本发明专利技术公开了一种阳离子脂质体，包括阳离子脂、中性磷脂、聚乙二醇衍生化磷脂以及甘露糖或甘露寡糖；所述阳离子脂、所述中性磷脂以及所述聚乙二醇衍生化磷脂中的磷脂分子组成球壳状的磷脂双分子层；所述甘露糖或甘露寡糖连接在所述聚乙二醇衍生化磷脂的一端形成甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂。这种阳离子脂质体通过添加甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂，抗原呈递细胞靶向性和在淋巴结中的富集得到提高，具有免疫促进作用，可以提高脂质体疫苗的免疫效力。本发明专利技术还提供一种上述阳离子脂质体的制备方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫治疗领域，尤其涉及一种。
技术介绍
疫苗是预防和控制传染性疾病发生发展的重要手段。免疫佐剂(又称非特异性免疫增生剂)则是疫苗中不可或缺的组成成分，能够有效地促进疫苗诱导的特异性免疫反应。随着疫苗研究的飞速发展，新型的基因工程疫苗正逐步取代传统的减毒活疫苗和灭活疫苗。与传统的疫苗相比，基因工程疫苗具有纯度高、特异性强、安全性好等优点，然而由于其免疫原性普遍较差，迫切需要结合有效的免疫佐剂，从而提高疫苗的免疫效力。 脂质体纳米颗粒是由磷脂双层壳包裹水相核心形成的球形的实体，其结构类似生物膜，是一种生物相容性好且无毒的纳米材料。它可包封水溶性和脂溶性药物，具有减少药物剂量、缓释、及靶向性释放药物等优点，因而被广泛用于纳米抗肿瘤药物的开发。此外，纳米脂质体也是一种优良的抗原载体，不仅能够包裹一系列理化性质不同的抗原及免疫佐齐U，保护蛋白多肽抗原不被降解，还可以促进抗原呈递细胞对抗原的吞噬及呈递，提高机体的特异性免疫反应。基于以上这些优点，脂质体纳米颗粒作为一种新型的疫苗载体，正逐渐用于细菌疫苗、病毒疫苗、抗寄生虫疫苗以及抗肿瘤疫苗等研制开发。中性脂质体和表面携带正电荷的阳离子脂质体是最常用的纳米疫苗载体。其中特别值得关注的是阳离子脂质体，它不但是优良的蛋白/多肽抗原载体，还是一种新型的免疫佐剂，可直接活化抗原呈递细胞，增强疫苗诱导的免疫反应。目前，阳离子脂质体已被GSK公司用于新一代流感疫苗。以树突状细胞(dendritic cell，DC)为代表的抗原呈递细胞(antigen-presenting cells, APCs)在免疫反应中占据核心地位。其主要作用是识别、摄取和呈递抗原，继而引发淋巴细胞活化和特异性体液及细胞免疫应答。APCs表面广泛表达C型凝集素类受体，如甘露糖受体(mannose receptor, MR)、DEC205/gp200-MR6等。这些受体直接参与了抗原呈递细胞对抗原的识别、摄取和呈递过程。在抗原和疫苗表面修饰C型凝集素类受体的特异性配体，如甘露糖和甘露聚糖，可促进抗原呈递细胞对抗原的摄取，增强疫苗的免疫效力。Copland (Copland. M. J. , Baird, M. A. , Rade s, T.,McKenzie, J. L. , Becker, B. , Reck, F. , Tyler, P. C. and Davies, N. M. (2003)Liposomaldelivery of antigen to human dendritic cells. Vaccine 21,883-90.)等在中性脂质体中掺入末端修饰有甘露三糖的二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(tr imannose-dipalmi toy Iphosphatidylethanolamine, man3_DPPE),从而使脂质体表面携带甘露糖残基。结果表明man3-DPPE修饰的脂质体不但提高DC对抗原的摄取，而且显著增强DC诱导的T淋巴细胞增殖。Kojima 等(Kojima, N. , Biao, L. , Nakayama, T. , Ishii, M, Ikehara, Y. and Tsujimura,K. (2008)Oligomannose-coated liposomes as a therapeutic antigen-delivery and anadjuvant vehicle for induction of in vivo tumor immunity. J Control Release 129,26-32.)则发现，man3-DPPE修饰可促进脂质体肿瘤疫苗在外周淋巴结内的集聚，并显著增强疫苗诱导的抗肿瘤免疫。目前的研究主要通过化学键合的方法将甘露糖或寡甘露糖直接修饰到脂质体的磷脂分子上，使得脂质体表面携带甘露糖分子，从而提高其抗原呈递细胞靶向性。然而，事实上由于颗粒大小、电荷、及表面性质等理化因素的影响，脂质体疫苗在注射入体内后绝大部分滞留于注射位点，不能有效地进入淋巴器官，降低了脂质体疫苗的免疫效力。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种能够提高脂质体疫苗免疫效力的。—种阳离子脂质体，包括阳离子脂、中性磷脂、聚乙二醇衍生化磷脂以及甘露糖或甘露寡糖；所述阳离子脂、所述中性磷脂以及所述聚乙二醇衍生化磷脂中的磷脂分子组成球壳状的磷脂双分子层；所述甘露糖或甘露寡糖连接在所述聚乙二醇衍生化磷脂的一端形成甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂。优选的，所述阳离子脂与所述中性磷脂的摩尔比为I : 19 99 : I。 优选的，所述甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂的摩尔数与所述阳离子脂和所述中性磷脂摩尔数之和的比值范围为I : 5 I : 50。优选的，所述聚乙二醇衍生化磷脂中聚乙二醇的分子量为350 2000。优选的，所述甘露糖或甘露寡糖通过醛基-氨基或羟基-氨基缩合的方式连接在所述聚乙二醇衍生化磷脂上。优选的，所述阳离子脂为一种表面携带正电荷的两性分子，所述阳离子脂的主链是甘油，甘油的三个羟基中中间的羟基连接带正电荷的季铵盐，另外两个羟基被饱和或不饱和脂肪酸酯化。优选的，所述阳离子脂为双十烷基二甲基溴化铵、二油酰三甲基铵丙烷、二油酰丙基氯化三甲铵、二甲氨基乙基氨甲酰基-胆固醇和二油酰磷脂酰胆碱醚中的至少一种。优选的，所述中性磷脂为一种两性分子，所述中性磷脂的表面静电荷基本接近0，所述中性磷脂的主链是甘油，甘油的三个羟基中侧端的一个羟基被磷酸酯化，另外两个羟基被饱和或不饱和脂肪酸酯化，磷酸基团又与一个极性的胆碱基团或胆胺基团相连。优选的，所述中性磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二豆蘧酰磷脂酰胆碱、二亚油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蘧酰磷酸乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的至少一种。优选的，所述甘露糖为能被甘露糖受体识别的单糖，包括D-甘露糖、甘露糖苷、L-岩藻糖、D-乙酰葡萄糖胺、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-乙酰半乳糖胺和D-鼠李糖。优选的，所述甘露寡糖由2 10个能被甘露糖受体识别的单糖通过a 1-2键、a 1-3键、a 1-4键、a 1-6键或0 1-4键任意组合形成；所述能被甘露糖受体识别的单糖包括D-甘露糖、L-岩藻糖、D-乙酰葡萄糖胺、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-乙酰半乳糖胺和D-鼠李糖。一种阳离子脂质体的制备方法，包括如下步骤步骤一、提供聚乙二醇衍生化磷脂，将甘露糖或甘露糖苷连接在聚乙二醇衍生化磷脂上，得到甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂；步骤二、将阳离子脂、中性磷脂和所述甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂分别溶解于氯仿和甲醇混合溶剂中，混合后得到混合液；步骤三、用稳定的氮气流或惰性气体流将所述混合液旋转吹干，使之形成一层均匀的薄膜，真空干燥后加入PBS缓冲液并放置4°C水化，然后超声并挤压过膜两次得到所述阳离子脂质体。这种阳离子脂质体通过添加甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂，提高了抗原呈递细胞靶向性和在淋巴结中的富集，具有免疫促进作用，可以提高脂质体疫苗的免疫效力。附图说明图I为一实施方式的包覆有抗原的阳离子脂质体的结构示意图。图2为小鼠树突状细胞在体外对LP、LP-P本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种阳离子脂质体，其特征在于，包括阳离子脂、中性磷脂、聚乙二醇衍生化磷脂以及甘露糖或甘露寡糖；所述阳离子脂、所述中性磷脂以及所述聚乙二醇衍生化磷脂中的磷脂分子组成球壳状的磷脂双分子层；所述甘露糖或甘露寡糖连接在所述聚乙二醇衍生化磷脂的一端形成甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂。
【技术特征摘要】
1.一种阳离子脂质体，其特征在于，包括阳离子脂、中性磷脂、聚乙二醇衍生化磷脂以及甘露糖或甘露寡糖；所述阳离子脂、所述中性磷脂以及所述聚乙二醇衍生化磷脂中的磷脂分子组成球壳状的磷脂双分子层；所述甘露糖或甘露寡糖连接在所述聚乙二醇衍生化磷脂的一端形成甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂。2.如权利要求I所述的阳离子脂质体，其特征在于，所述阳离子脂与所述中性磷脂的摩尔比为I : 19 99 I。3.如权利要求I所述的阳离子脂质体，其特征在于，所述甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂的摩尔数与所述阳离子脂和所述中性磷脂摩尔数之和的比值范围为I : 5 I : 50。4.如权利要求I所述的阳离子脂质体，其特征在于，所述聚乙二醇衍生化磷脂中聚乙二醇的分子量为350 2000。5.如权利要求I所述的阳离子脂质体，其特征在于，所述甘露糖或甘露寡糖通过醛基-氨基或羟基-氨基缩合的方式连接在所述聚乙二醇衍生化磷脂上。6.如权利要求I所述的阳离子脂质体，其特征在于，所述阳离子脂为一种表面携带正电荷的两性分子，所述阳离子脂的主链是甘油，甘油的三个羟基中中间的羟基连接带正电荷的季铵盐，另外两个羟基被饱和或不饱和脂肪酸酯化。7.如权利要求I或6所述的阳离子脂质体，其特征在于，所述阳离子脂为双十烷基二甲基溴化铵、二油酰三甲基铵丙烷、二油酰丙基氯化三甲铵、二甲氨基乙基氨甲酰基-胆固醇和二油酰磷脂酰胆碱醚中的至少一种。8.如权利要求I所述的阳离子脂质体，其特征在于，所述中性磷脂为一种两性分子，所述中性磷脂的表面静电荷基本接近0，所述中性磷脂的主链是甘油，甘油的三...
【专利技术属性】
技术研发人员：马轶凡，庄燕，蔡林涛，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。