示Wnt信号传导途径不仅介导炎症，即TNF- a、NF- k B易位和VEGF,而且还调节眼中的血管发生。研究证实Frizzled-4 (Fz4)和Lrp5/6均在成年小鼠视网膜脉管系统中表达。人中Fz4或LRP5基因的突变导致家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)患者中正常视网膜血管发生的抑制，并且Fz4敲除(fz4+)小鼠表现出不完整的视网膜血管形成。同时，据证实在VEGF-A的基因启动子中存在7个￠-联蛋白/TCF结合位点。在低氧条件下，HIF-I a与TCF-4竞争与P -联蛋白形成新复合物，代替HIF_1 a基因启动子区中的￠-联蛋白/TCF。此外，在结肠癌细胞和人内皮细胞中，作为Wnt/￠-联蛋白信号传导的突变激活的结果，VEGF上调。许多其他血管发生调节物先前已被报道为Wnt靶基因，包括但不限于FGF18、内皮素-I、Cx43、uPAR、MMP7和MMP3。因此Wnt可以通过诱导多种血管发生基因来调节血管发生。当Wnt配体结合至许多Frizz led蛇形受体家族及其共同受体LRP6或近亲如LRP5时，经典途径启动。当fct诱导的FZ-LRP6复合物形成时，LRP6会在其PPPS P基序磷酸化，然后能够以磷酸化依赖性方式结合轴蛋白至质膜，从而导致3 -联蛋白磷酸化和降解的抑制。LRP6在人疾病中至关重要。LRP6胞质域对于轴蛋白结合是必不可少的，并且其在LRP6 AC中的缺失导致结合Wnt但不能结合轴蛋白的显性负受体。LRP6胞外域具有自身抑制活性，因为其在LRP6 A N中的缺失导致在Wnt配体不存在的情况下结合轴蛋白的组成性激活受体。如本文中以上所述，视网膜NV是导致DR中视力丧失的主要病理特征。VEGF是公知的刺激DR中的视网膜NV形成的关键因子。因此，对用于抑制Wnt信号传导途径的新的和改进的组合物和方法存在巨大需要。这类组合物和方法可用于治疗和预防新血管形成相关和/或fct信号传导途径相关疾病，包括但不限于炎症、纤维化、血管发生和/或肿瘤发生。本文公开并要求保护的专利技术构思涉及所述组合物和方法，其克服现有技术的缺点和缺陷。附图说明图I说明患有DR的人视网膜中激活的Wnt信号传导。将来自5个非DM供体和6个患有NPDR的糖尿病供体的视网膜切片用￠-联蛋白的抗体免疫染色。信号用二氨基联苯胺法显影(褐色)。来自2个非DM (A和B)和2个NPDR供体(C和D)的代表性视网膜图像显示与来自非DM对象的相比，来自DM-NPDR供体的内层视网膜中￠-联蛋白的信号更强，并且视网膜细胞核中的￠-联蛋白染色增加。比例尺=20i!m。Ej-联蛋白信号通过使用形态计量分析软件来定量并表示为任意单位(平均值土SD)。**P〈0.01。图2示出Akita小鼠、STZ诱导的糖尿病大鼠和OIR大鼠的视网膜中升高的￠-联蛋白水平。将来自16周龄Akita小鼠、STZ注射之后16周的STZ-DM大鼠、年龄为P16的OIR大鼠以及年龄匹配的非糖尿病或常氧对照的视网膜用于￠-联蛋白的蛋白印迹(A-C)和免疫组织化学(D-Q)分析。A-C :将来自每只动物的相同量(50iig)的视网膜蛋白用￠-联蛋白特异性的抗体印迹。将膜剥离并用￠-肌动蛋白的抗体重新印迹。每条泳道代表单独的动物。D-Q :将来自Akita小鼠(G-I)和它们的非糖尿病同窝仔畜(D-F)、STZ-DM大鼠(M-O)和非DM大鼠(J-L)、OIR大鼠(Q)和维持在恒定常氧下的年龄匹配的正常大鼠(P)的代表性视网膜切片用P -联蛋白的抗体染色。F、I、L和0 :将核用4’，6- 二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)复染(红色)并与P -联蛋白信号合并。红色箭头(I和O中)指示显示绿色和橙色的核，为糖尿病视网膜的核中增加的￠-联蛋白信号的结果，而白色箭头(F和L中)指向非糖尿病视网膜中的核(红色)。比例尺=20iim。图3说明STZ-糖尿病和OIR大鼠的视网膜中上调表达的LRP5/6。A和B :将来自3只糖尿病发病后16周的STZ诱导的糖尿病大鼠和年龄匹配的非糖尿病大鼠(A)，以及年龄为P16的4只OIR大鼠和正常大鼠⑶的相同量的视网膜蛋白(IOOyg)用于蛋白印迹分析，使用LRP5/6特异性的抗体(Santa Cruz Biotechnology)。将相同的膜剥离并用￠-肌动蛋白的抗体重新印迹。C-F:将来自STZ-糖本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：JX·马，K·李，Y·陈，
申请(专利权)人：俄克拉何马大学董事会，
类型：
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。