一种基于枝干滴注技术简捷高效诱导枣树2n花粉的方法技术

一种基于枝干滴注技术简捷高效诱导枣树2n花粉的方法，于枣花粉母细胞旺盛减数分裂期，以秋水仙素为诱变剂，用钻孔器对枣树枝干基部进行打孔，然后将秋水仙素药液直接滴注到枝干中，使药液通过木质部向上运输，阻止花粉母细胞减数分裂过程中纺锤丝的形成，诱导花粉染色体加倍，从而获得2n花粉。该方法应用于枣树2n花粉诱导，诱导时间容易掌握，并且可以在1天内对大量枣吊进行2n花粉诱导，并获得高比例的2n花粉，加速枣树有性多倍化育种进程。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于枝干滴注技术简捷高效诱导枣树2η花粉的方法。
技术介绍
冬饿iZiziphus jujuba Mill.)为我国第一大干果树种,近年来发展迅速。为适应枣产业的快速发展，新品种选育工作迫在眉睫。由于枣花小、去雄难度大，加之胚高度败育，枣树杂交育种举步维艰，倍性育种已经成为培育枣新品种的重要途径之一。通过无性多倍化获得的多倍体，由于没有外来优异基因的渗入，不能实现优异基因的重组，迫切需要通过有性多倍化途径开展枣树的倍性育种。2n花粉(又称巨型花粉)在有性倍性育种中具有重要价值。据本专利专利技术人检测，在自然条件下，绝大多数枣树优良品种的2n花粉自然发生比例极低，仅有I. 79%的枣树品种可以产生1%以上的2n花粉，最高达9. 41%，绝大多数优良品种的2n花粉自然发生比例极低，不能满足倍性育种需要。因此，对枣树优良品种进行2n花粉诱导，进而通过有性杂交整合优良性状，进行有性多倍体育种，具有重要的价值。本专利专利技术人曾尝试利用涂抹法、微创法进行巨型花粉的诱导，其中涂抹法费时费力，效率很低；微创法诱导2n花粉的比例可以达到18. 3%，但由于微创法是对较细的单个枣吊进行割伤处理，也比较费工，诱导效率仍然不能满足大规模育种实践的需要。本专利技术专利采用枝干滴注技术，使诱变剂通过枝干进入枣吊中，诱导时期容易掌握，由于在一个树干处滴注可以影响其上几十甚至几百个枣吊，从而可以实现在I天内对大量枣吊进行2n花粉诱导，并且可以获得高比例的2n花粉，大大提高了 2n花粉的诱导效率，对加速枣树有性多倍化育种进程具有重要价值。
技术实现思路
本专利技术建立了一种基于枝干滴注技术简洁高效诱导枣树2n花粉的方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是于枣花粉母细胞旺盛减数分裂期，以秋水仙素为诱变剂，利用钻孔器对枣树枝干基部进行打孔，然后采用输液的方式将秋水仙素药液直接滴注到枝干中，使药液通过木质部向上运输，阻止花粉母细胞减数分裂过程中纺锤丝的形成，诱导花粉染色体加倍，从而获得2n花粉。本专利技术的具体内容，即利用枝干滴注技术简捷高效诱导枣树2n花粉的具体方法如下 (1)枝干预处理于盛花前18-24d，选择生长健壮的枝干，在枝干光滑部位用钻孔器打直径3mm的孔洞，深达木质部，但避免接触到髓； (2)2n花粉的诱导首先用牛皮纸将输液瓶和输液管包严；然后将O.3%的秋水仙素溶液装入输液瓶中，秋水仙素溶液用量根据滴注部位以上的枣吊数量和长度来定，平均每枣吊用秋水仙素溶液O. 5-0. 8ml ;之后迅速将输液器针头插入枝干孔洞中，用保鲜膜将针头固定在孔中，调整流速，防止药液外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去输液器；(3)花粉的采集和观测到蕾裂期，采集枝干处理部位以上的花蕾，于室内用解剖针快速剥取成熟花粉，置于载玻片上，滴加O. 5%氯化三苯基四氮唑染色液，室温下遮光放置Ih后,镜检2η花粉比例及活力。本专利技术专利的有益效果是，通过枝干滴注秋水仙素，可高效诱导获得高比例的2η花粉，直接用于授粉，可大幅度提高杂交后代中三倍体的出现几率。该技术应用于枣树2η花粉诱导，方法简单便捷，诱导效率显著提高。附图说明图I诱导获得的高活力2η花粉(染成红色的巨型花粉)。具体实施例方式以二倍体枣优良品种‘蜂蜜罐’和二倍体酸枣类型‘邢0604’为试材，于2012年5月7日选择生长健壮的枝干，在枝干的光滑部位打直径为3_的孔洞，深达木质部；用牛皮纸将输液瓶和输液管包严后，将O. 3%的秋水仙素溶液装入输液瓶中，滴注部位以上的枣吊平均每个用秋水仙素溶液O. 5-0. 8ml ;之后迅速将输液器针头插入枝干孔洞中，用保鲜膜将针头固定好，调整流速，并确保药液不外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去输液器，以滴注蒸馏水为对照；于5月25日-5月30日，采集滴注处理部位以上处于蕾裂期的花蕾，于室内用解剖针快速剥取成熟花粉，置于载玻片上，滴加O. 5%氯化三苯基四氮唑染色液，室温下遮光放置Ih后镜检；平均2n花粉比例分别达23. 4%和20. 3%，最高分别达31. 8%和23. 0%，所获2n花粉的活力分别为80%和85%，而对照的平均2n花粉比例分别为O和3%，后者2n花粉活力为85%。权利要求1.一种基于枝干滴注技术简捷高效诱导枣树2η花粉的方法，其特征在于包括以下几个步骤(1)枝干预处理于盛花前18-24d，选择生长健壮的枝干，在枝干光滑部位用钻孔器打一孔洞，深达木质部；(2)2n花粉的诱导首先用牛皮纸或其他遮光材料将输液瓶和输液管包严；然后将O.3%的秋水仙素溶液装入输液瓶中，秋水仙素溶液用量根据滴注部位以上枣吊的数量和长度来定，平均每枣吊用秋水仙素溶液O. 5-0. 8ml ;之后迅速将输液器针头插入枝干孔洞中， 将针头固定好，防止药液外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去输液器；(3)花粉的采集和观测到蕾裂期，采集枝干处理部位以上的花蕾，快速剥取成熟花粉，置于载玻片上，滴加O. 5%氯化三苯基四氮唑染色液，室温下遮光放置Ih后，镜检2n花粉比例及活力。全文摘要，于枣花粉母细胞旺盛减数分裂期，以秋水仙素为诱变剂，用钻孔器对枣树枝干基部进行打孔，然后将秋水仙素药液直接滴注到枝干中，使药液通过木质部向上运输，阻止花粉母细胞减数分裂过程中纺锤丝的形成，诱导花粉染色体加倍，从而获得2n花粉。该方法应用于枣树2n花粉诱导，诱导时间容易掌握，并且可以在1天内对大量枣吊进行2n花粉诱导，并获得高比例的2n花粉，加速枣树有性多倍化育种进程。文档编号A01H1/08GK102972288SQ201210534328公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月12日 优先权日2012年12月12日专利技术者刘孟军, 刘平, 李娇 申请人:河北农业大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于枝干滴注技术简捷高效诱导枣树2n花粉的方法，其特征在于包括以下几个步骤：（1）枝干预处理??于盛花前18?24d，选择生长健壮的枝干，在枝干光滑部位用钻孔器打一孔洞，深达木质部；（2）2n花粉的诱导??首先用牛皮纸或其他遮光材料将输液瓶和输液管包严；然后将0.3%的秋水仙素溶液装入输液瓶中，秋水仙素溶液用量根据滴注部位以上枣吊的数量和长度来定，平均每枣吊用秋水仙素溶液0.5?0.8ml；之后迅速将输液器针头插入枝干孔洞中，将针头固定好，防止药液外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去输液器；（3）花粉的采集和观测??到蕾裂期，采集枝干处理部位以上的花蕾，快速剥取成熟花粉，置于载玻片上，滴加0.5%氯化三苯基四氮唑染色液，室温下遮光放置1h后，镜检2n花粉比例及活力。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘孟军，刘平，李娇，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：