一种肌肉特异表达猪IGF1基因的过表达载体制造技术

本发明专利技术为一种猪骨骼肌中特异过表达猪内源IGF1(C1：Ea)基因的安全型表达载体。该载体包含猪内源性序列sk-α-actinPromoter/IGF1(C1:Ea)/sk-α-actin3’UTR/SV40增强子串联组成的表达盒。本发明专利技术的表达载体在细胞水平上验证了骨骼肌特异sk-α-actin启动子在成肌细胞中能高效表达，在具有成肌分化潜能的PEF细胞中仅低水平表达而在其他类型细胞中不表达。本发明专利技术中构建的载体制备转基因小鼠，通过定量PCR和WesternBlot检测出转基因小鼠骨骼肌中IGF1基因的mRNA和蛋白表达水平分别为野生型小鼠的15倍和3.5倍，并且仅在骨骼肌中高效表达。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种安全型骨骼肌特异表达猪类胰岛素生长因子I (insulin-like growth factorl, IGF1)基因的过表达载体。
技术介绍
在研究基因功能及转基因动物生产过程中，人们常常借助真核表达载体来实现， 例如pcDNA3. O系列载体。传统方法往往通过分子生物学手段将目的基因片段连接到病毒启动子(如CMV启动子)或异源性强启动子下游，以指导外源基因表达。该方法在基因表达及功能的研究中有着极其广泛的应用，但诸多研究暴露了该手段不足的一面异源性基因序列导入宿主常引起基因组序列的紊乱，内源性基因表达异常，甚至改变宿主固有的特征表型；也常常引起人们对转基因伦理问题的争论。此外，病毒启动子序列或指导质粒DNA复制等原核拢余序列的引入，易引起转基因安全问题，须经长期的生物安全评价才能投入实际应用，既费时又耗费财力。同时，普遍性过表达外源基因常引起机体生长等的异常。因此，在利用转基因技术进行动物遗传改造时，同一物种的内源基因序列，以及组织表达的特异性是保证转基因动物安全性的基础。
技术实现思路
本专利技术提供了一种猪内源性骨骼肌特异sk-α -actin启动子驱动的表达框本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪内源性骨骼肌特异sk?α?actin启动子驱动IGF1基因的表达盒，是由依次串联的sk?α?actin启动子、猪IGF1基因、sk?α?actin?3’UTR和SV40增强子组成；其序列如SEQ?ID?No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种猪内源性骨骼肌特异sk-α -actin启动子驱动IGFl基因的表达盒，是由依次串联的sk-a -actin启动子、猪IGFl基因、sk_ a -actin 3，UTR和SV40增强子组成；其序列如SEQ ID No. I所示。2.ー种骨骼肌特异过表达猪IGFl基因安全型表达载体，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：李奎，宋成义，吴晗，鞠辉明，白立景，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，扬州大学，
类型：发明
国别省市：